饲料中维生素E的测定
兽药维生素检测项目
兽药维生素检测项目1. 检测项目：兽药中维生素A含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素A含量。
首先，样品中的维生素A必须经提取和纯化。
然后，使用HPLC仪器对纯化后的维生素A进行分离、检测和定量。
最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素A的含量。
2. 检测项目：兽药中维生素E含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素E含量。
首先，通过有机溶剂提取样品中的维生素E。
接着，使用HPLC仪器对提取后的维生素E进行分离、检测和定量。
最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素E的含量。
3. 检测项目：兽药中维生素B1含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）或紫外光谱法分析兽药中维生素B1含量。
首先，对样品进行提取和纯化。
然后使用HPLC仪器或紫外光谱仪对纯化后的维生素B1进行分离、检测和定量。
最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素B1的含量。
4. 检测项目：兽药中维生素C含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）或紫外光谱法分析兽药中维生素C含量。
首先，将样品中的维生素C从样品中提取出来。
接着，使用HPLC仪器或紫外光谱仪对提取后的维生素C进行分离、检测和定量。
最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素C的含量。
5. 检测项目：兽药中维生素K3含量检测参考内容：采用气相色谱法（GC）或高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素K3含量。
首先，对样品进行提取和纯化。
然后使用GC或HPLC仪器对纯化后的维生素K3进行分离、检测和定量。
最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素K3的含量。
饲料中维生素E的快速测定方法
饲料中维生素E的快速测定方法摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。
关键词维生素E 快速测定维生素E又称生育酚，能维持生殖器官的正常机能，提高母畜生殖能力，促进机体代谢，提高免疫力和抗应激水平，维生素E还有抗氧化作用，可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C 的氧化作用，提高维生素A的作用。
GB／T17812—1999是测定饲料中维生素E含量的传统方法，其原理是用碱液皂化样品，使试样中天然生育酚释放出来，再用乙醚提取未皂化的物质。
前处理需经过皂化、提取、浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。
生育酚在碱性环境下极不稳定，在皂化过程中易分解。
在提取过程中要用到大量的乙醚，对操作人员的健康伤害大。
我们经多次试验，用热的甲醇超声样品，使维生素E溶解到甲醇中，将溶液过膜，上机测定，这种方法操作简便，试剂消耗少，回收率稳定。
1 材料和方法1.1 方法原理样品中加入甲醇并于一定温度水浴超声萃取，使维生素E溶解于甲醇中，经高效液相测定，用外标法计算其含量。
1.2仪器设备高效液相色谱仪（安捷伦1100型），配DAD或VWD检测器；超声波振荡器；电子天平：（精确度分别为0.0001g和0.00001g）。
1.3 试剂1.3.1 甲醇（分析纯）1.3.2 维生素E（dl-α-生育酚）标准溶液1.3.2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。
该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。
1.3.2.2 dl-α-生育酚标准工作液：准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。
配制工作液浓度每毫升含维生素E50µg。
1.4 色谱条件色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20µL。
MMFSCNG饲料中维生素E的测定
MMFSCNG0235饲料维生素E 高效液相色谱法MM_FS_CNG_0235饲料中维生素E的测定1适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料、维生素预混料中维生素E 的测定。
检测范围为每千克样品中含维生素E的量在(dl-α-生育酚1mg)以上。
2.原理概要用碱溶液皂化试验样品，去除脂肪，使试样中天然生育酚释放出来并水解，添加的生育酚乙酸酯为游离的生育酚。
乙醚提取未皂化的物质，蒸发乙醚，用正己烷溶解残渣。
提取物注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在280nm处测定，外标法计算维生素E(dl-α-生育酚)含量。
3.主要试剂和仪器主要试剂无水乙醚：无过氧化物过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL10％碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色，或加％淀粉指示液，水层呈蓝色。
该乙醚需处理后使用。
去除过氧化物的方法：乙醚用5％硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇，洗涤两次，重蒸，弃去首尾5％部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定。
乙醇；正己烷：重蒸馏(或光谱纯)； 1,4-二氧六环；甲醇：优级纯；2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)；无水硫酸钠；氢氧化钾溶液：500g/L。
抗坏血酸乙醇溶液5g/L：取抗坏血酸结晶纯品溶解于4mL温热的蒸馏水中，用乙醇稀释至100mL，临用前配制。
维生素E(dl-α-生育酚)标准溶液dl-α-生育酚标准贮备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂(USP)于100mL 棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。
该贮备液浓度每毫升含维生素。
dl-α-生育酚标准工作液：准确吸取dl-α-生育酚贮备液，用正已烷按1∶20比例稀释。
若用反相色谱测定，将,dl-α-生育酚标准贮备液置入10mL棕色小容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。
配制工作液浓度为每毫升含维生素E 50μg。
酚酞指示剂乙醇溶液（10g/L）。
配合饲料中维生素E含量的测定
VE 具有抗氧化功能、 维持动物正常的繁殖机 能、 增强动物机体的免疫功能和抗应激功能等，对 动物具有重要的营养作用，也是配合饲料中不可缺 少的成分。 但是，由于脂溶性维生素不能经尿排出， 所以摄入过量脂溶性维生素易引起中毒，导致动物 代谢障碍和生长受阻。 因此，准确快速测定配合饲 料 中 VE 含 量 ，对 于 优 化 饲 料 配 方 、提 高 养 殖 效 率 具有十分重要的意义。
2 结果与讨论 2.1 色谱分离
称取维生素 E 乙酸酯标准品 10.0mg 于 150mL 带盖密封玻璃瓶中，按上述方法（1.3.1）皂化，最 后 用 50mL 甲 醇 溶 解 。 此 时 维 生 素 E 乙 酸 酯 浓 度 为
图 1 VE 标准样色谱图
200mg/L，再将上述 200mg/L 标准配制成 50mg/L 的 标准工作溶液。
作者简介：杨曦，工程师，研究方向为农产品质量安全 与检测。
* 通讯作者：王华朗，高级畜牧师，研究方向为动物营养 与饲料研究。
批量检测样本，本方法针对国标方法无法进行批处 理样品进行改进， 改进后的检测方法提高工作效 率，适合对大批量样品进行检测。
1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
安捷伦 1260 Infinity 高效液相色谱仪，台式高 速冷冻离心机（德国 SIGMA），旋转蒸发仪（瑞士步 琪），分析天平（感量 0.0001g，德国赛多利斯），恒温 水浴锅（上海沪南科学仪器联营厂）。
标 准 品 ：VE （dl-а- 生 育 酚 乙 酸 酯 ） 标 准 品 ： （Sigma-Aldrich 公司）含量≥99.0%。
试剂：甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水 为超纯水。 1.2 色谱条件
A 色谱柱 XTerra MS C18，4.6×150mm，5μm B 进样量 20μL，柱温 27℃，流速 1.0mL /min C 检测器：紫外检测器 280nm 1.3 试样制备 1.3.1 皂化 称 取 2g（精 确 至 0.0001g）试 样 于 150mL 带 盖 密封玻璃瓶中，加 50mL 抗坏血酸溶液（5g/L），使试 样完全分散，浸湿，加 10mL 氢氧化钾溶液（500g/L）， 混匀。 充入氮气以隔绝空气，摇匀，置于 60℃水浴上 皂化 4h。 皂化后立即放入冰水中冷却。 1.3.2 提取 向皂化液中加入 50mL 乙醚（不含过氧化物），
饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法-最新国标
饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。
本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。
本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。
4.1原理试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。
4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682，一级。
4.2.2无水乙醇：色谱纯。
4.2.3无水乙醇。
4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。
4.2.5甲醇：色谱纯。
4.2.6乙腈：色谱纯。
4.2.7甲酸。
4.2.8L-抗坏血酸。
4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。
4.2.10无水硫酸钠。
4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混匀。
4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。
测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究
测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究裘丞军;任玉琴【摘要】本文旨在建立一种能同时准确测定饲料中维生素A和维生素E含量的方法,试验将样品在碱性条件下65℃水浴超声皂化提取,冰乙酸调pH至中性,乙醇稀释后直接用高效液相色谱法(HPLC)进行测定.结果表明:维生素A在0.036～108 IU/mL线性关系良好,相关系数为1.00000,检出限1000 IU/kg,方法回收率为95.8％～98.8％,RSD为0.8％～4.4％(n=5);维生素E在0.6～125 μg/mL线性关系良好,相关系数为0.99998,检出限15 mg/kg,方法回收率为95.3％～102.2％,RSD为0.8％～ 4.2％(n=5).本方法快速简便,适用于配合料、浓缩料、维生素预混料和复合预混料中同时准确测定维生素A和维生素E的含量,相对于国标法节省了大量的时间和试剂,可应用于日常大批量饲料检测中.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2019(000)011【总页数】5页(P56-60)【关键词】高效液相色谱;维生素A;维生素E;饲料;皂化【作者】裘丞军;任玉琴【作者单位】浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199;浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199【正文语种】中文【中图分类】S816.17维生素A和维生素E是维持动物体正常代谢所必需的脂溶性维生素，具有促进生长，提高免疫力等作用，已经广泛应用于大规模畜禽养殖中。
在饲料添加剂中主要以维生素A乙酸酯和dl-α-生育酚乙酸酯的形式存在，并且通过各种壁材包被保护（杨优敏，2016）。
目前测定饲料中维生素A和维生素E的方法已有国家标准GB/T 17812-2008和GB/T 17817-2010，主要是皂化萃取法和甲醇直接提取法，还有碱性蛋白酶水解法（赵晓华等，2010）。
皂化萃取法操作步骤繁琐，时间长，消耗试剂多；甲醇直接提取法和酶解法结果不稳定，有些包被产品未能被有效提取。
液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E
分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。
饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。
虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。
1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。
1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。
1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。
相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。
1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。
经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。
笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。
高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
赵小阳;孟兆会
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2001(000)015
【摘要】@@ 以维生素E为原料,加入一定的吸附剂制成的50%维生素E粉的测定,国家标准采用硫酸铈标准溶液滴定法测定,分析时间长,易产生误差.我们采用无水乙醇提取,高效液相色谱法测定维生素E的含量,分离效果好,分析速度快,结果准确,现将方法介绍如下.rn1材料与方法rn1.1仪器美国Waters高效液相色谱仪,510高压泵,Millennium 32操作系统,484紫外可调波长检测器.rn1.2试剂本方法所用试剂除另有规定外,均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水.所用试剂有:无水乙醇,甲醇(色谱纯).
【总页数】1页(P24)
【作者】赵小阳;孟兆会
【作者单位】广州惠华动物保健品有限公司;广州惠华动物保健品有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S816
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量 [J], 何荣芬
2.反相高效液相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E的含量 [J], 李旭梅;涂厉标;王真
3.高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E含量 [J], 何荣芬
4.高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量 [J], 何玉川;张亚茹
5.高效液相色谱法测定维生素E粉含量 [J], 商军;华贤辉;王蓓;虞哲高;陈晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定饲料中维生素A_维生素D_3和维生素E
HP LC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E摘 要:建立了以w (C 2H 5OH )=95%乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280n m 和254n m 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。
色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18(25c m ×416mm ×5μm ),流动相为甲醇水,流速为112mL /m in 。
维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在110mg/L ～2010mg/L 、015mg/L ～15.0mg/L 、215mg/L ～5010mg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为013×10-6μg 、0104×10-6μg 、510×10-6μg,相对标准偏差分别为116%、217%、214%,平均回收率分别为99%、102%、98%。
关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素D 3;维生素E;饲料中图分类号:O65717+2 文献标识码:B 文章编号:10062009(2005)02003302To D etect V itam i n A,V it am i n D 3and V it am i n E i n Feed w ith HPLC(Changsha Environm ental P rotection Technology Institute,Changsha,Hunan 410004,China )Abstract:To detect V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E in feed,which t o directly extract withw (C 2H 5OH )=95%glycollic,with HP LC in 280n m and 254n m.Chr o mat ographic colu mn was Hy persil ODSC 18(25c m ×4.6mm ×5μm ),mobile phase was methanol -water,vel ocity of fl ow was 1.2mL /m in .W hen the mass concentrati on of V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E was 1.0mg/L ～20.0mg/L 、0.5mg/L ～15.0mg/L 、2.5mg/L ～50.0mg/L,there had a well lineal relati onshi p.Detecti on li m it was 0.3×10-6μg 、0.04×10-6μg 、5.0×10-6μg.Relative standard deviati on was 1.6%、2.7%、2.4%,recovery rate was 99%、102%、98%.Key words:HP LC;V ita m in A;V ita m in D 3;V ita m in E;Feed收稿日期:20040323;修订日期:20050130作者简介:王安群(1962—),女,江西吉安人,高级工程师,学士,从事环境监测教学工作。
维生素E测定方法
维生素E测定方法 Prepared on 22 November 2020MM_FS_CNG_0793饲料添加剂维生素E粉检验规程滴定法称量法MM_FS_CNG_0793饲料添加剂维生素E粉1.适用范围本方法适用于以维生素E为原料，加入适当的吸附剂制成的维生素E粉，在饲料工业中作为维生素类饲料添加剂。
2. 分子式、分子量分子式：C31H52O3分子量：(按1983年国际原子量)3.技术要求.外观和性状本品为类白色或淡黄色粉末，易吸潮。
.粒度本品90％通过三号筛。
.项目和指标4.过程简述.外观及粒度称取样品50g，用肉眼观察颜色，再用三号筛测定。
.鉴别主要试剂无水乙醇；硝酸。
鉴别方法称取样品约相当于维生素E15mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15min，溶液显橙红色。
.维生素E含量测定主要试剂95％乙醇；无水乙醇；硫酸；二苯胺：1％(g/ml)硫酸溶液；硫酸铈；硫酸铈标准液：L。
按中国药典一九八五版二部附录134页制备和标定。
测定方法称取样品约相当于维生素E (准确至，置于100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度。
振摇30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，准确吸取续滤液50ml，置于回流瓶中，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，准确吸取25ml，加乙醇20ml，水10ml，二苯胺硫酸溶液2滴，用L硫酸铈标准液滴定，滴定速度以每10s 25滴为宜，至溶液由亮黄色转变为灰紫色。
持续10s，即为终点，并将滴定结果用空白试验校正。
计算和结果的表示所含维生素E 相当于标示量的百分数X 1(％)按式(1)计算：)1(1008002364.0)((%)01 ⨯⨯⨯⨯⨯-=KG F V V X 式中：V ──样品溶液消耗硫酸铈标准液的体积，ml ；V 0──空白溶液消耗硫酸铈标准液的体积，ml ；F ──硫酸铈标准液浓度校正系数；──滴定度(每1ml L 硫酸铈标准液相当于的C 31H 52O 3)；8──样品稀释倍数；G ──样品重量，g ；K ──维生素E 的标示量(如5010033100251002010010100,,,,等)。
测定饲料添加剂中维生素A、D3、E含量的新方法
［摘 要］提 出 用 充 入 氮 气 和 放 置 皂 化 过 夜 的 方 法 同 时 测 定 饲料添加剂中维生素 Ａ、Ｄ３、Ｅ 的含量。在试样中加入抗氧化 剂焦性没食子酸、乙醇和氢氧化钾溶 液 后 充 入 氮 气 ， 在 密 封 和避光的条件下放置 ２４ 小时 ， 使 样 品 充 分 皂 化 。 维 生 素 经 萃取和提纯后， 用高效液相色谱仪进行分析。
广东饲料 第 １５ 卷第 ３ 期 ２００６ 年 ６ 月
检测分析
测定饲料添加剂中维生素 Ａ、Ｄ３、Ｅ 含量的新方法
郭茂章， 郭新东， 罗海英， 吴钟玲， 吴玉銮
（ 广州市产品质量监督检验所， 广东 广州 ５１０１１０）
［中图分类号］Ｓ ８１６．１７
［文 献 标 识 码 ］Ｃ
［文章编号］１００５－ ８６１３（ ２００６） ０３－ ００４２－ ０２
２６５ｎｍ， 测 ＶＥ 时用 ２９０ｎｍ。 ２．３ 皂化条件的选择 虽然高效液相色谱测定维生素 Ａ、Ｄ、Ｅ 已是常
用的检测手段， 但方法不够成熟， 主要原因是这几 种 维 生 素 的 热 稳 定 性 、被 氧 化 和 水 解 皂 化 的 难 易 程 度不一样， 且维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 既可以乙酸酯 的形式存在， 又可以棕榈酸酯的形式存在， 这两种 酯的物理性能和化学性质都不一样。而维生素 Ｄ３ 则因含量很低， 不易被检出， 而且饲料添加剂中杂 质很多， 干扰了测定。以上各种因素给检测工作带 来困难。试样的水解皂化条件一直处在探索中， 皂 化不单是把维生素水解， 更重要的是把样品中的脂 肪水解使其变成水溶性物质而被除去。皂化常用的 方法是在沸水中回流 ３０ｍｉｎ、５０℃回流 ４０ｍｉｎ、在磁 搅拌器上加热回流， 或用酶法水解等等， 但皂化效 果都不理想， 因为条件温和时部分难以水解的维生
液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E
分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY 29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。
饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。
虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。
1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。
1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。
1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。
相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。
1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。
经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。
笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。
饲料中维生素A和维生素E含量的测定
饲料中维生素A和维生素E含量的测定1-原理将具有代表性的样品皂化井用己烷抽提后，用HPLC分析。
维生素E在292nm测定，维生素A在325nm测定2-安全措施全部过程中必须戴护目镜特别应注意:-溶剂的挥发性气体，应在通风橱内工作-具腐蚀性的试剂，例如强酸和强碱3-试剂全部使用分析纯试剂;水必须是蒸馏水或相当品质3.1-氮气3.2-粒状氢氧化钾3.2.1-50%(质量/质量)氢氧化钾水溶液3.3-乙醇3.4-己烷3.5-硫酸，密度=1.833.5.1-80%(质量/质量)硫酸溶液3.6-无水硫酸钠3.7-碳酸氢钠3.7.1-5%碳酸氢钠水溶液3.8-HPLC级己烷3.9-HPLC级2-丙醇3.10-全反式维生素A标准物3.1l-维生素E醇类(a-生育酚)标准物，例如，FLUKA公司标准物Ref.No.95 2404-仪器-可在325nm处测定的紫外分光光度汁-常规实验室玻璃器皿和用具-专用特制玻璃器皿(附图-HPLC，装备有泵，自动取样器，进样器和能在325nm处进行检测的检测系统-旋转蒸发仪-水浴锅5-步骤注意:不能在自然光，荧光或氖灯下操作，而且要隔绝与空气的接触(抽提是在充氮条件下进行，玻璃器皿为可吸收紫外线的棕色器皿，照明为白炽灯，或在窗户上装备了紫外滤光屏卜5.1-制备溶液5.1.1-维生素A醇标准液-精确地(土0.01毫克)称取约含有25，侧灿的维生素A乙酸酷(3.10)。
-将维生素A乙酸酷转移至1叨毫升的沸腾管(见附图1)中;-加入25毫升乙醇(3.3)和3毫升氢氧化钾溶液(3.2.1);-在沸腾管「加上冷凝管，在水浴锅上沸腾叨分钟;-冷却，用己烷(3.4)抽提数次. 用己烷(3.4)稀释，使最终浓度达10-15 IU/毫升;-准确测定该溶液所含有的视黄醇浓度，测定方法是用光径为1厘米的石英比色怀测定此溶液在325皿处的光吸收值(A)，用已烷(3.·4)作空白对照:用公式计算:含量C(m/毫升卜Axl8·35.1.2-维生索E醇标准物溶液-精确地称取25毫克=0，01毫克的维生素E醇(3.11放入50毫开容量瓶;-用已烷(3.4)定容至刻度;-用取液器取该溶液5毫升，放入另一个50毫升容量瓶中-用已烷(3.4)定容至刻度;5.1.3-待测样品液-溶液A和溶液E-称取研磨的极细的样品200克+-0.1克，放人2升的容量瓶中;-加入1升乙醇(3.3)和100毫升氢氧化钾溶液(3.2.1);-把容量瓶称重;-记录质量M1;-摇动;-在容量瓶「加上水流冷凝管.将其放在容量瓶加热器上加热，煮沸25分钟;-用水流冷却至溶液平静为止;-加入乙醇(3.3)使其质量重新达到MI-取上清液50毫升放人沸腾管(附图1)中;-加入40毫升水月4x30毫升已烷(3.4)抽提;-将抽提物放人分液漏-斗，用2x100毫升冰洗涤至中性;-在无水硫酸钠(3.6)上过滤-蒸发毛干燥，迅速溶解于25毫开己烷;-取5毫升该溶液用于维生素A的测定:该溶液为溶液A.-在剩下的20毫升溶液中加入20毫升已烷，转移至100毫升沸腾管中; -加入10毫升80%硫酸溶液(3.5.1);-振荡完全;-待溶液完全静止后，将巳烷层转移至分液漏斗;-用4x30毫升巳烷(3.4)抽提硫酸层-把所有己烷抽提液放人分液漏斗中·用5毫升无水碳酸氧钠溶液(3.7.1) 冲洗，然后用2x200毫升水冲洗直至中性;-在无水硫酸钠上过滤;-蒸发至干燥，然后迅速用准确容量的己烷(Ve)溶解(记录Ve)使最终维生素E醇类的浓度约为0.05毫克/毫升:该溶液为溶液E.5.2-色谱分析-维生素A-按附图2所示加入标准液(5.1.1)不溶液A.-维生素E-按附图2所述注入标准液A(5.1.2)和溶液E6-计算结果维生素A(IU/克)变量:C=标准液(5·1·1)的浓度含量，弟位为因际单位IU叨/毫开Ar(反式)=朋标准液(5·1·1)所得到的全反式视黄醇的蜂的面积Ae(反式)=溶液A所得到的反式视黄醇的峰的面积Ae(顺式)=溶液A所得到的顺式视黄醇的峰的面积Ve=待测液的最终体积25毫升)Me=样品的质量，单位为克1.087=13-顺式视黄醇的响应参数1100=皂化反应中的总体积50=抽提所用的体积C[Ae(反式)+1.087xAe(顺式)lx Ve x1100维生素A含量(IU/克) =Ar(反式)x 50 xMe维生素E乙酸醋(毫/肘克)变量:P=维生素E醇类标准液(3.11)的浓度含量Mr(反式)二溶液(5.1.2) 中所含的维生素邱享类标准物的质量，单位为毫克Ae=待测溶液E所得到的维生素E的峰的面积Ve=侍测溶液酣勺最终体积Vr=际准液(5·1·2)的最终体积(通常为5叨毫升)Ar=用际准液(5·1·2)所得到的维生素E醇类物的峰的面积Me=样品的质最，兑位为克1100=皂化反应中的总体积50=抽提所用的体积1.25=纯化之前的体积与硫酸抽提体积之比，本文中应为25:20□·251.1=分子最的校正系数(维生素E乙酸酯/维生素E醇类)P x Mr x Ae x Ve x 1100 x 1·25 x 1.1维生素E含最(毫克/克) =Vr x Ar x Me x 50。
上海 高效液相色谱仪对(HPLC)饲料中维生素E的检测方案
饲料中维生素E的高效液相测定一、简介近期，随着经济的复苏，维生素类饲料添加剂销售量大大增加，尤其是维生素E饲料添加剂，所以饲料中维生素E的检测就显得尤为紧急和重要。
南京科捷应用检测部参考国标（GB/T 17812-2008），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪经实践检测可提供饲料中维生素E的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，仅供广大用户参考。
二、上海LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置:LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp 系统控制器：1台7725i手动进样阀：1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、上海LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点：LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
添加剂预混合饲料维生素E粉的检验操作规程
添加剂预混合饲料维生素E粉的检验操作规程Vitamin E powder［质量标准依据］GB/T7293-2006化学名：DL- a生育酚醋酸酯分子量：472.75 （按1999年国际相对原子质量表）1性状本品为类白色或淡黄色粉末或颗粒状粉末，易吸潮。
3干燥失重3.1测定步骤取维生素E粉约1g〜2g（精确至0.0002g）,置于已在105C 烘箱中干燥至恒量的称瓶中，打开称量瓶盖，于105 C干燥至恒量。
3.2计算和结果的表示干燥失重X1以质量分数％表示，计算：g - m2为=1 2100m式中：X1――试样的干燥失重（%）m1 干燥前的试样加称量瓶质量，单位为克（g）m2――干燥后的试样加称量瓶质量，单位为克（g）m试样质量，单位为克（g）4粒度4.1测定步骤称取维生素E粉适量，倾入分析筛中（孔径为0.84mm）中，振摇数分钟，取筛下物称量。
4..2计算和结果表示粒度以筛下物X2的质量分数（％）表示，计算:X2=匹100m2式中：X2 ------------- 粒度%m i --------- 筛下物质量，单位为克（g）m2——试样质量，单位为克（g）5维生素E含量测定高效液相色谱法5.1标准溶液制备取维生素E标准品约0.1g,精确至0.0002g,置250ml棕色量瓶中，加色谱甲醇适量溶解，用色谱甲醇稀释至刻度，摇匀5.2试样溶液制备取维生素E 粉约0.2g （约相当于维生素 E 粉0.1g ，精确至 0.0002g ）,置250ml 棕色量瓶中，加色谱甲醇适量，置超声波水 浴助溶30min,冷却至室温，用色谱甲醇稀释至刻度，充分摇匀； 经0.45 ^m 滤膜滤过，滤液作为试样溶液。
5.3色谱条件与系统适应性试验5.3.1色谱条件色谱柱：C18（长：150mm ,内径：4.5mm ，粒度：〜5 ^m ） 流动相：甲醇+水=98+2流速：1.2ml/min柱温：25 C +2 °C检测波长：285nm进样量：20 ^15.3.2测定步骤取标准溶液及试样溶液分别注入液相色谱仪， 得到色谱峰面 积（Au , A1）,用外标法计算。
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维生素 E 具有广泛的生理功能，对于维护畜禽体内正常的生理功能有重要的意义。维 生素 E 能改变动物繁殖能力，增加免疫功能，促进细胞内呼吸，还可以保持体内的不饱和 脂肪酸，巯基化合物和巯基酶等免受氧化破坏，因而 VE 具有抗氧化作用。VE 是饲料行业 中重要的维生素类饲料添加剂。本实验参照 GB/T17812-2008《饲料中维生素 E 的测定》， 采用直接提取法，对 4％蛋鸡产蛋期复合预混料进行测定。
仪器配置
高压泵： 柱温箱： 检测器： 工作站：
C18 柱，250 mm×4.6 mm，5 μm 甲醇 1.0 mL/min 40 ℃ 285nm 20 μL
P-101A 单泵或升级为双泵 LC5510 柱温箱 LC5510 检测器 LC5510 液相色谱工作站
在线脱气机（选配）： DM-101 自动进0µg/mL 标样谱图
组分名称 维生素 E
图 2 饲料样品谱图
保留时间（min） 18.45
实验所需设备
设备名称 超声波水浴 溶剂过滤器
电子天平
C18 色谱柱
规格 —— —— 精度 0.0001g
设备名称 针式过滤器 一次性无针头注射器
规格 0.45μm，有机系
5mL/1mL
250 mm×4.6 mm， 5 μm
参照标准：GB/T17812-2008 样品溶液制备： 称取饲料样品 1g 左右（精确至 0.0001g）于 50mL 棕色容量瓶中，
加入约 40mL 甲醇，在 65℃超声波水浴中超声提取 30min，冷却
至室温，用甲醇定容至刻度，充分摇匀过滤待测。
色谱条件
色谱柱： 流动相： 流速： 柱温： 检测波长： 进样量：
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