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病毒中和试验测定法

1.固定病毒稀释血清法(α法) 本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒毒价,试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID50,再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID50/ml的病毒液,混匀后37℃1h,每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔,每孔0.2ml。5%C02培养箱培养一定时间后,记录出现CPE孔数,以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下:

Log TCID50=L+d(S-0.5)

(TCID50用对数计算,L为病毒最低稀释度的对数。d为组距,即稀释系数,在10倍系列稀释则为-1,S为各组CPE与接种数比值之和)

50%中和试验举例

L=-1,d=-0.3,S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=4.5

代入Karber公式:LogND50= -1-0.3*(4.5-0.5)=2.2

该抗血清ND50(半数中和单位)为10-2.2,即1/160,则其中和价为160 ND50/ml,可以简写成160。

2.固定血清稀释病毒法(β法) 本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释,分列于2排无菌管,第一排加等量正常血清(对照组);第二排加待检血清(中和组),混匀后,置37℃1h,分别接种细胞板孔(或鸡胚、实验动物)进行培养,记录CPE(鸡胚、动物死亡数),计算TCID50(或LD50),按下式计算中和指数。

中和组TCID50(或LD50)

中和指数= ————————————

对照组TCID50(或LD50)

查反对数,即得该待检血清的中和指数。通常中和指数>50者判为阳性,10-49为可疑,<10者为阴性。例如:

对照组滴度的LD50=10-6.5

中和组滴度的LD50=10-4.5

中和指数=10(6.5-4.5)=102.0=100

中和指数的对数Log=Log100=2.0

一般来说,以10倍稀释进行滴度测定,Log10=1。因此小于10(11.7)则是有意义的.

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