第三章细菌感染实验室诊断下赏析
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– 细菌菌落的描述 大小、形状、突起或扁平、 边缘、颜色、表面、透明度
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（1）光滑型菌落（S型菌落）
– 表面光滑、湿润、边缘整齐ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（2）粗糙型菌落（R型菌落）
– 表面粗糙、干燥、边缘不齐
（3）粘液型菌落（M型菌落）
– 菌落粘稠、有光泽、似水珠样
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
二、分离培养
（一）细菌的分离——无菌技术
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
移种或接种的基本步骤
（1）右手持接种工具，在火焰上烧灼灭菌。 （2）左手拿起标本盒或平皿、试管等。 （3） 用接种工具挑取适量标本或细菌。 （4）根据目的选择不同的接种方法 （5） 接种完毕，在火焰上烧灼接种工具，放
• 用途 肠杆菌科细菌鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 尿素分解试验
• 原理
尿素 NH3+CO2+H2O • 培养基
(NH4)2CO3
尿素肉汤或尿素琼脂培养基
• 结果 阳性：红色
• 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
5. 苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理 苯丙氨酸
（ 6）灭菌 • 高压蒸汽灭菌
– 无糖：103.4kPa 121.3℃15~30min – 含糖： 68.4kPa 115℃ 15min
• 流动蒸汽灭菌法 血清、牛乳、鸡蛋
• 间歇蒸汽灭菌法 （血清凝固器）
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（7）鉴定（质量检查）
– 无菌试验：判定是否灭菌合格。 – 效果检定：判断培养基是否符合要求。
回原处。
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
常用的接种方法
（1）平板划线法
– 分区划线法 用于杂菌量较多的标本 – 连续划线法 用于杂菌不多的标本
（2）琼脂斜面接种法—纯培养 （3）穿刺法—观察细菌动力 （4）液体培养基接种法 —增菌 （5）倾注平板法—计数细菌数量 （6）涂布法 —纸片法药敏试验
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）细菌的培养方法
1.需氧培养法 普通培养 2.二氧化碳培养 （1）二氧化碳培养箱 （2）烛缸法 （3）化学法 3.厌氧培养
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（三）细菌的生长现象
1.固体培养基上的生长现象
– 菌落：单个细菌在培养基上分裂繁殖成一堆 肉眼可见的细菌集团。 • CFU：菌落形成单位，活菌计数用
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌与非发酵菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
3. β-半乳糖苷酶（ONPG ）试验
• 原理 ONPG无色，经β-半乳糖苷酶水解后生 成黄色的邻硝基酚
• 方法 （1）在含ONPG的培养基中接种纯种细菌 （2）制成菌悬液，加入甲苯，再加ONPG试剂 • 结果 阳性：变黄（20~30min） • 应用 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
1.明胶液化试验 • 原理：某些细菌可产生明胶酶，分解明
胶，使其失去凝固能力。 • 方法：将待检物接种于明胶培养基22 ℃
培养7天 • 结果：培养基呈液化状态为阳性 • 应用：肠杆菌科细菌鉴别
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 七叶苷水解试验
• 原理 葡萄糖
七叶苷
七叶素+Fe2+
黑色化合物
• 培养基 七叶苷、胆汁七叶苷培养基
• 结果 阳性：培养基变黑
• 用途 鉴别肠球菌、G-杆菌及厌氧菌
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5. 甲基红（methyl red MR）试验
• 原理
葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 甲基红 -
（8）保存 4 ℃冰箱保存，一周左右
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
注意事项
1. 器皿：中性硬质玻璃器皿 2. 化学药品：均需化学纯，各组分准确称量，
正确溶解 3. 准确测定培养基酸碱度（尤其含有指示剂的
培养基），酸碱度应冷却后测定 4. 保持澄清 5. 灭菌时间不宜过长，不宜反复灭菌 6.含糖培养基灭菌后可出现变酸、变色现象
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
Sugar Fermentation
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
2. 葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）
• 原理 氧化型 专性需氧菌
发酵型
产碱型 不分解葡萄糖
• 培养基 Hugh-Leifson二氏培养基
• 结果
氧化管 发酵管
氧化型 变黄 不变
发酵型 变黄 变黄
产碱型 不变 不变 第三章细菌感染实验室诊断下赏析 （阴性）
苯丙酮酸+10%氯化铁
绿色化合物 • 培养基 苯丙氨酸琼脂培养基 • 结果 阳性：绿色 • 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
6. 氨基酸脱羧酶试验
• 原理
氨基酸
胺+ CO2 培养基变碱
• 培养基 氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照
• 结果 阳性：紫色 阴性：黄色
2. 吲哚（indol）试验 • 原理 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚
↑ 吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛） • 培养基 蛋白胨水培养基 • 结果 阳性：红色
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3. 硫化氢试验
• 原理 含硫氨基酸→ H2S+硫酸亚铁→FeS黑色
醋酸铅→ PbS黑色 • 培养基 醋酸铅培养基 • 结果 阳性：黑色沉淀 • 用途 肠杆菌科菌属间的鉴定
粘 液 型 菌 落
卷发样菌落
第三章细菌感染实验室诊断下赏析粗糙型菌落（L-J）
2.液体培养基中的生长情况
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
三、细菌生化反应鉴定
（一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 • 原理 各种细菌酶系不同，分解糖（醇、苷）
的能力各异，产物也不同。 • 培养基 单糖、双糖、三糖、多糖 • 应用 肠道杆菌科细菌的鉴定
葡萄糖→丙酮酸 →各种酸
甲基红 +
• 培养基 葡萄糖蛋白胨水
• 结果 阳性：红色
阴性：黄色
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌
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6. VP（Voges-Proskauer）试验
• 原理 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰 ＋肌酸＋ α萘酚→红色化合物 • 培养基 葡萄糖蛋白胨水 • 结果 阳性：红色 • 应用 鉴别肠杆菌科细菌
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（1）光滑型菌落（S型菌落）
– 表面光滑、湿润、边缘整齐ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（2）粗糙型菌落（R型菌落）
– 表面粗糙、干燥、边缘不齐
（3）粘液型菌落（M型菌落）
– 菌落粘稠、有光泽、似水珠样
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
二、分离培养
（一）细菌的分离——无菌技术
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
移种或接种的基本步骤
（1）右手持接种工具，在火焰上烧灼灭菌。 （2）左手拿起标本盒或平皿、试管等。 （3） 用接种工具挑取适量标本或细菌。 （4）根据目的选择不同的接种方法 （5） 接种完毕，在火焰上烧灼接种工具，放
• 用途 肠杆菌科细菌鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 尿素分解试验
• 原理
尿素 NH3+CO2+H2O • 培养基
(NH4)2CO3
尿素肉汤或尿素琼脂培养基
• 结果 阳性：红色
• 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
5. 苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理 苯丙氨酸
（ 6）灭菌 • 高压蒸汽灭菌
– 无糖：103.4kPa 121.3℃15~30min – 含糖： 68.4kPa 115℃ 15min
• 流动蒸汽灭菌法 血清、牛乳、鸡蛋
• 间歇蒸汽灭菌法 （血清凝固器）
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（7）鉴定（质量检查）
– 无菌试验：判定是否灭菌合格。 – 效果检定：判断培养基是否符合要求。
回原处。
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
常用的接种方法
（1）平板划线法
– 分区划线法 用于杂菌量较多的标本 – 连续划线法 用于杂菌不多的标本
（2）琼脂斜面接种法—纯培养 （3）穿刺法—观察细菌动力 （4）液体培养基接种法 —增菌 （5）倾注平板法—计数细菌数量 （6）涂布法 —纸片法药敏试验
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）细菌的培养方法
1.需氧培养法 普通培养 2.二氧化碳培养 （1）二氧化碳培养箱 （2）烛缸法 （3）化学法 3.厌氧培养
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（三）细菌的生长现象
1.固体培养基上的生长现象
– 菌落：单个细菌在培养基上分裂繁殖成一堆 肉眼可见的细菌集团。 • CFU：菌落形成单位，活菌计数用
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌与非发酵菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
3. β-半乳糖苷酶（ONPG ）试验
• 原理 ONPG无色，经β-半乳糖苷酶水解后生 成黄色的邻硝基酚
• 方法 （1）在含ONPG的培养基中接种纯种细菌 （2）制成菌悬液，加入甲苯，再加ONPG试剂 • 结果 阳性：变黄（20~30min） • 应用 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
1.明胶液化试验 • 原理：某些细菌可产生明胶酶，分解明
胶，使其失去凝固能力。 • 方法：将待检物接种于明胶培养基22 ℃
培养7天 • 结果：培养基呈液化状态为阳性 • 应用：肠杆菌科细菌鉴别
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 七叶苷水解试验
• 原理 葡萄糖
七叶苷
七叶素+Fe2+
黑色化合物
• 培养基 七叶苷、胆汁七叶苷培养基
• 结果 阳性：培养基变黑
• 用途 鉴别肠球菌、G-杆菌及厌氧菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
5. 甲基红（methyl red MR）试验
• 原理
葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 甲基红 -
（8）保存 4 ℃冰箱保存，一周左右
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
注意事项
1. 器皿：中性硬质玻璃器皿 2. 化学药品：均需化学纯，各组分准确称量，
正确溶解 3. 准确测定培养基酸碱度（尤其含有指示剂的
培养基），酸碱度应冷却后测定 4. 保持澄清 5. 灭菌时间不宜过长，不宜反复灭菌 6.含糖培养基灭菌后可出现变酸、变色现象
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
Sugar Fermentation
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
2. 葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）
• 原理 氧化型 专性需氧菌
发酵型
产碱型 不分解葡萄糖
• 培养基 Hugh-Leifson二氏培养基
• 结果
氧化管 发酵管
氧化型 变黄 不变
发酵型 变黄 变黄
产碱型 不变 不变 第三章细菌感染实验室诊断下赏析 （阴性）
苯丙酮酸+10%氯化铁
绿色化合物 • 培养基 苯丙氨酸琼脂培养基 • 结果 阳性：绿色 • 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
6. 氨基酸脱羧酶试验
• 原理
氨基酸
胺+ CO2 培养基变碱
• 培养基 氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照
• 结果 阳性：紫色 阴性：黄色
2. 吲哚（indol）试验 • 原理 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚
↑ 吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛） • 培养基 蛋白胨水培养基 • 结果 阳性：红色
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
3. 硫化氢试验
• 原理 含硫氨基酸→ H2S+硫酸亚铁→FeS黑色
醋酸铅→ PbS黑色 • 培养基 醋酸铅培养基 • 结果 阳性：黑色沉淀 • 用途 肠杆菌科菌属间的鉴定
粘 液 型 菌 落
卷发样菌落
第三章细菌感染实验室诊断下赏析粗糙型菌落（L-J）
2.液体培养基中的生长情况
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
三、细菌生化反应鉴定
（一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 • 原理 各种细菌酶系不同，分解糖（醇、苷）
的能力各异，产物也不同。 • 培养基 单糖、双糖、三糖、多糖 • 应用 肠道杆菌科细菌的鉴定
葡萄糖→丙酮酸 →各种酸
甲基红 +
• 培养基 葡萄糖蛋白胨水
• 结果 阳性：红色
阴性：黄色
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
6. VP（Voges-Proskauer）试验
• 原理 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰 ＋肌酸＋ α萘酚→红色化合物 • 培养基 葡萄糖蛋白胨水 • 结果 阳性：红色 • 应用 鉴别肠杆菌科细菌