抑菌效力检查记录
抑菌效力检查记录
检品名称： ________________________ 批号：__________________________ 来源： _________________________
规格： ____________________________ 检验日期：______________________ 报告日期： ___________________
检验依据： ______________________________________
1、培养基、试剂批号：
实验组：取包装完整的供试品5份，直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌％无菌氯化钠溶液5份，直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量（为第0 d含菌数）；
置20-25 C避光贮存，于第14天，第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数
（备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。根据存活菌数测定结果，计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。）、判断标准：
项目f'
标准
减少的lg值
14d28d 细菌3NI
胰酪大豆胨琼脂培养基：_________________________ %无菌氯化钠溶液：__________________________
胰酪大豆胨琼脂培养基：_________________________ %无菌氯化钠溶液：__________________________
胰酪大豆胨琼脂培养基：_________________________ 化钠溶液：沙氏葡萄糖琼脂培养基:
沙氏葡萄糖琼脂培养基:
沙氏葡萄糖琼脂培养基: % 无菌氯
2、试验菌批号、有效期:
真菌
NI
注：NI :未增加，是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过
无菌检查方法学验证
无菌检查方法学验证 1. 概述 将规定量的供试品按无菌检查法中的薄膜过滤法进行操作,并接种小于100cfu 的试验菌,同时设置阳性对照,按规定温度培养3~5 天,与各相应的阳性对照管比较: 如含供试品各管中的试验菌均生长良好,则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用,可按此法进行供试品的无菌检查;如含供试品的任一管中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量或使用中和剂等方法消除供试品的抑菌作用,并再重新进行验证试验。 2. 验证前提条件 供试品的选择原则:相同配方,不同规格的制品,选择其中装量最大的制品进行验证。种类相同,含量不同的制品,选择含量最高的制品进行验证。照此原则,多规格制 品按下表选择供试品进行验证。 3. 验证方法 3.1菌液制备 3.1.1细菌菌液制备程序 ①取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的冻干菌种管各一支，分别在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后，吸出滴入营养琼脂斜面上,使均匀分布，置30~35C培养18h~24h。用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于营养琼脂培养基斜面上，于30~35C培养18h~24h o 同法操作,培养得第3代培养物。 ②取生抱梭菌的冻干菌种管一支,在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养 肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入胃酶肉肝疱斜面上,使均匀分布,置30~35C培养18h~24h o用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于胃酶肉肝疱斜
面上，于30~ 35°C培养18h~24h。取生抱梭菌的第二代新鲜培养物至硫乙醇酸盐流 体培养基中,30~35C培养18h~24h,得第3代培养物。 ③分别取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的第3代营养琼脂斜面新鲜培养物，用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后用5.0ml吸管将洗液移至另一无菌试管中,用电动混合器混合20s或在手掌上振敲80次,以使细菌悬浮均匀,得初步菌悬液。 ④取初步制成的上述菌悬液和生抱梭菌第3代新鲜培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至不高于标准比浊管的浓度，即得每1ml含菌数小于100cfu验证细菌菌液。 3.1.2抱子悬液制备程序 ①取白色念珠菌和黑曲霉的冻干菌种管各一支,分别在无菌操作下打开,以毛细 吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入改良马丁琼脂斜面上，使均匀分布，置23~28C培养5~7天。用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于改良马丁琼脂斜面上,同上述条件培养得第2代培养物。取第2代培养物,同法操作,得第3代培养物。 ②用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml0.9%无菌氯化钠溶液加入上述第三代新鲜斜 面试管内,反复吹吸,洗脱抱子,用管口带有薄的无菌棉花或纱布的毛细吸管吸出抱子悬液至无菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至不高于标准比浊管的浓度,即得每1ml含菌数小于100cfu验证抱子悬液。 3.2 薄膜过滤 3.2.1 供试品试验组 取规定量供试品,按《无菌检查标准操作细则》薄膜过滤后,如为不含防腐剂供试品，则往其中一只滤筒内接入100ml改良马丁培养基，往另一只滤筒内各接入100ml 的硫乙醇酸盐流体培养基,用5ml灭菌注射器抽取1ml验证菌液，从集菌培养器胶管处注入培养基中;如为含防腐剂供试品,则待供试品过滤完后,连续 3 次用
《中国药典》2015版-抑菌效力检查法
1121 抑菌效力检查法
抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。抑菌效力检查法 系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也 可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌效力， 那么应根据制剂特性 （如水溶性制剂） 添加适宜的抑菌剂， 以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染 和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的 GMP 管理，不能作为 非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径， 也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前 的生物负载的手段。所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低 有效量。同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有 害的浓度。 抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影 响而变化， 因此，应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 培养基 培养基的制备 胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、 沙氏葡萄糖琼脂培养基 照无菌检查法（通则 1101）制备。 培养基的适用性检查 抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 菌种 试验所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的冷
冻干燥菌种为第 0 代） ，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株 的生物学特性。培养基适用性检查的菌种及新鲜菌体培养见表 1。 表 1 培养基适用性检查、方法适用性试验、抑菌效力测定用的试验菌培 养条件 试验菌株 试验培养基 培养温度 培养时间
药品抑菌效力测定操作规程
1 目的： (2) 2 使用范围： (2) 3 责任者： (2) 4 正文 (2) 4.1 概述: (2) 4.2 产品分类 (2) 4.3 抑菌效力判断标准 (2) 4.4 实验仪器及器具： (3) 4.5 实验材料 (3) 4.6 菌种 (3) 4.7 菌液制备： (3) 4.8 供试品接种 (4) 4.9 存活菌数测定 (4) 4.10 结果判断 (4) 4.11 记录及报告的书写 (5) 4.12 注意事项 (5) 5 相应文件 (5) 6 附件 (5) 7 文件变更历史 (5) 8 参考文献 (5) 文件颁发部门 质量检验部 复印件分发单位 质量保证部、质量检验部、研发部
1 目的： 规范产品抑菌效力测定正确操作，确保实验结果准确可靠。 2 使用范围： 适用于需要测定抑菌效力的各类产品。 3 责任者： 质量检验部经理、主管、检验员 4 正文 4.1 概述: 抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。 4.2 产品分类 4.3 抑菌效力判断标准
注：表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5 lg。 4.4 实验仪器及器具： 净化工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、电冰箱、接种环、酒精灯、培养皿（9cm）、天平、锥形瓶、量筒、试管、硅胶塞、刻度吸管、钢锥、消毒缸、试管架、记号笔、酒精棉球、乳胶手套、薄膜过滤器、滤膜 4.5 实验材料 酪蛋白大豆消化琼脂培养基、沙氏--葡萄糖琼脂培养基、酪蛋白大豆消化肉汤培养基、沙氏--葡萄糖肉汤培养基、pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌 4.6 菌种 试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。若需要，制剂中常见的污染微生物也可作为试验菌株。 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26 003〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕 4.7 菌液制备： 接种铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基或胰酪胨大豆琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时，接种白色念珠菌于沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基中，20～25℃培养24～48小时。若为琼脂培养物，加入适量的0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂表面的培养物洗脱，然后用适宜方法吸出菌悬液至无菌试管内，加入适量的0.9%无菌氯化钠溶液并采用比浊法制成每1ml含菌数约108cfu
无菌检查法-2015版中国药典
无菌检查法-2015版中国药典 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 1. 硫乙醇酸盐流体培养基 酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液1.0ml 硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g (或硫乙醇酸) （0.3 ml) 纯化水1000ml 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。 2. 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪胨17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氢二钾2.5g 葡萄糖（一水合/无水）2.5g （2.3g）纯化水1000mL 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄
无菌检验验证方案样本
类别：编号: 部门：页码: 无菌检验方法验证 版次：□新订口替代: ________________ 制定人: ___________________ ____________ H H 日审批会签: _____________________________________________
1.1 确认所用的检查方法适用于一次性活检钳的无菌检查。 1.2 确认检查结果的准确性、可靠性、重复性和可操作性及检查方法的完整 性。 2. 验证范围 适用于我公司生产的一次性活检钳无菌检验。 3. 检验依据 《中国药典》附录无菌检查法 ISO11737-2: 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分: 确认灭菌过程的无菌试验 GB/T14233.2- 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分: 生物学试验方法 4. 验证器材 4.1 检验环境: 无菌检查应在环境洁净度10000 级下的局部100 级的单向流空气 区域内进行操作。 4.2 设备: 医用净化工作台、生物安全柜、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、 电热干燥箱、霉菌培养箱、数显生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH 计、冰箱、恒温水浴锅、显微镜等。 4.3 培养基及稀释液: 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、pH7.0 氯化钠- 蛋白胨缓冲液、0.1% 蛋白胨水溶液、营养琼脂。 4.4其它实验材料：微孔滤膜（孔径w 0.45um,直径约50mm）、无菌过滤杯、无 菌剪刀、无菌镊子、无菌钳子、无菌手套、吸管（1ml和10ml）、酒精灯、三角烧瓶、接种环、培养皿。
5.1 原理: 活检钳的形状为不溶物, 为微生物转移更彻底, 特选用无菌检查法中的 薄膜过滤法。 5.2 设备器材: 验证中所用器材、设备已经过国家计量单位鉴定合格并有鉴定证书。 5.3 培养基: 验证中所用培养基以经过培养基灵敏度实验检测合格。 5.4 操作步骤: 5.4.1 供试品的取样按照GB/T 2828.1- 相关规定进行逐批取样。 5.4.2 将所需物品, 供试品表面消毒, 经过传递窗, 紫外线照射半小时. 无菌室紫 外线消毒半小时。 5.4.3 操作人员用洗手液、自来水清洗双手, 关闭紫外灯, 换拖鞋, 脱外衣放入衣 柜, 穿洁净白大衣, 进入缓冲间, 再用洗手液、纯化水清洗双手, 用75% 乙醇对手进行消毒, 穿戴无菌衣、帽、口罩、手套等。 5.4.4 进入菌检室, 打开医用洁净工作台风机, 运行至少15分钟以上。 5.4.5 将所需物品由传递窗取出, 两只消毒液桶分别放置于菌检洁净工作台一侧, 其余物品放置于传递窗一侧的方形桌上, 剥去牛皮纸外包装。 5.4.6 医用洁净工作台内点燃酒精灯。打开3个养琼脂平板, 置于医用洁净工作 台的不同位置。 5.4.7 取供试品, 在医用洁净工作台内, 打开包装袋, 小心将供试品取出, 将其剪成 约10cm的小段，浸入500ml 0.1%无菌蛋白胨水溶液中，充分振摇作为供 试液。 5.4.8 将供试液平均转入三个薄膜过滤器的滤杯中, 开启电动吸引器开关进 行过滤，用pH7.0蛋白胨-氯化钠缓冲液每次100ml冲洗滤膜三次，用平口镊子夹取滤膜（过程保持滤膜的完整性） , 一张转移到100ml 改
无菌检查法验证方案
XXX无菌检验方法学验证方案 编号：VP.SV.039.00
目录 验证方案的审批 验证小组名单 验证实施进度 技术性文件 引言 1．概述 2．验证目的 3．职责 无菌检查方法学的确认 再验证周期
验证方案审批
验证小组名单 验证实施进度 技术性文件
引言 1.概述 1.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH规定，当建立药品的无菌检查方 法时，需进行方法学的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的检测。当药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检测方法应重新验证。 2.验证目的： 2.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH无菌检查方法要求，通过试验， 寻找合适的材料、条件和方法，最终确定氧氟沙星滴眼液的检验方法，并将其定为日常检测的正式方法。 3.职责 3.1验证办 3.1.1负责验证方案的审批。 3.1.2负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施。 3.1.3负责验证数据及结果的审核。 3.1.4负责验证报告的审核。 3.1.5负责再验证周期的确认。 3.2质量监控部 3.2.1负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。 3.2.2负责仪器、仪表、量具的校正。 3.2.3负责取样及样品检验。 3.2.4负责收集各项验证、试验记录，对结果进行分析，起草验证报告，报验证办。 3.2.5负责拟订验证方案。 3.2.6负责组织试验所需设备。 3.2.7负责按照验证方案里各项操作步骤进行操作。 3.2.8负责保证设备的正常运转。
无菌检查方法学的确认 1.验证环境、设备及实验前准备： 1.1无菌室内（无菌检查应在环境洁净度B级下的局部洁净度A级的单向流空气区域或 隔离操作器内完成。由QA人员定期按国家相关要求进行环境监控。 1.2仪器和设备：①GSP-9080MBE型隔水式电热恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗 设备厂）；②生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；③AL204型电子天（梅 特勒—托利多仪器有限公司）；④GZX-9070MBE型电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实 业有限公司医疗设备厂）；⑤YXQ-LS-50SI型高压蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公 司医疗设备厂）；⑥HTY-2000A集菌仪、全封闭集菌培养器可重复使用集菌培养器（杭 州高得·泰林医疗器械有限公司）；⑦超净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备 厂)；。⑧微孔滤膜（孔径0.45μm直径50mm）… 1.3供试品： 1.4所需培养基： 1.4.1硫乙醇酸盐流体培养基（细菌培养）；批号：050104；灵敏度：应符合定 厂家：北京三药科技开发公司； 改良马丁培养基（真菌培养）；批号：050106 ；灵敏度：应符合规定 厂家：北京三药科技开发公司； 营养琼脂培养基（分离单个菌落及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司； 改良马丁琼脂培养基（培养真菌及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司； 1.5稀释液、缓冲液： 0.9%氯化钠溶液；PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 (配制方法参照chp2005附录—90页) 1.6验证用菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]；大肠埃希菌[CMCC（B）44 102] 生孢梭菌[CMCC（B）64 941]；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]；黑曲霉[CMCC（F） 98 003]；白色念珠菌[CMCC（F）98 001]。（以上菌种均由湖北省药品检验所提供）1.7培养基的无菌检查：培养基配制好并采取验证合格的灭菌程序灭菌后随机取 5瓶 (管)，培养 14 天，结果应无菌生长。 2.方法学验证: 2.1简要方法说明：本品为喹诺酮类抗生素，通过抑制细菌的DNA旋转酶和DNA复制而发
抑菌效力检查法-2015中国药典
抑菌效力检查法-2015中国药典 录入时间:2014-9-16 9:44:02 来源：国家药典委员会 抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。抑菌效力检查法系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP 管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低. 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂 培养基 培养基的制备 胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基?? 照无菌检查法（通则1101）制备。 培养基的适用性检查 抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。培养基适用性检查的菌种及新鲜菌体培养见表1。
无菌检查法方法验证记录
无菌检验方法验证记录 1.适用范围 本方案适用于本公司各品种无菌检验方法的验证。 2.目的 通过验证确认所采用的方法适合于该药品的无菌检查，确保该产品无菌检查结果的正确性。 3.职责 项目责任人：负责验证方案的起草及具体实施。 验证管理员：负责验证工作的组织、协调及管理。 QA现场监控员：负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。 QC负责人：负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。 QC检验员：负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。 质量部经理：负责验证方案及报告的审核和批准。 4. 概述 通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的无菌检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行实验，根据实验结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的无菌检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 5.检查和确认 5.1无菌检验室，洁净级别1万级；超净工作台，局部100级（确认方法：审阅相关的验证资料）。 无菌检验室（洁净级别1万级）验证报告 超净工作台（洁净级别100级）验证报告 检查结论：验证资料完整，符合相应洁净度要求且在有效期内。 检查人：日期： 5.2与验证相关的文件（确认方法：检索）。 无菌检查法操作规程和检定菌传代操作规程 净化工作台使用操作规程 无菌检验室清洁消毒规程 培养箱标准操作规程 检查结论：验证所需资料齐全、完整，符合验证要求。 检查人：日期： 5.3检验用仪器设备（确认方法：检查、核对）。
符合3Q（IQ、OQ、PQ）要求。 5.3.1 智能集菌仪 型号：WJ-6 生产厂家：杭州高得泰林公司 蠕动泵转速：140 rpm 5.3.2 集菌培养器 型号：KSF330 生产厂家：杭州高得泰林公司 批号： 5.3.3 培养箱 型号：HP400S 生产厂家：武汉瑞华仪器设备有限公司 校验有效期至：年月日 设定温度：32.5℃ 型号：PYX-280S-A 生产厂家：KELI 科力仪器 校验有效期至：年月日 设定温度：25.5℃ 5.3.4超级净化层流台 型号：YJ-875 生产厂家：苏州市姑苏空调净化有限公司 验证有效期至：年月日 检查结论：符合要求 检查人：日期： 5.4检验用菌种、培养基和试液（确认方法：检查、核对） 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003] 批号生产厂：中检所 铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104] 批号生产厂：中检所 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501] 批号生产厂：中检所 生胞梭菌[CMCC（B）64941 ] 批号生产厂：中检所 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 批号生产厂：中检所 β-内酰胺酶：2ml（大于200单位/ml）批号生产厂：中检所 硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂：北京三药科技开发公司改良马丁培养基批号：生产厂：北京三药科技开发公司营养肉汤培养基批号：生产厂：北京三药科技开发公司改良马丁琼脂培养基批号：生产厂：北京三药科技开发公司检查结论：符合要求
无菌检查法验证要点
浙江红雨医药用品有限公司 无菌检验方法验证 方案及报告 验证方案申请人:验证方案审核人:验证方案审批人:日期: 日期: 日期: 年 年 年 月 月 月 日 日 日
浙江红雨医药用品有限公司 1 概述 无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。它是根据用于 实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品 受微生物的污染。基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。检验方法的 验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。 2 验证目的 对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。 3 实验原理 直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。 本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。 4 验证范围 实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。 5 6 职责 7 验证内容 建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比 较观察菌落的生长状况，得出结论。 8 验证指示物 本实验所用菌种为购于浙江省食品药品检验研究所标准菌株:金黄色葡萄球菌、白色 念球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌。
抑菌效力检查法
附录ⅩⅢJ抑菌效力检查法 抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。抑菌效力检查法系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。 抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 培养基 培养基的制备 1.胰酪大豆胨液体培养基 胰酪胨17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖（一水合） 2.5g 水1000mL 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。 胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃培养。 2. 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪胨 15.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 琼脂 15.0g 水 1000ml 除琼脂外，取上述成分，混合。微温溶解，调节pH值使灭菌后在25℃的pH值为7.3
无菌检查方法的验证
无菌检查方法的验证 无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要项目。因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重要，而检查方法的验证是保证检查结果的公正、科学和准确的基础，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2010版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和容易发现问题的区域。 验证要求与方法 无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。 前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。 再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。 通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。 这里，验证的重点环节包括： 前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。 供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。 具体的验证方法如下： 菌种的选择 无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌[CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌[CMCC(F)98 003]代表霉菌。 菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，
无菌检查法验证要点
浙江红雨医药用品有限公司 无菌检验方法 验证方案及报告 验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日
1 概述 无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作 为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。它是根据用 于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样 品受微生物的污染。基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制 约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。检验 方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组 成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。 2 验证目的 对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。 3 实验原理 直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。 本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。 4 验证范围 实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。 5 执行程序 文件编码文件名称存放部门 HY-QC-012 无菌检验操作规程品管部 6 职责 姓名职务职责 刘传杰经理负责验证方案的批准实施、验证报告的批准 周德标QC 验证方案、验证报告的起草并负责验证过程中现场的监控及取样张思东QC 负责按制订无菌检验规程实施检验和验证实验 7 验证内容 建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比 较观察菌落的生长状况，得出结论。 8 验证指示物 本实验所用菌种为购于浙江省食品药品检验研究所标准菌株:金黄色葡萄球菌、白色 念球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌。
3类产品抑菌效力检查方法
1 检查内容及步骤 1.1 菌种确认 1.2 培养基确认 确认人及日期： 复核人及日期： 6.3培养条件确认 6.3.1本检查法中细菌、控制菌的培养温度为 ℃，真菌的培养温度为 ℃。 6.3.2培养箱确认 确认人及日期： 复核人及日期： 6.4样品来源确认
6.5操作环境确认 为的洁净区域以内，局部（操作台）为级并单向流空气。 确认人及日期：复核人及日期：7 培养基的适用性检查 7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 7.2菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC(B) 44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC(F) 98 003〕 7.3菌液制备 7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
无菌试验方法验证方案
一次性使用无菌医疗器械无菌试验 方法验证方案 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期：
1.验证目的 通过实验验证检测方法的适用性及培养基的适用性、无菌性、灵敏度。 2.样品信息 3.实验设备及器材 3.1使用仪器及器具：大试管、灭菌锅、洁净工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。 3.2使用材料及菌种：硫乙醇酸盐液体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、枯草芽孢杆菌、生饱梭菌、白色念珠菌、大肠埃希菌。 4.验证组成员及职责 姓名部门职责 品质部组长：负责验证方案的审核、核准并负责验证报告的核准 品质部负责验证方案、验证报告的起草并组织实施 品质部负责验证过程中现场的监控及验证实施和试验过程的操作 5.验证依据 《中国药典》2015版和GB/14233.2-2005 6.验证步骤 6.1检测设备计量有效性验证 确认以下设备经过校量并在有效期内 设备名称是否校验是否在有效期内备注 灭菌锅 洁净工作台 生物安全柜 电子天平
电热恒温箱 霉菌培养箱 确认人/日期：审核/日期： 6.2培养基适用性检查 6.2.1无菌性检查：取每种每批培养基5支（瓶），培养14天，应无菌生长。检查结果见表1。 表1
6.2.2灵敏度检查 6.2.2.1菌液制备方法描述 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或者胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生胞梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃-35℃培养18-24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或者沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20℃-25℃培养24-48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20℃-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.5%（ml/ml）聚山梨酯80无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2℃-8℃，可在24小时内使用。 6.2.2.2培养基接种 取每管将量为12ml的硫乙醇酸盐液体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生饱梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。 6.2.2.3结果判断，空白对照应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该批培养基的灵敏度检查符合规定。 6.2.2.4试验结果见表2 表2 培养基试验液是否长菌菌生长情况培养条件判定 硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球 菌1ml 1. 30℃-35℃培 养3天 2. 铜绿假单胞菌 1ml 1. 2. 生饱杆菌1ml 1. 2. 空白对照 胰酪大豆胨枯草芽孢杆菌 1.20℃-25℃培
中国药典(2010版)微生物检测 抑菌剂(防腐剂)效力检查法指导原则
【摘要】抑菌剂（防腐剂）效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。如果药物本...... 抑菌剂（防腐剂）效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物发生变质而对使用者造成危害，尤其是多剂址包装的制剂。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。同时，为保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。 在制剂通则中要求具有抗菌活性的制剂，不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证最终容器中的抑菌剂效力在有效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 产品分类 进行本试验的药品分为四类（表1 ) ，以便标准的制定和执行。 表l 产品分类 类别药品 1类注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2类局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂 3类口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4类非固体抗酸制剂 培养基 培养基的制备 1.胰酪胨大豆肉汤培养基（TSB ) 酪蛋白胨17.0g 磷酸二氢钾 2.5g 大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 氯化钠 5.0g 葡萄糖 2.5g 水1000ml
无菌检查方法验证告报告2015课件
编号：FAL-YZ-003.1 无菌检查方法 验证报告 科技发展有限公司
目录
无菌检查方法验证报告 1.目的 通过对培养基无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。 2.范围 适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。 3．依据 中国药典（2015年版） GB/T14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学实验方法 4. 职责权限 5. 验证方法 实验前的准备 a仪器设备
b操作环境 微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空 气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 c稀释液和试剂： PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 d器具无菌注射器仪液器 YT－603集菌仪 5.1培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆胨肉汤培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 培养基：硫乙醇酸盐批号20140408 生产厂家：青岛日水生物技术有限公司胰胳大豆胨肉汤培养基批号20151023 生产厂家：青岛尼赛欣合生物技术有限公司
5.1.1无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。 5.1.2灵敏度检查 菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 0 代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕 5.1.3菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上震荡混匀,制成10-100 cfu/0.1ml菌悬液,3-5天内用完。 5.1.4培养基接种取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天；取每管装量为9ml的胰胳大豆胨肉汤培养基7支,分别接种小于100 cfu 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。
抑菌剂效力检查法指导原则
抑菌剂效力检查法指导原则抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终 产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和 繁殖，尤其是多剂量包装的制剂，避免因药物微生物污染及变质而对患者造成伤害。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的 GMP 管理，不能作为非灭 菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物 负载的手段。 所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。同时，为 保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。 要求具有抗菌活性的制剂（参见制剂通则），不管是添加的抑菌剂，还是药物本 身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。抑菌剂的抗菌效力在贮
存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证 最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 产品分类 需要进行本试验的药品分为四类（见表 1），以便标准的制定和执行。 表 1 产品分类
类别 1 类 2 类 3 类 4 类 培养基的制备
药品 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 非固体抗酸制剂 培养基
1. 胰酪胨大豆肉汤培养基
无菌检查方法验证方案
. 安徽捷众生物化学有限公司 无菌检查方法（薄膜过滤法） 验证方案 文件编号：QY·TS·05·007-00
. 批准日期：年月日实施日期年月日 . .
. . 分发单位： . . 安徽捷众生物化学有限公司 无菌检查方法（薄膜过滤法）验证方案 目录 1．验证目的 2. 验证频次
3. 验证操作内容与要求 3.1. 验证操作试验 3.2 试验菌要求验证方法步骤3.3.验证准备3. 4. 3.5验证试验操作．验证结果评价分析4．附件5 . . ．验证目的1确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。验证频次2. 建立药品的无菌检查法时2.1. 修订检验方法时2.2. 2.3. 供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 3. 验证操作内容与要求： 3.1. 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定要求进行验证
操作试验：对每一试验菌应逐一进行验证。3.1.1. 硫乙醇酸盐流体培养基—金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生3.1.2. 孢梭菌。 3.1.3. 改良马丁琼脂培养基—白色念珠菌、黑曲霉。试验菌要求： 3.2 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保验证试验所用的菌株传代次数不得超过3.2.15 证试验菌株的生物学特性。验证试验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。当同时进3.2.2. . 行时，若验证试验失败，则供试品的无菌检查结果是不成立的 3.3验证方法步骤：.3.31验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照无 菌检查方法（薄膜过滤法）进.行平行试验，通过计算回收率来判断无菌检查方法（薄膜过滤法）是否对产品有影响。 3.32试验结果可接受标准用无菌标准评价方法“0.9％氯化钠注射液(三层共挤膜.袋)的无菌检查”对检品中无菌检查试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。 3.4. 验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。 3.4.1. 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基备注： 3.4.1.1 培养基应注明来源；如采用市售干粉培养基，应按说明配制。 3.4.1.2 配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的适用性检查”项下检验无菌性和灵敏度。 3.4.2 仪器设备 3.4.2.1. 净化工作台 3.4.2.2. 生物洁净安全柜 3.4.2.3. 集菌仪