厦门大学基因工程课后思考题

第一章核酸的制备

1.名词解释：

脱氧核糖核酸：

核糖核酸：

ccc-DNA：当两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时，称为共价闭合环形DNA（cccDNA）oc-DNA：如果两条核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，称为开环DNA（ocDNA）

l-DNA,：发生双链断裂而形成线性分子（L—DNA），L构型

DNA变性：双联变成单链

DNA复性：单链又变成双链

PCR, 模板，引物

2.分别阐述用CTAB裂解法，SDS裂解法，碘化钠裂解法以及蛋白酶K裂解法和溶菌酶裂

解法裂解细胞的依据。

溶菌酶：破坏细胞的细胞壁肽聚糖骨架，在内部渗透压的作用下使得细胞胀破。

CTAB裂解法：CTAB作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚SDS裂解法：利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜，离心弃去溶血液，收集白细胞沉淀，加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜，并使核蛋白解离，再加入高

浓度的NaCl使DNA溶解，同时使蛋白盐析。通过离心收集水相，加2—

—2.5倍体积的无水乙醇，沉淀DNA

碘化钠裂解法：低渗破坏细胞，碘化钠破坏核膜

蛋白酶K裂解法：蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白

质的一般降解

3.用于检测样品纯度和浓度的方法有哪些？简述个各方法的基本原理。

电泳、OD值、荧光定量法

第二章基因工程工具酶

1.名词解释：

限制性内切核酸酶：在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开

DNA连接酶：催化DNA上裂口两侧(相邻)核苷酸裸露的3＇羟基和5＇磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使断开的DNA•裂口连接起来

逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶

DNA聚合酶：是一类催化DNA合成的酶类，酶的作用需要DNA或RNA作为模板，合成DNA链的序列与模板的序列互补

Klenow片段（Klenow酶）：大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分

之二的大肽段,即Klenow 酶

限制性图谱（物理图谱）：描述染色体上限制性内切酶切割位点之间距离和顺序的图谱，

通常以DNA的长度来代表距离，因此为遗传物质提供了物理图谱。

2.简述限制性内切核酸酶的作用机制，并说明其在基因工程操作中的重要性。

3.比较E.coliDNA连接酶与T4DNA连接酶的性质和作用。

4.简述耐热性DNA聚合酶在基因工程操作中的重要用途。

PCR

第三章基因克隆载体

1.名词解释：

载体:指能传递能量或运载其他物质的物体

表达载体: 为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体

克隆载体: 为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体

穿梭载体:穿梭载体是指含有两个亲缘关系不同的复制子，能在两种不同的生物中复整合载体: 缺乏酵母复制起点的载体叫做整合载体，含有这种载体的细胞要稳定表达标记基因并形成菌落的唯一方式是将质粒直接整和到酵母染色体上质粒载体: 在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因，以质粒为载体，将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞Cosmid载体: 是指一类含有λ噬菌体的cos序列的质粒载体

噬菌体载体:

2μm质粒: 一个闭合环状超螺旋DNA分子，长约2um。在酿酒酵母中发现的一种模拟微生物。可用于研究基因调控、染色体复制的理想系统，也可作为酵母菌转

化的有效载体，并组建基因工程菌

Ti质粒: 根瘤农杆菌染色体外的环状双链DNA质粒，能诱导植物产生异常氨基酸和冠瘿碱或二者之一，并诱生冠瘿瘤

双元克隆载体: 这个系统具有两个质粒，一个是用于克隆或外源基因片段的克隆质粒，也是一种穿梭质粒；另一个是非致病Ti质粒，没有T-DNA序列，具有Ti质粒的

毒性基因

CaMV载体: 环状双链DNA，在病毒颗粒中以开环的形式存在，分别在-链上有一个缺口，+ 链上有两个缺口,在缺口中形成三链结构

SV40载体: SV40 DNA为环状双链DNA，与宿主细胞组蛋白H4，H2A，H2B和H3结合，组成念珠状核小体-微型染色体

逆转录病毒载体:反转录病毒是一类含RNA的病毒．感染到动物细胞后病毒RNA通过反转录产生双链DNA分子，可整合到宿主细胞染色体上而成为原病毒，随染色体

DNA进行复制、转录和翻译．

腺病毒载体:腺病毒（adenovirus, Ad）是一类无囊膜的20面体病毒，含有一个线性双链DNA分子。Ad-DNA两端具有逆向末端重复序列IRT．在每一条单链DNA的

5’端共价结合一种特殊结合蛋白（5.5 kD）TP，当DNA从病毒颗粒中释放后，

通过该蛋白连接成环状．

杆状病毒载体，

酵母人工染色体（YAC）,

细菌人工染色体（BAC）,

双元BAC载体（BIBAC）,

P1人工染色体，（PAC）：结合了P1 载体和BAC 载体的特性,是P1 噬菌体载体的改进

载体

可转化人工染色体（TAC）,

表达原件：启动子、转录终止子和核糖体结合位点等

基因打靶：是指通过DNA定点同源重组,改变基因组中的某一特定基因,从而在生物活体内研究此基因的功能

启动子：启动子指RNA聚合酶结合位点周围的一组转录调控组件,包括至少一个转录起始点以及一个以上的功能组件

2.大肠杆菌表达载体有哪些类型，特点如何？

3.Cosmid载体有什么特征？

兼有λ噬菌体和质粒载体的特点．含有λ噬菌体Cos位点(可进行体外包装)和细菌质粒载体的复制子(选择标记, 可在细菌中保存和大量复制),可插入大片段外源DNA

4.如何利用农杆菌Ti质粒构建植物克隆载体？

5.大容量克隆载体有哪些类型，其特点如何？