实验二 细菌的染色和细菌细胞构造的观察
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• （3）染色：在涂面上加复红染色液染色 3—5min。
• （4）水洗：用水洗去复红染液。 • （5）干燥：将染色片放空气中晾干。 • （6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴
苯胺黑，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触 苯胺黑，使苯胺黑沿玻片后缘散开（夹角 30度），然后推向另一侧，使黑素在染色 涂面上成为一薄层，并迅速风干。 • （7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。
• 观察：背景、菌体、荚膜、细菌形态等， 并绘图。
Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria
• Large, gram-negative, obligately aerobic rods, capable of fixing N2 nonsymbiotically • Azotobacter has the highest respiratory rate of any living organism (purple bacteria) • Azotobacter cells are very large, almost the size of yeasts, produce cysts
• 负染色法
实验材料
• 涂片染色用的细菌培养物
– 荚膜染色（固氮球菌）24h的斜面培养物。
• 用滤纸过滤后的苯胺黑、复红染色液。 • 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。
实验程序
（负染色法的方法和步骤）
• （1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸 馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并 涂布。
• （2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用 电吹风冷风吹干。
Cysts
Azotobacter cysts have low endogenous respiration and are resistant to desiccation, mechanical disintegration, and UV as well as ionizing radiation however, they are not especially heat-resistant
Vegatative cells of Azotobacter vinelandii
Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria • Major genera: Azotobacter, Azomonas,
Azospirillum and Beijerinckia, Derxia
Derxia gummosa encased in slime
Colonies of Beijerinckia species growing on a carbohydrate-containing medium
思考题
• 荚膜负染法为什么不用热固定？ • 为什么包在荚膜内的菌体着色，而荚膜
不着色？
实 验 2-1
细菌的荚膜染色
细菌的染色和细菌细胞构 造的观察
• 目的要求 • 染色原理 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
wk.baidu.com 目的要求
• 无菌操作 • 微生物涂片 • 荚膜染色（固氮球菌） • 熟炼显微镜使用
细菌的荚膜染色原理
• 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通 常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景 着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈 一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故 染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。
• 简约流程
制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干 ――复红染色液染色3-5min――水洗―― 干燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）―― 风干――镜检――记录
实 验 2-1 结束
染色简约流程
• 荚膜染色 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干 ――复红染色液染色3-5min――水洗――干 燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）――风干 ――镜检――记录
• 芽孢染色 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶 液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干） ――冷却――水洗――番红液染色1-2min ――水洗－－晾干或吸干――镜检――记录
• （4）水洗：用水洗去复红染液。 • （5）干燥：将染色片放空气中晾干。 • （6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴
苯胺黑，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触 苯胺黑，使苯胺黑沿玻片后缘散开（夹角 30度），然后推向另一侧，使黑素在染色 涂面上成为一薄层，并迅速风干。 • （7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。
• 观察：背景、菌体、荚膜、细菌形态等， 并绘图。
Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria
• Large, gram-negative, obligately aerobic rods, capable of fixing N2 nonsymbiotically • Azotobacter has the highest respiratory rate of any living organism (purple bacteria) • Azotobacter cells are very large, almost the size of yeasts, produce cysts
• 负染色法
实验材料
• 涂片染色用的细菌培养物
– 荚膜染色（固氮球菌）24h的斜面培养物。
• 用滤纸过滤后的苯胺黑、复红染色液。 • 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。
实验程序
（负染色法的方法和步骤）
• （1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸 馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并 涂布。
• （2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用 电吹风冷风吹干。
Cysts
Azotobacter cysts have low endogenous respiration and are resistant to desiccation, mechanical disintegration, and UV as well as ionizing radiation however, they are not especially heat-resistant
Vegatative cells of Azotobacter vinelandii
Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria • Major genera: Azotobacter, Azomonas,
Azospirillum and Beijerinckia, Derxia
Derxia gummosa encased in slime
Colonies of Beijerinckia species growing on a carbohydrate-containing medium
思考题
• 荚膜负染法为什么不用热固定？ • 为什么包在荚膜内的菌体着色，而荚膜
不着色？
实 验 2-1
细菌的荚膜染色
细菌的染色和细菌细胞构 造的观察
• 目的要求 • 染色原理 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
wk.baidu.com 目的要求
• 无菌操作 • 微生物涂片 • 荚膜染色（固氮球菌） • 熟炼显微镜使用
细菌的荚膜染色原理
• 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通 常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景 着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈 一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故 染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。
• 简约流程
制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干 ――复红染色液染色3-5min――水洗―― 干燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）―― 风干――镜检――记录
实 验 2-1 结束
染色简约流程
• 荚膜染色 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干 ――复红染色液染色3-5min――水洗――干 燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）――风干 ――镜检――记录
• 芽孢染色 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶 液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干） ――冷却――水洗――番红液染色1-2min ――水洗－－晾干或吸干――镜检――记录