骨髓细胞学检查

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除外,小淋巴细胞可没有颗粒。
原始细胞
幼稚细胞
成熟细胞
胞核: 血细胞随着分化发育其胞核
体积——由大到小 形态——由圆到不规则(或消失),淋巴细胞的
核型改变不明显 染色质—由疏松细致到紧密粗糙 颜色——由染淡紫色到深紫色
原始细胞
幼稚细胞
成熟细胞
核仁:血细胞随着分化发育其胞核内的核
仁从有到无。
原始细胞 早期幼稚细胞 中期幼稚细胞
原理
氯化醋酸AS-D萘酚酯酶
氯化醋酸AS-D萘酚
AS-D萘酚 + 醋酸
+
重氮盐 有色沉淀物
方法
根据各公司产品说明书进行
阳性细胞
中性粒细胞阳性外,其他血液细胞均为阴性。
临床评价
粒细胞及肥大细胞的标志酶
四.非特异性酯酶
非特异性酯酶是属水解酶,通常可分为中性酯酶(NAE)、酸性酯酶 (ANAE)和丁酸酯酶(NBE)。由较多的同工酶所组成,在不同的细 胞内存在有不同的同工酶。电泳分析证明人血细胞含有九种酯酶同工 酶,如中性粒细胞含同工酶1、2、7、9;单核细胞和血小板含有同工 酶4、5。淋巴细胞含有同工酶1和6等。其中同工酶4、5 能被NaF所抑 制,所以对染色呈阳性的细胞作NaF抑制试验可鉴别中性粒细胞和单 核细胞。
检测结果分析与报告方式:
结合临床分析 1.一般资料 2.症状 3.体征
结合血象分析 三系数量和质量
增生极度减低 增生明显活跃
增生活跃
增生减低 增生极度活跃
骨髓象与血象结合分析
1.骨髓象相似,而血象有区别 ——(溶贫、急性失血等)
2.骨髓象有区别,而血象相似 ——(传淋与慢淋、白血病与类白)
3.骨髓象无变化,而血象有变化 ——(传单、部分淋巴瘤)
本片上,就被称为双酶(双酯)染色。可使粒细胞系和 单核细胞系分辨得更清楚。
原理(α-NAE、AS-DAE、α-NBE)
α-醋酸萘酚 α-醋酸萘酚酯酶
方法
α-萘酚
+
重氮盐
+ 醋酸
有色沉淀物
根据各公司产品说明书进行
临床评价
此组合酶类染色,主要运用于各种急性白血病的鉴别诊断,特别在急
非淋(ANLL)中的分型和亚型分型提供重要依据。
原理
过氧化物酶
H2O2
H2O
[O]
无色联苯胺
蓝色联苯胺
方法
根据各公司产品说明书进行
正常阳性细胞
1.中性粒细胞
强阳性
2.嗜酸粒细胞
强阳性
3.单核细胞
弱阳性或阳性(弥散状)
4.淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、
巨核细胞等均为阴性
临床评价
病理变化
1.增高--再生障碍性贫血、感染、急慢性淋巴细胞白血病、 2. 减低--急慢性粒细胞白血病、MDS、风湿热、放射病等 3. 缺乏—先天性髓过氧化物酶缺乏症。
过氧化物酶染色在急性白血病分型中的意义
临床上通常将POX染色阳性率3%作为淋巴与非淋巴的分界标准若能结合 其他化学染色、细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则更好
二.糖原染色(PAS)
此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物质有糖原、 粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂类物质等,因此PAS 阳性不能简单地就表明有糖原的存在,只是在对血细胞的组织 化学研究中通常习惯于将PAS阳性认同于糖原。
骨髓穿刺方法:
穿刺部位通常选择—髓液丰富、浅表易定位、避开重要器官。 如髂后上棘、髂前上棘、胸骨、胫骨等。
被穿刺部位的体表皮肤应无破损和炎症及畸型
穿刺要求:
1.耐心解释。 2.严格无菌操作。 3.髓液应控制0.2ml以内。 4.骨质疏松或MM患者需小心。 5.血小板减少等患者,穿刺后应予压迫。 6. 了解病史注意禁忌症。
正常血细胞形态检查
正常骨髓中存在的细胞和其所占比例为: 1、 红 细 胞 系 统(20~25%) 2、 粒 细 胞 系 统(50~55%) 3、 巨 核 细 胞 系 统 4、 单 核 细 胞 系 统 5、 淋 巴 细 胞 系 统(20~25%) 6、 浆 细 胞 系 统 7、 其 他 细 胞
骨髓细胞检查结果分析与临床意义
细胞内染色的范围通常是:蛋白类、多糖类、脂 类、盐类和金属类等。
采用的方法通常为:化学结合、物理溶解及酶-底 物反应。
应用:
a.对各类白血病的确诊 b.对许多血液疾病鉴别诊断 c.对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估
计提供一定的信息
一.过氧化物酶(POX)
血细胞中的过氧化物酶主要为髓过氧化物酶(嗜酸粒细胞内 为乳过氧化物酶)。在血液和骨髓细胞中,粒细胞系和单核细 胞系的嗜苯胺蓝颗粒(A-颗粒)内的溶酶体中存在有过氧化物 酶。此酶的活性和多少与溶酶体的数量有关,而与A-颗粒的多 少无关。虽然淋巴细胞浆中也有嗜苯胺蓝颗粒,但因为此颗粒 中不存在溶酶体,所以淋巴细胞过氧化物酶染色呈阴性反应。 另外巨核细胞、红细胞等也为阴性反应。
细胞内外的铁与酸性亚铁氰化钾反应形成蓝色的亚铁 氰化铁,定位于含铁的部位。 正常值:细胞外铁--(+)--(++)
细胞内铁—19-44%(Ⅰ--Ⅱ) 意义:1、缺铁性贫血明显降低甚至阴性。
2、铁粒幼细胞贫血明显增多。 3、MDS可见环形铁粒幼细胞增多(15%)
骨髓检查的临床意义
粒细胞系 增多- 原粒、 早幼粒、 中幼粒、 晚幼粒和杆状核

急性
M2、
性 白
早幼
慢性

白血
粒细
病 等
病ຫໍສະໝຸດ Baidu
胞白
血病

慢性粒 细胞白 血 病、 类 白、 中毒等
减少- 再障、粒缺、急性造血停滞等。
红细胞系 增多 -
原红和早幼红、
急性红血病、急 性红白血病
中幼红和晚幼红
增生性贫血真红、铅 中毒、红白血病等
成熟淋巴
急性淋巴细胞白 慢性淋巴细胞白 再障、病 血病、慢粒急淋 血病、淋巴瘤、 毒感染等 变、淋巴瘤等 巨球蛋白血症等
讲课内容
1 骨髓细胞学检查 2 常用血液细胞化学染色
3 常见血液病血细胞特征
细胞化学染色是将形态和功能相结合的科学。他在 保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,应用化学 反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理 活性物质原位的显示。从而对分析细胞化学成分、生 理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的 意义。
4.骨髓象有变化,而血象无变化 ——(多发性骨髓瘤、戈谢病)
5.骨髓象细胞难以辨认,而血象细胞易辨认 ——(白血病、血液寄生虫、淋巴瘤)
骨髓检查报告方式:
1.独立性和肯定性结论 2.符合性诊断 3.须依赖细胞化学染色的诊断 4.疑似性诊断 5.简明报告特征所见而不下结论 6.血液病治疗后复查报告a.有效 b.无效
临床评价
红系 红(白)血病、MDS等幼红细胞可呈阳性。
各类急性白血病的辅助鉴别:
淋 粗颗粒或块状

细颗粒弥散状
粒 细颗粒或均匀红色

粗颗粒或块状强阳性
三.碱性磷酸酶(NAP)
中性粒细胞碱性磷酸酶是中性粒细胞中的特异性颗粒(S颗 粒)所释放的一种酶,存在于细胞浆内的三级颗粒中呈不规则 形的管状结构,该酶的活力与积分受到体内许多因素的影响。 如中性粒细胞的成熟度、HbF、内分泌功能等均可使NAP的积 分产生一定的差异,但正常人群中性粒细胞的阳性程度一般很 少到三分,绝对达不到四分。若结合染色体检查可协助慢粒的 诊断。
中性 嗜酸 嗜碱 中幼 中幼 中幼 中性 嗜酸 嗜碱 晚幼 晚幼 晚幼
原单 幼单
造血干细胞 原红 原巨核 原浆 早幼 幼巨核 中幼 颗粒巨 幼浆 晚幼 产板巨 成浆
淋巴干细胞 原淋巴(B/T)



幼淋巴(B/T)
中性 嗜酸 嗜碱 杆核 杆核 杆核 中性 嗜酸 嗜碱 分叶 分叶 分叶
单核
网织 成红 血小板
骨髓细胞学检查
讲课内容
1 骨髓细胞学检查 2 常用血液细胞化学染色
3 常见血液病血细胞特征
血细胞的生成与发育
血细胞分化过程
全能干细胞阶段 多能干细胞阶段 祖细胞阶段
全能干细胞
髓系
淋巴系
1.BFU-E 2.CFU-GM 3.CFU-E0 4.CFU-Meg
CFU-TL
CFU-BL
干细胞阶段 淋巴干细胞
PAS染色虽然不完全代表糖原,但在血液系统疾病特别在各 类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS染色若结合其 他化学染色和细胞免疫表型检测可对部分疾病的诊断和鉴别诊 断提供一定的价值。
原理 方法
乙二醇
过碘酸 双醛基 + 无色品红
紫红色化合物
根据各公司产品说明书进行
正常阳性细胞
1.粒系—阳性(且随细胞的成熟逐渐增强). 2.单核--阳性(且随细胞的成熟逐渐增强). 3.淋巴—大部分阴性,少数呈阳性. 4.巨核—强阳性(粗颗粒或块状). 5.浆系--大部分阴性,少数呈阳性. 6.红系—阴性.
血 液 淋巴(大/小) 内
血细胞发育形态演变规律要点
血细胞的分化、发育、成熟具有一定的规律性,我们在辨认细 胞时需要掌握下列几个方面:
成熟红细胞
早期红细胞
胞体: 血细胞随着分化发育其
体积逐渐变小(巨核细胞系 除外)
胞质(浆): 血细胞随着分化发育其胞质
量—— 由少到多 色—— 由深蓝到浅蓝或灰(红) 颗粒— 由无到有(特异或非特异),但红细胞系
非特异性酯酶检测通常应用于白血病的鉴别诊断,而白血病细胞 的高度异型性或异质性使酶活性的表达出现紊乱,所以组合酯酶检测 比单一检测更具价值和意义。
临床上非特异性酯酶一般选用: α-醋酸萘酚酯酶(α- NAE) α-丁酸萘酚酯酶(α– NBE) 醋酸AS-D萘酚酯酶( AS-DAE ) 若将上述任何一个酶与POX或AS-DCE染色于同一张标
减少 - 纯红再障、急性白血病未分化型、化疗后等
巨核细胞系 增多- MPD、ITP、急性巨核细胞白血病、脾亢、慢粒等
减少- 再障、急性白血病、慢粒、化疗后等
单核系细胞
增多 - 原单及幼单
急性单核或粒单细胞血病、慢 粒急单变
淋巴系细胞
增多 - 原淋及幼淋
成熟单核 急性单核细胞白血 病病、慢性粒单细 胞白血病
(2).减低
粒缺、脾亢、感染(G-)、病毒、白血病
五.氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色
(AS–DCE)
此酶主要分布在粒细胞和肥大细胞中。通常从原粒细胞后 期即可见有弱阳性反应,而到早幼粒细胞就可见强阳性反应。 且酶的活性不随细胞分化成熟而增强。此酶的阳性产物比 POX更为特异。
单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞等均为阴性,所以在临床 上将AS-DCE染色作为是粒细胞的标志性酶。
核仁
核仁
血细胞形态分析要点
涂片质量:
a.厚薄
b.染色 c.部位选取
细胞发育连贯性:
观察细胞时应抓住细胞各阶段的主要特征,因为血细胞的
发育成熟实际上是一个连续的过程。为使在辨认的时候有一个
相对统一的标准,我们根据血细胞在各阶段所表现出的形态特
点,人为地将各系细胞划分成几个阶段。遇见介于二个阶段之
间的细胞,通常往成熟阶段划分。
骨髓象分析
1.观察涂片中骨髓小粒、油滴、染色性等 2.估计有核细胞增生程度 3.按要求计数各系列、各阶段细胞数量200~500个 4.具体分析各系列、各阶段细胞形态及有否其他异常细胞
结果的计算和填写检验报告单:
首先计算各系统各阶段细胞所占百分比。然后将各阶段粒细胞百分率的总 和除以各阶段有核红细胞白分率,得出粒红比值(G/E)。据实填写取材、 涂片、染色。
自我更新 多能干细胞
祖细胞阶段 前体细胞阶段
T细胞祖细胞 B细胞祖细胞
嗜碱粒细胞祖细胞 嗜酸粒细胞祖细胞
髓系干细胞
粒单细胞祖细胞
自我更新能力
巨核细胞祖细胞 红细胞祖细胞
成熟细胞阶段
T细胞 B细胞
嗜碱粒细胞 嗜酸粒细胞 中性粒细胞 单核细胞 血小板 红细胞
增殖与分化能力
血细胞形态发育规律图
髓性干细胞 原粒 早幼
骨髓象检验的临床应用
适应症——临床上通常出现下列情况时,可作骨髓细胞学检查: a.外周血数量、成分、形态等异常者 b.经一定检查原因不明的发热、肝脾及淋巴结肿大 c.出现原因不明的骨痛、骨质破坏、黄疸、紫癜等 d.需作治疗观察和其他检查者 f.其他(活检、标记检测、染色体检查等)
禁忌症 a.血友病或凝血因子重度缺陷者 b.穿刺部位有炎症或畸形 c.晚期妊娠的孕妇
六.铁染色
骨髓铁包括细胞内铁和细胞外铁。细胞内铁为幼红细胞 合成血红蛋白时的利用形式,而细胞外铁是骨髓以含铁血 黄素形式存在的储存铁。骨髓铁染色可了解骨髓中幼红细 胞对铁利用的功能和铁原料在机体内的吸受与储存情况, 若将铁染色与血清、总铁结合力等检测综合观察,可了解 机体内铁的动态变化。所以铁染色是诊断缺铁性贫血最重 要且较早期的指标之一。
原理
α-磷酸萘酚 + H2O
pH9.6 碱性磷酸酶
方法
α-萘酚 + +
重氮盐
根据各公司产品说明书进行
正常阳性细胞
在血细胞中除成熟中性粒细胞阳性外, 其他细胞基本呈阴性。
磷酸 有色沉淀物
临床评价
1.生理变化:
年龄、应激、妊娠可见增高或降低
2.病理变化: (1).增高
感染、AA、类白血病、急淋、其它
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