非发酵菌 微生物学检验
非发酵菌及检验
氧化酶（+） 触酶（+） 不分解任何糖 动力、吲哚、 甲基红、VP 、DNA酶（-） 6.5%NaCL肉汤不生长
+ 二、微生物检验
+ 1.标本采集 + 2.方法与鉴定
+ 临床意义
人和动物黏膜上的正常菌群，也引起社 区和医内感染。本菌是呼吸道感染的主要 致病菌。大多菌株对青霉素、四环素、氨 基糖苷类敏感。
+ 1.标本采集 + 2.方法及鉴定
+ 临床意义
条件致病菌 医院感染常见菌 对广谱抗生素有耐药性，红霉素、克 林霉素、复方磺胺敏感。
鉴定试验
肠杆菌科
非发酵菌
弧菌科
氧化酶
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F） 鞭毛
－
F
＋
O／－
＋
F
周鞭毛
单、丛、周
单、丛
+ 脑膜败血性黄杆菌 + 芳香黄杆菌 + 短黄杆菌
+ 水生黄杆菌
+ 嗜糖黄杆菌 + 嗜醇黄杆菌
+ 嗜温黄杆菌
+ F.yabuuchiae
+ 定义：氧化酶阳性、产黄色素、无动力、
吲哚阳性或阴性的非发酵革兰阴性菌。
+ 一、生物学性状 + 1.形态与染色 革兰阴性杆菌 菌体细长
两端略膨大 无动力 无芽胞
发 氧 产
+ 《伯杰系统细菌学手册》（1984）分类法
+ + + + + +
按rRNA和DNA同源性，分5个RNA Ⅰ 铜绿假单胞菌 Ⅱ 洋葱假单胞菌 鼻疽假单胞菌 Ⅲ 食醋假单胞菌 Ⅳ 微小假单胞菌 Ⅴ 嗜麦芽假单胞菌 腐败假单胞菌
dl第二十一章 非发酵菌及检验
分离培养
BAP、SS、MAC
鉴定
初步鉴定（菌落、菌体特征，色素、氧化酶、 KIA），最后鉴定（系统生化、血清学）
药敏试验
粪便
胸腹水 离心 脑脊液 沉淀 尿液 分泌物 血液 （增菌） 体液
分离培养 （SS、MAC）
可 疑 菌 落 初 步 鉴 定
不动杆菌属
不动杆菌属（Acinetobater）为一群不发酵
糖类、氧化酶 - 、无动力的革兰阴性杆菌。 生化反应：氧化酶 - ，MIU - - - ，硝酸盐 还原试验 - 。 耐药性：对全部氨基青霉素、一代二代头 孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。
鲍曼不动杆菌在BAP上的生长现象
4 2 1
O-F
1
DNA
结果 总值
O
+ + — 6
+ — + 5
+ — — 4
鉴定值：1654
鉴定结果：铜绿假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）为条件致病菌，常引起抵抗力
低下患者的各种感染，在假单胞菌的感染 中检出率仅次于铜绿假单胞菌。 生化反应特殊：氧化酶 - ；赖氨酸脱羧酶 +； 氧化分解麦芽糖；水解七叶苷。 耐药性：含有-内酰氨酶，对亚胺培南天然 耐药，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）； 喹诺酮类：环丙沙星或替卡西林/克拉维酸。
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是假单胞
菌属的代表菌种，为条件致病菌，是医院 感染的主要病原菌。可经多种感染途径、 污染导致多种感染，且对多种抗生素天然 耐药，因此有很重要的临床意义。
【临床微生物实验】_非发酵菌概述、假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌
表面生长
恶臭假单
胞菌在血 平板和中 国蓝平板 上菌落
脂溶性色素
水溶性黄绿色色素
Pseudomonas生化特征
氧化酶阳性
触酶阳性
Pseudomonas生化特征
氧化分解葡萄糖
VP、甲基红、吲哚均（－ ）
有单鞭毛 有菌毛 无芽孢 无荚膜
痰涂片中被吞噬的铜 绿假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿 假单胞菌
痰涂片中粘液型铜绿假单胞菌
Pseudomonas aureginosa 形态和培养特征
• 专性需氧（部分菌株可兼性厌氧）
• 营养要求不高
• 最适生长温度25~30℃，42℃生长， 4℃不生长
Pseudomonas aeruginosa
MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-OprJ ④整合子携带耐药基因盒：1类，3类（多重耐药） ⑤生物膜形成阻碍抗菌药物进入
➢ 临床治疗假单胞菌感染常用抗菌药物 主要有：
β内酰胺类 氨基糖苷类 喹诺酮类
铜绿假单胞菌固有耐药种类 氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、厄
他培南、四环素/替加环素、复方磺胺甲 恶唑、氯霉素等
KEY POINTS
➢ The term nonfermenting bacilli (NFB) describes a large group of aerobic,non-fermentative, nonsporeing, grame-negative bacilli belonging to taxonomically diverse genera, species that all share the common phenotypic features.
非发酵菌的检验(实验)
成都医学院 临床微生物学教研室
目的
❖ 1.掌握非发酵菌的形态、染色性和菌落特征。 ❖ 2.熟悉非发酵菌的主要生化反应。
器材
❖ 接种环、酒精灯、显微镜等
试剂
❖ 革兰染液、氧化酶试剂、非发酵菌编码生化 鉴定管及相关试剂、生理盐水等
标本
❖ 1#标本和2#标本
操作
❖ 1.标本涂片染色镜检 ❖ 2.接种、培养 ❖ 3.生化试验 ❖ （1）氧化酶试验 ❖ （2）非发酵菌编码生化鉴定管
1组 O-F试验 厌需 氧氧
01
2组 氧枸 麦 化橼 芽 酶酸 糖
42 1
3组 精甘木 氨露糖 酸醇
421
4组
硝D乙酸N酰盐 还Fra bibliotekA 酶
胺 酶
原
421
实验：非发酵菌的鉴定
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的
1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：
1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据
1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +
微生物学--非发酵菌检验
（二）、微生物特性
❖ G-直或微弯曲杆菌，具有端鞭毛1-8根2根或 多根极端丛鞭毛，有动力，无芽孢。
❖ 该菌专性需氧，营养要求不高，可在普通平 板血平板和MAC上生长。血平板上培养1824小时，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色菌 落；培养48小时菌落，可呈黄色、绿色或灰 白色，菌落中心可有变透明的趋势，称为“猫 眼”现象。
光滑、半透明、边缘整 齐不溶血的菌落。
（四）、微生物学检验
鉴定： ❖ 氧化酶阳性 ❖ 触酶阳性 ❖ 无动力 ❖ 不分解任何糖类 ❖ 吲哚试验阴性
（五）、药物敏感试验及结果解释
❖ 对青霉素类敏感 ❖ 对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖
甙类药物均为敏感 ❖ 脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血
脑屏障的问题
（二）、临床意义
❖ 引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、 脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系 统炎症
（三）、微生物特性
❖ 革兰阴性球杆菌 ❖ 呈双短链状排列，
具有多形性
（四）、微生物学检验
分离培养： ❖ 营养要求较高 ❖ 生长温度32~35℃ ❖ 血琼脂平板上生长良好 ❖ 针尖大小的圆形凸起、
生物学特性
G-杆菌，无芽孢，无荚膜，多数菌有端鞭毛或 丛鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适 30-37度，普通培养基上可以生长，可产各种水 溶性色素。抵抗力强，多种抗生素耐药。
微生物检验
2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶 氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。
❖分型
1.噬菌体分型 2.血清分型 3.核糖体分型 4.PFGE分型
（二）、微生物检验
❖ 鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（+）， 七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（+）， 氧化分解葡萄糖。
《微生物学检验》课件——第十章 非发酵革兰阴性杆菌
所致疾病： 条件致病菌 医院感染的重要病 原菌 大面积烧伤创面感 染的重要病原菌
铜绿假单胞菌——检验程序
涂片 染色镜检
标本
分离培养 （血平板）
血标本 增菌
涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
氧化酶＋； O/F：O；卵磷 脂酶＋；明胶液 化＋； 嗜冷性。
恶臭假单胞菌
G-b,单端丛鞭毛， 专性需氧， 最适温度25~30℃,4℃生长,35℃、42℃不长。
生
物 学 特
产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素； 陈旧培养物有腥臭味。
性
氧化酶:＋； O/F:O；卵磷脂酶:－； 明胶液化:－。
指示剂：溴麝香草酚蓝
培养基pH：7.0
O/F：F
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/OF：/F：O F O/F：－
肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别
鉴定试验 OX
肠杆菌科 非发酵菌 弧菌科
－
＋
＋
O/F 鞭毛
F
O／－
F
周鞭毛 单、丛、周 单、丛
假单胞菌属共同点
产生水溶性色素
G-b,有鞭毛
MAC:+
共同点
产碱杆菌属——主要特征
1.革兰阴性杆菌、有周鞭毛、无芽孢、无荚膜； 2.专性需氧； 3.营养要求不高，普通平板和Mac平板上可生 长； 4.氧化酶＋、O/F：K、不分解任何糖； 5.是医院感染病原菌之一，粪产杆菌多见。
不动杆菌属——主要特征
1.现已命名6个生物种，代表菌为醋酸钙不动杆 菌； 2.革兰阴性球杆菌，成双排列，无鞭毛，动力 阴性； 3.专性需氧，营养要求不高，普通平板、Mac 平板上可生长； 4.氧化酶－；O/F：O／－；硝酸盐还原－； 5.临床标本分离率仅次于铜绿假单胞菌。
非发酵菌及检验
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
非发酵菌的鉴定
非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。
主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。
关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。
一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。
目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。
一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。
2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。
二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。
）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。
实验：非发酵菌的鉴定
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 42ﾟ 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+/+ +
方法： 方法：
1.形态观察； 1.形态观察； 2.菌落观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据 1.铜绿假单胞菌： 1.铜绿假单胞菌：
单端鞭毛（三根以下） 单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 培养基） 氧化分解（ 葡萄糖 乳糖、蔗糖 乳糖、 木 糖 氧化酶 赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 H2S产生 在42℃ 生长 42℃ ＋ － ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋ 98 0 85 100 0 99 0 0 100 ＋ ＋ 97 97
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 生长温度: 37℃ 41℃ 41℃ 42℃ 42℃ + － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － － － － － － ＋ － － － － ＋ － － +/－ － +/－ +/－ － +/－ － ＋ － ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ －
实酵菌的形态、染色特性、生 1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂
1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 2.鉴定试验：葡萄糖OF管，枸椽酸盐琼脂， 尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸，明胶、 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木糖，乳糖， 蔗糖。
《非发酵菌及检验》课件
非发酵菌感染可引起机体免疫应 答异常，导致免疫损伤和感染扩 散。
临床表现
肺部感染
非发酵菌引起的肺部感染症状包括咳嗽、咳痰、呼吸 困难等。
泌尿系统感染
尿频、尿急、尿痛等泌尿系统感染症状也是非发酵菌 感染的常见表现。
其他感染
非发酵菌还可引起败血症、脑膜炎、心内膜炎等严重 感染，出现相应的临床表现。
诊断与治疗
阴性等。
非发酵菌对某些抗生素敏感或耐 药，因此需要根据药敏试验结果
进行治疗。
非发酵菌在自然界中广泛分布， 如土壤、水源、空气等，也常常 引起医院感染，如伤口感染、肺
炎等。
02 非发酵菌的检测方法
分离培养法
分离培养法是非发酵菌检测的传统方 法，通过选择性培养基将非发酵菌从 样本中分离出来，然后进行形态学和 生化鉴定。
。
非发酵菌感染常引起医院感染爆发事件 非发酵菌对常用消毒剂和抗生素具有较
，如泌尿道感染、呼吸机相关肺炎等。
高的耐药性，给治疗带来困难。
04 非发酵菌的致病性
致病机制
01
黏附作用
非发酵菌能够黏附在人体黏膜上 皮细胞上，进而侵入细胞间隙和 基质，引发感染。
毒素产生
02
03
免疫损伤
部分非发酵菌能够产生毒素，这 些毒素对人体细胞有毒害作用， 导致感染症状。
缺点是分离时间长，容易受到杂菌干 扰，且对某些非发酵菌的分离效果不 佳。
分离培养法的优点是操作简单，对设 备要求不高，适用于大多数非发酵菌 的分离。
免疫学检测法
免疫学检测法利用抗原-抗体反 应的原理，通过特异性抗体检 测非发酵菌的抗原。
免疫学检测法的优点是灵敏度 高、特异性强，适用于大量样 本的快速检测。
每日一菌之非发酵菌及检验
每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。
目前，非发酵菌包括13个属。
主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
这些细菌大多为条件致病菌。
对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。
一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。
1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。
有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。
故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。
2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。
由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。
有时需借助鞭毛染色予以鉴定。
3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。
4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。
非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。
在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。
5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。
非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。
表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。
在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。
其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
非发酵菌检验程序(详细版)
非发酵菌是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、条件致病菌。
【氧化酶试验】铜绿、粪产碱为阳性，醋酸钙不动杆菌为阴性【非发酵菌生化编码管鉴定】原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参照下述方法，将试验结果换算成4位数字, 加以数值化后查表。
例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734，查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中要求做硝酸盐产气补充实验区分。
无芽胞的革兰阴性杆菌；多为- 4组0-F厌顿2分需氧1分结果：需氧得分匸12组氧化輕分枸携酸2分麦芽犍1分+ + +73纠精氨就4分甘露醇2分木糖1分-+ +4组硝还4分DNA酶2分乙酰胺4分观察结果时按表中说明进行。
—、O-F试验接种2支编码管，1支加无菌石蜡油，另1支不加。
原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。
本试验又称氧化发酵（0/F或Hugh —Leifson , HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。
培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；培养基表面和底部都产酸（变黄）为发酵型；培养基表面变为深蓝色为产碱型；培养基表面变黄、底部不色变为氧化型。
二、硝酸盐还原试验原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐和氮气等。
硝还试验是测定还原过程中生成的亚硝酸盐。
如培养基中有亚硝酸盐存在，则亚硝酸盐与醋酸生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸生成重氮苯磺酸，后者与a -萘胺结合成N- a -萘胺偶氮苯磺酸。
假单胞菌等能使硝酸或亚硝酸盐还原为氮气，此为脱硝化或脱氮化作用。
结果解释：/变红一®性沿试验管加AB液各少许变一加锌粉-不变r阳性，产气\变红阴性注意事项：若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否已被还原，可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色，表示硝酸盐仍然存在；若不出现红色，表示硝酸盐已衩还原为氨和氮。
非发酵菌及检验
水是军团菌的自然栖息地
• 目前，随着百姓生活水平的逐步提高，城市中高
层建筑的日益增多，热水管、喷水池、空调、淋 浴及加湿器等设备的普及，这些都有可能增加军 团菌病的危险性。因而，军团菌病在国际上已被 视为“现代生活文明病”。
• 国际化标准组织（ISO）早已把水源中军团菌的
检测作为水质标准细菌检验的一部分，世界上许 多国家的宾馆、饭店都必须有“军团菌检验合格” 的证明。我国也于2019年3月颁布了《公共场所 集中空调通风系统卫生规范》，其中明确规定， 冷却水、冷凝水中不得检出军团菌。
血琼脂平板 巧克力琼脂平板
革兰阳性菌 非军团菌
BCYE琼脂
生长 （非军团菌）
不生长
生长
可能是军团菌
鉴定： 菌落特征 生化反应 直接荧光抗体染色
自学：产碱杆菌属 P345
• 临床意义 • 生Байду номын сангаас学特性 • 微生物学检验
思考 • 非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、
特点 ？
• 铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检
二、概述部分（自学）
• 生物学特性 • 致病物质和所致疾病 • 微生物学检验 • 药物敏感试验
三、铜绿假单胞菌
（一）细菌特性 1. 形态染色 革兰阴性杆菌，菌体细长， 且长短不一，有时呈球杆状 或丝状，单个、成对或短链 状排列，无芽胞，有荚膜， 菌体一端有单鞭毛。
2. 培养特性
• 专性需氧，最适生长温度25~30℃，可
1. 形态染色 革兰阴性杆菌，有端鞭 毛或侧鞭毛，动力阳性。 无芽胞，无荚膜
革兰染色
菌落扫描电镜图
免疫荧光染色
2.培养特性 需氧菌，首次分离需5%CO2， 营养要求严格，常用培养基为缓 冲活性炭-酵母琼脂培养基 （BCYE）。
非发酵菌的鉴定流程
非发酵菌的鉴定流程英文回答：Identification of Non-Fermenting Gram-Negative Bacilli (NFGNB)。
Non-fermenting Gram-negative bacilli (NFGNB) are a group of bacteria that do not ferment glucose as their primary energy source. They are typically oxidase-positive and catalase-positive, and they often have a distinctive growth pattern on MacConkey agar. NFGNB are commonly found in the environment, but they can also cause infections in humans, particularly in immunocompromised patients.The identification of NFGNB can be challenging, as they are a diverse group of bacteria with a wide range of phenotypic characteristics. However, there are a number of tests that can be used to help identify NFGNB, including:Oxidase test: The oxidase test is a simple and rapidtest that can be used to differentiate between oxidase-positive and oxidase-negative bacteria. Oxidase-positive bacteria, such as NFGNB, will produce a purple color when exposed to oxidase reagent.Catalase test: The catalase test is a simple and rapid test that can be used to differentiate between catalase-positive and catalase-negative bacteria. Catalase-positive bacteria, such as NFGNB, will produce bubbles of oxygen when exposed to hydrogen peroxide.Growth on MacConkey agar: NFGNB typically have a distinctive growth pattern on MacConkey agar. They will often form pale, non-lactose-fermenting colonies that are surrounded by a zone of hemolysis.API 20NE: The API 20NE is a commercial identification system that can be used to identify a wide range of NFGNB. The system uses a series of biochemical tests to determine the identity of the bacteria.中文回答：非发酵革兰阴性菌的鉴定流程。
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非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
（7）硫化氢：腐败希瓦菌是非发酵菌中唯一在KIA和TSI上产硫化氢的菌种。
5. 常见不发酵G-杆菌的初步分群鉴定6.O-F试验：O/F培养基（蛋白胨和糖类的比例为1:5），溴甲酚紫指示剂，其中一管用石蜡密封，另一管暴露于空气中。
（一）、. rRNAⅠ群/ 假单胞菌属(Pseudomonas)1.（1）直或微弯无芽孢G-杆菌，OXI+，动力+（一个或多个极鞭毛），严格需氧，氧化利用葡萄糖、触酶+、McC生长，水溶性色素。
（2）本属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、产碱假单胞菌和类产碱假单胞菌。
2. 铜绿假单胞菌（1）分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。
（2）感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人及静脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处（3）囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具有生物膜（其产生的大量藻酸盐包围了菌体所致），导致本病的治疗困难和高死亡率。
（4）其淡蓝色脓性渗出物及绿脓素的生姜样气味具有特征性。
3. 铜绿假单胞菌的耐药性（1）本菌对氨苄西林、安美汀、四环素、优力新、一、二代头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等天然耐药（2）各种抗生素治疗过程中都可能产生耐药，耐药率及多重耐药株上升较快。
（3）耐药机制：生物膜及外膜障碍、胞外灭活或钝化酶、主动外排系统将抗生素泵出胞外、抗菌药物作用靶位改变4. 生物膜（1）生物膜由依靠胞外产物而吸附于固体表面的微生物集落构成，并能结合有机和无机成分，形成包含复杂的理化过程和生物群落的相互作用。
（2）如正常菌群与上皮细胞表面受体结合而黏附，并分泌胞外多糖聚合物，使细菌以非常精细的方式相互粘连，形成膜状物，能发挥屏障和占位性保护作用，使外来病菌不能定植而通过侵入门户侵袭机体。
5. 铜绿假单胞菌感染的控制：（1）易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感染的病房；各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应避免被铜绿假单胞菌污染；采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调查和监控；噬菌体治疗：6. 铜绿假单胞菌的检验（1）标本采集：按疾病和检查目的，分别采取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等；（2）医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。
（3）标本镜检为G-，有动力的杆菌（4）分离培养：普通培养基经18-24h形成圆形、扁平隆起、光滑湿润菌落。
大多数产生绿脓素或荧光素。
少数可产生其他颜色色素，如红脓素（红色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。
McC经18-24h形成微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心呈棕绿色。
（5）生化鉴定：氧化酶+，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚-，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶+。
（1）形态学特性：细长G-杆菌，极单鞭毛，（2）培养特性：A. 严格需氧，氧化利用葡萄糖、McC生长，最适生长温度35℃，4℃不生长，42℃可生长；B. 在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素（荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌也可产生）；C. 血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环；D. 有时可产生水滴样菌落，无色素不溶血（囊性纤维化病人）；（3）铜绿假单胞菌的分型：药敏分型、血清学分型：菌体O及H抗原、噬菌体分型、质粒指纹图谱分析、重复序列PCR、脉冲场凝胶电泳；（4）检验结果分析与报告：结合临床感染症状进行分析；患者血、尿液及无菌体液中分离到铜绿假单胞菌，特别是反复检出即可确定是感染病原菌；如无感染的临床表现，应作为正常菌群。
7. 荧光假单胞菌（1）见于水和土壤中，都可作为咽部的正常菌群存在，是人类少见的条件致病菌（2）荧光假单胞菌和污染的血液制品关系密切，可见于近期接受过血液制品而致菌血症的患者。
（3）丛极鞭毛，产青脓素，但不能产绿脓素，4℃生长, 42℃不生长, 最适温度25-30℃。
（二）、rRNAⅡ群/ 伯克霍尔德菌属1.（1）所有rRNAⅡ群的细菌都被归入一个新属，伯克霍尔德菌属(Burkholderia)。
（2）本属菌包括13个种，其中伪马勒伯克霍尔德菌B. pseudomallei、洋葱伯克菌B. cepacia、唐菖蒲伯克氏菌B. gladioli和皮氏伯克菌B. pickettii与人类疾病相关（3）本属其他菌种与植物或动物有关而与人类疾病无关。
2. 伪马勒伯克霍尔德菌（1）生长有特定的生态区域，存在于赤道南北纬20度之间的土壤和不流动的水中，主要在泰国和越南。
本菌在美国主要是从越战士兵和去东南亚的旅游者中发现，可致人或动物类鼻疽。
（2）大多数感染无症状，只能通过血清学诊断。
（3）本菌的一个特点是可潜伏感染，首次接触多年后复发。
传播主要是通过呼吸道或破损的皮肤的直接接触，对类鼻疽的明确诊断依（4）本菌在大多数实验室常规培养基中易生长，并产生皱缩形菌落，呈红棕色，在形态上同斯氏假单胞菌有些相似，另外本菌还可产生刺激性泥土气味3. 洋葱伯克霍尔德菌（1）是一种植物病原菌，从80年代早期开始本菌作为条件致病菌出现，在慢性肉芽肿和囊性纤维化的病人中常引起高死亡率和肺功能的全面下降。
（2）本菌是非发酵菌中仅有的两种赖氨酸脱羧酶+的细菌之一（另一种是嗜麦芽窄食假单胞菌）。
（3）可从各种水源和潮湿表面分离到，能在某些消毒剂（如铵盐、聚维酮碘、洗必泰等）中生长，也可生长于有氮源的蒸馏水中（4）本菌对氨基糖苷类抗生素耐药，对TMP/SMZ敏感，因此常用此药治疗洋葱伯克菌感染。
3. 伯克霍尔德菌属微生物学检查法（1）标本：脓液、血液、鼻液等；（2）直接涂片镜检：荧光染色法；（3）分离培养与鉴定：BAP、MAC；（4）抗原检测：LPS、蛋白共同Ag；（三）、rRNAⅢ群（1）包括两个菌属：丛毛单胞菌属Comamonas和食酸菌属Acidovorax；（2）食酸丛毛单胞菌是本属菌中最常从临床标本中分离到的，可通过OF果糖和甘露醇产酸、乙酰胺+而与其他菌相区别，还是产生桔黄色吲哚反应的唯一细菌；（四）、rRNAⅣ群/ 短波毛单胞菌属（1）短波毛单胞菌属B. revundimonas包括两个菌种：缺陷短波毛单胞菌B. diminuta和泡囊短波毛单胞菌B.vesicularis（2）具有一条短波（0.6-1μm）紧密螺旋的单极鞭毛。
对大多数碳水化合物无反应或反应很弱，属于产碱的假单胞菌。
（3）泡囊短波毛单胞菌生长缓慢，通常需培养48小时才可见菌落，并产生深黄到桔黄的色素，通过七叶苷水解+而易与其他假单胞菌区别。
（五）、rRNAⅤ群/窄食单胞菌属（1）窄食单胞菌属（Stenotrophomonas）是一个新命名的菌属，有2个菌种，嗜麦芽窄食单胞菌S. maltophilia和S. Africana。
（2）在1961年根据其鞭毛特征命名为嗜麦芽假单胞菌，1983年根据核酸同源性和细胞脂肪酸组成等归入黄单胞菌属，命名为嗜麦芽黄单胞菌，但由于其无黄单胞菌素，无植物病原性，能在37℃生长，且为极丛鞭毛，与其他黄单胞菌不同。
（3）1993年此菌命名为嗜麦芽窄食单胞菌1. 嗜麦芽窄食单胞菌（1）分布广泛，可引起条件感染，是临床第三位最常见的非发酵菌，是一种重要的医院获得性病原体，本菌可分离于几乎所有部位，最常见的是呼吸道。
（2）可致多种疾病，包括肺炎、菌血症、心内膜炎、胆管炎、脑膜炎、尿道感染和严重的伤口感染等。
（3）危险因素：机械通气、广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。
嗜麦芽窄食单胞菌（4）下列特征可用来推测性鉴定：①在血平板或麦康凯平板上生长良好；②氧化酶-；③O/麦芽糖产酸，但O/葡萄糖可-；④赖氨酸脱羧酶+；⑤一些菌株产黄色色素；⑥抗生素敏感方式：对大多数抗生素耐药，包括氨基糖苷类和碳青霉烯类，但对TMP/SMZ敏感。
（5）嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛，血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。
（6）根据赖氨酸脱羧酶试验+和DNA酶+、氧化酶-可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。
（7）本菌的一个重要特征是对氨基糖苷类抗生素、碳青霉烯类天然耐药，但TMP/SMZ天然敏感。
不动杆菌属1. 开始被归于奈瑟菌科，但最近又被归入莫拉菌科。
根据DNA-DNA杂交和营养特征将不动杆菌属分为25个基因种，但只有10个基因种有菌名：乙酸钙不动杆菌，主要分离自土壤、鲍曼不动杆菌、溶血不动杆菌、琼氏不动杆菌、约翰逊不动杆菌、洛菲不动杆菌2. 鲍曼不动杆菌（1）广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和干燥的表面生存，也可存在于健康人的皮肤，通常不致病，但对体弱者可引起感染。