实验 细胞内液泡系和线粒体的活体染色
实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察
1
2
实验原理
线粒体的超活染色 线粒体的超活染色
about Janus green B
线粒体的专一性活体染色剂
Janus green B
染色原理 线粒体
蓝绿色（氧化状态）
细胞色素氧化酶
细胞质中
Janus green B
无色（还原状态）
实验原理
细胞壁 线粒体 细胞核
液泡
细胞质
洋葱鳞茎内表皮细胞
实验原理
实验步骤
线粒体的超活染色 注意事项 液泡系的超活染色
在载玻片上加一滴 请将载玻片置于水池上 在载玻片上加一滴 的搁架上再滴加染液 Janus green B 中性红 取一小片洋葱鳞茎 内表皮细胞 置于Janus green B 中20min
洋葱鳞茎内表皮细胞 取一小片洋葱鳞茎 应尽量撕取得薄一些
内表皮细胞 置于中性红 中15min
应使洋葱内表皮 完全浸在染液中 盖上盖玻片后，将
吸去染液,加一滴 吸去染液,加一滴 多余的Ringer液吸去 Ringer液,盖上盖玻片 Ringer液,盖上盖玻片
显微镜下观察
采用显微互动进行观 察，请先在显微镜上 调节好后，再打开电脑
显微镜下观察
实验目的
实验目的
1 观察植物活细 胞内线粒体、液泡 系的形态、发育和 分布
2 了解细胞和细胞 器的超活染色技术
实验原理
实验原理
活体染色技术 线粒体及其超活染色 液泡系及其超活染色
实验原理
概念
利用某些无毒 或毒性很小的 染料来显示细 胞内某些天然 结构，而不影 响细胞的生命 活动或产生任 何物理、化学 变化以致引起 细胞的死亡。
细胞壁 线粒体 细胞核 液泡 细胞质
细胞生物学实验四 液泡系和线粒体的活体染色
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色一、实验目的通过荧光活体染色观察液泡系和线粒体的形态结构及特点。
二、实验原理荧光活体染色法可以为我们提供高质量，高效率的细胞形态结构信息，其液泡系和线粒体都是细胞内非常重要的细胞器。
液泡系：是一种由膜包裹的小颗粒，由高度表达蛋白的外部囊泡和腺体细胞构成。
液泡系有多种类型，包括突触小泡、内分泌小体和溶酶体等，它们在细胞内部扮演着很重要的角色。
液泡系具有在荧光显微镜下能够显现的一些特定特征，如大小、形状、亮度和分布等。
活体染色可以提供很好的分辨率和细节，从而帮助我们更好地了解液泡系统的形态和功能。
线粒体：是一个直径约为1微米的双层膜结构，是细胞中的能量“发电厂”，在细胞内分解代谢物质，并生成ATP分子，以提供细胞各项生物学过程所需的能量。
可见线粒体可以帮助我们了解线粒体的数量、大小、形状和位置等特征，这有助于我们了解其功能和代谢状态。
三、实验材料激光共焦显微镜，激光荧光探针，放置在组织玻片上的细胞，PBS磷缓冲液，人工合成影响线粒体功能小分子等药物。
四、实验步骤1. 将细胞悬液滴在组织玻片上。
2. 添加荧光探针，荧光探针可以帮助我们区分液泡系和线粒体。
3. 给细胞注射小分子化合物，如人工合成影响线粒体功能小分子等，以研究药物对细胞器的影响。
4. 用激光共焦显微镜观察荧光探针和小分子化合物的荧光信号。
5. 分析显示出的细胞器信息，记录液泡和线粒体的数量、大小、形状和位置等特征。
五、实验注意事项1. 需要小心操作激光共焦显微镜，以避免损坏昂贵的设备或可能对人体存在危害的激光。
2. 荧光探针和小分子化合物需要在适当的浓度下添加，以避免对细胞的生长和存活产生不必要的影响。
3. 细胞的准确选择和应用荧光信号分析需要经验和技能支持，因此可能需要学习其他课程或培训活动，以便更好地完成任务。
六、实验结果正确的观察、检测和记录结果是实验的关键要求。
液泡系和线粒体的活体染色结果应包括液泡和线粒体的数量、亮度、位置和其它相关特征。
实验 细胞内液泡系和线粒体的活体染色
1. 原理：中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，变色 范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。其胶粒表面 带阳离子，被染部分具阴离子，它们彼此之间就 发生了电吸附作用（静电吸附）。
在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收 中性红并向液泡中排泌。由于液泡为酸性，因此进入液 泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。原生 质和细胞壁一般不着色。
软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高 尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维 等，因而液泡系发达。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡 系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核 不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。
2. 健那绿(Janus green B)染液，原来也曾译为 詹纳斯绿B，是专一性染线粒体的活细胞染料，线 粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有 色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还 原，成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体 呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那 绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍 显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。
死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液 泡内，用中性红染色不产生液泡着色现象；相反，中性 红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合， 而使原生质与细胞核带微红色 。
在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡 除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、 微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬 泡，都是由一层单位膜包围而成。这些细胞器几乎 每个细胞都有。
细胞内液泡系和线粒体 的活体染色
一、实验目的
1. 了解活体染色的定义及原理； 2. 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法
和步骤。
二、定义及原理
实验二液泡系和线粒体的活体染色法
实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。
动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。
在一切动物细胞内皆有。
通常为圆形泡状，数目多少不定。
除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。
液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。
液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。
动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。
在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。
根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。
小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。
经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。
含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。
如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。
此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。
为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。
因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。
细胞材料要浸泡在生理盐水中。
长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。
（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。
3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。
实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同， 通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。 体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体 内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结 构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活 染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组 织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活 细胞的某种结构上而显色。
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活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料 的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而 被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼 此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活 体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染 料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染 料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、 胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有 专一性。
二、液泡系的超活染色与观察
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高 尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着 色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
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小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察
⑴ 实验前，把小麦培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其 发芽，胚根生长到1cm以上备用。
⑵ 用双面刀片把小麦幼苗根尖（约1～2cm长）小心切一 纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色 5～10min。
⑶ 吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子 轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
细胞实验课件液泡系和线粒体的活体染色
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十 分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂， 只将液泡染成红色。在细胞处于生活状态时， 细胞质和细胞核不被中性红染色。
线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细 胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿Ｂ对线粒体 具有专一性的染色，是毒性最小的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ染色是由于线粒体中的细胞色素氧 化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈 现蓝绿色，而周围的细胞质被还原成无色的色 基。
液泡系和线粒体的活体染色
实验目的 掌握动、植物细胞活体染色的原理 和相关的技术。
液泡系和线粒体的活体染色
1.仪器、用具 2.材料
人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎、牛蛙、黄豆根 尖 3.试剂 Ringer溶液、1%和1/3000中性红溶液、 1%和1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液
Байду номын сангаас
液泡系和线粒体的活体染色
人口腔上皮细胞线粒体活体染色的观察 漱口，用牙签刮取口腔细胞，涂片。 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液染色10min。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，镜检。
液泡系和线粒体的活体染色
洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮。 1/3000中性红溶液染色5-10min。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，镜检。
液泡系和线粒体的活体染色
作业 实验报告，观察到的图像要画图。
液泡系和线粒体的活体染色
洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮。 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液染色10min。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，镜检。
液泡系和线粒体的活体染色
黄豆根尖细胞液泡系的活体染色 将黄豆根尖切一薄的纵切面。 1/3000中性红溶液染色5-10min。 吸去染液， 加Ringer液。 盖片，并用镊子轻轻地下压盖玻片， 使根尖压扁。 高倍镜下镜检。
实验3 线粒体和液泡系的超活染色与观察
【实验原理】
高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用 高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多 糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与 Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类 的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色 络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存 在。
细胞生物学 Fisheries College Cell Biology
实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察
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一、实验目的
１、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态数量与分布； ２、学习一些细胞器的超活染色技术。
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↓ 盖上盖玻片，显微镜下观察
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口腔颊部上皮细胞示线粒体
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２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察
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五、实 验 步骤
• 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
↓
刮下的粘液状物放到载玻片的染液滴中 ↓
染色10~l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液）
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实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察
五．实验结果
4. 在小麦或黄豆根尖细胞制片中，可见细 胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色 的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后， 由生长点向延长区观察，在一些已分化长 大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一 个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部 分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞 壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持 它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死 亡。
七．实验作业
1．绘制口腔上皮细胞线粒体形态示意 图。 2．绘制蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡形 态示意图。 3.清谈谈实验中有哪些注意事项?
八．思考题
1．高等动物和高等植物细胞中的线粒体形态、数 量和分布上有何不同？ 2．用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什 么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？ 3．小麦或黄豆根尖经中性红超活染色后，为什么 看到生长点的细胞中液泡小而多，而且染色深， 延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？植物细胞 液泡系的形态演进有何规律性？ 4．高等动物和高等植物细胞中的液泡系（高尔基 体）分布上有何不同？ 5．谈谈徒手切片、撕片、涂片技术的要点。
（三）材料
人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞 小麦或黄豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
五．实验结果
线粒体和液泡系的活细胞染色
【作 作
业】
一、绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？ 二、线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？
Experiment 10
线粒体和液泡系的活 细胞染色
【实验目的 实验目的】 实验目的
1．掌握细胞超活染色制作光镜标本的方法 ． 2. 了解线粒体和液泡系的基本形态、数量和分布 了解线粒体和毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构 而不影响细胞生命活动的一种染色方法。活染技术可用于研究生活状态下的细 胞形态结构及生理和病理变化。活体染色包括体内活染和体外活染两类。体外 活染又称为超活染色，是从活的动植物体分离出组织小块或部分细胞，以染液 浸染，使得染料选择性结合在细胞的特定结构上而显色。 詹纳斯绿 B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料毒 性小，是活体染色最重要的染料，对于线粒体和液泡系各具专一性。 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿 B 是线垃体的专一性活体染色剂，这是因为线粒体内的细胞色素氧化酶系可使染 料保持氧化状态呈蓝绿色，而在线粒体周围的细胞质中染料被还原为无色的色 基。 细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括 高尔基复合体、溶酶体、微体、吞噬泡等。中性红是液泡系专一的活体染色剂， 可将活细胞中液泡系染成红色，中性红染色可能与液泡中的某些蛋白有关。
【实验内容】 实验内容】
一、口腔上皮细胞线粒体的超活染色 1. 在洁净的载玻片上滴2-3d詹纳斯绿B和中性红混和染液。 2. 用消毒牙签在口腔颊部刮取口腔黏膜上皮，在染液中搅匀，染色15min。 3. 盖上盖玻片后镜检。可见细胞质中散在的被染成亮绿色的短杆状或颗粒状 线粒体。 二、小鼠肝细胞的超活染色 1. 小鼠颈椎脱臼处死，迅速打开腹腔，剪取肝脏边缘较薄的组织，置于含 Ringer液的平皿中，挤压去除组织中的血液，洗涤2-3次后吸去Ringer氏液。 2. 平皿内加詹纳斯绿B和中性红混和染液，注意让组织块上表面微露在染液 外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，使线粒体着色。 3. 染色25-30min，可见组织块边缘染成蓝色。将组织块用Ringer氏液洗涤1 次后转移至载玻片上，用镊子将组织块拉碎，使部分细胞或细胞群从组织块 脱离分散。 4. 去除稍大的组织块，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，盖上盖玻片， 镜检。可见肝细胞中含量丰富的线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
实验四线粒体和液泡系的超活染色与观察
【课前预习】 1．什么是液泡系？ 2．为什么不能用一种活体染料同时观察 多种细胞器？
【目的要求】 1. 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态、发育和分布 2. 了解细胞和细胞器的超活线粒体是细胞内一种重要细胞器，细胞的各项活动所 需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。 活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示 活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种 染色方法。詹纳斯绿 B（Janus green B）是线垃体的专 一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离 后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体中 细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而 使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成 为无色状态。细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液 泡系染成红色。
【实验结果】
口腔上皮细胞的线粒体分布
洋葱内表皮细胞线粒体分布
植物根尖液泡的中性红染色
【实验报告】 1．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态 与分布并简要分析。 2．绘出小麦幼根根尖组织液泡系的形态 与分布并简要分析
【方法步骤】 1．线粒体的超活染色与观察 1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000詹纳斯绿 B1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃ 恒温染色10-15min，显微镜下观察。 2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察： 1/5000詹纳斯绿B溶液1-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻 片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。 2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察 小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片， 1/3000中性红溶液1滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温 水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。
实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察-精选文档
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同， 通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。 体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体 内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结 构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活 染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组 织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活 细胞的某种结构上而显色。
3、各部结构名称要在图的一侧引直线注明。各引 线要平行不得交叉。
4、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当， 并注意纸面的整洁。
实验报告
实验目的 实验用品 实验原理 实验方法 形态与分布 2. 绘示小麦根尖液泡系的形态与分布 3、什么是活体染色？要想获得体外活体染色成功
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料 的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而 被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼 此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活 体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染 料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染 料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、 胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有 专一性。
线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色。
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。
实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。
2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。
3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。
实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。
其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。
而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。
实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。
该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。
实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。
同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。
线粒体及液泡系的活体染色
线粒体及液泡系的活体染色一、实验目的掌握动、植物细胞活体染色的原理和技术。
掌握各种染料的染色原理。
使我们对细胞中的线粒体及液泡系有一定的了解。
二、实验原理a)活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害或毒性很小的一种染色方法。
它的目的是在保持细胞活性的前提下，显示细胞内的某些特定结构。
b)线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。
健纳绿可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
c)中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
d)亮焦油紫可用于活体染色，中性红用于染液泡系，健纳绿用于线粒体染色，次甲基蓝可用于染神经组织，尼罗蓝可用于染原生动物的大核。
三、实验试剂及器材a)实验试剂i.0.04%中性红生理盐水溶液：先配成1%中性红水溶液，再用0.65%氯化钠溶液将1%中性红水溶液稀释成0.04%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
ii.0.02%健纳绿生理盐水溶液：先配成1%健纳绿水溶液，再用0.9%氯化钠将1%健纳绿水溶液稀释成0.02%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
b)实验器材青菜叶、人口腔黏膜上皮细胞、载玻片、盖玻片、牙签、普通光学显微镜、刀片四、实验步骤a)口腔黏膜上皮细胞线粒体的染色观察i.取清洁载玻片，滴2滴0.02%健纳绿生理盐水溶液。
ii.用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，搅匀。
（注意事项：应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功。
）iii.染色10－l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)。
iv.盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察，拍照。
液泡系和线粒体的活体染色
实验三 液泡系和线粒体的活体染色
1实验目的与原理
1.1实验目的：观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； 掌握一些细胞活体染色的原理和技术。
1.2实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
2 实验材料与方法
2.1实验材料：洋葱鳞茎内表皮
2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/3000中性红溶液染色5~10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。
2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/5000詹纳斯绿B 溶液染色10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。
3 实验结果
图1中性红染色洋葱内表皮细胞 图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮 (X100) (X100)
在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边
图2是经詹纳斯绿B 染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。
液泡系和线粒体的活体染色及观察
五．实验结果
1.在人口腔粘膜上皮细胞制片中，可见扁平状上皮细胞的核周围胞 质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即线粒 体。
2. 在洋葱鳞茎内表皮细胞制片中，可见表皮细胞中央被一大液泡 所占据，细胞核被挤至旁边，在其周围有线粒体被染成蓝绿色， 呈颗粒状或线条状。
3. 在蟾蜍胸骨剑突软骨细胞制片中，可见软骨细胞为椭圆形，细 胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有许多被染成玫 瑰红色大小不一的泡状体。
微热（30~40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加 入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，
（三）材料
• 人口腔上皮细胞 • 洋葱鳞茎内表皮细胞 • 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞 • 小麦或黄豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察 1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量虽不同物种、
⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大 小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的 绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
二、实验原理
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染 料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸 性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳 离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可 以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染料， 而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可 能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被 细胞吸收。詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两 种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染 色各有专一性。
实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察
实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2、了解细胞的超活染色技术。
二、实验原理：活体染色是使生活有机体的细胞或组织进行特异性着色但对样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，既可以显示生活细胞内的某些特定结构又不会影响细胞的生活状态和造成细胞死亡。
通常分为体内活体染色和体外活体染色。
体外活体染色又称为超活染色。
活体染料主要是靠染料的“电化学”特性。
例如碱性燃料就是靠表面带有的阳离子与被染的细胞部分的阴离子相互吸引而着色。
詹纳斯绿B和中性红即是最常用的两种。
前者是线粒体的专一活性染色剂，线粒体中的氧化酶使染料氧化即有色状态（蓝绿色），而在周围空间中染料仍保持还原即无色状态。
中性红对液泡系的染色有专一性，而对核与胞质不着色。
三、实验用品：1 器材：显微镜，恒温水浴锅，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。
2 试剂：Ringer溶液（NaCl 0.85g，KCl 0.25g，CaCl20.03g，加蒸馏水100ml）；10%、1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热(30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存。
临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。
最好现用现配。
3 实验材料：人口腔上皮细胞，黄豆根尖。
四、实验方法：1 人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并搅动几下。
实验6线粒体和液泡系的超活染色与观察-文档资料
作
1.
业
绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布，
并简要分析
2. 绘示绿豆根尖液泡系的形态与分布
三、实 验 用 品
1、器材
显微镜、恒温水浴锅、剪刀、镊子、刀片、 载玻片、
盖玻片、吸管、牙签、吸水纸.
2、试剂
（1）Ringer溶液
（2）10%，1/3000中性红溶液
（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液
四、实验材料
人口腔上皮细胞
洋葱鳞茎内表皮 绿豆幼根根尖
五、实 验 步骤
1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
实验六 线粒体和液泡系的超活染色与观察
一、实验目的
１、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态数量与分布； ２、学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理
细胞的各项活动所需要的能量，主要通过线粒
体呼吸作用来提供。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实
地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生 命活动的一种染色方法。
结 果：在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的 细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰
红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡；然后，由
生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内,
液泡的染色较浅，体积增大,数目变少；在成熟区
细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细
胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓
滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液
↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
↓
刮下的粘液状物放到载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液） ↓ 盖上盖玻片，显微镜下观察
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色【实验目的】1.通过制片掌握活体染色方法2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞处死兔子的方法3.了解线粒体及液泡系在光镜及电镜下的基本形态结构【理论基础】1.活体染色的基本概念和实际应用，常见的活体染色剂2.生物体内线粒体的基本形态与功能（特别是线粒体所含的酶类），重点联系理论课“线粒体”一章中结构与功能部分3.液泡系的组成及在光镜和电镜下的形态特点，可参照理论课“细胞的内膜系统”的内容【实验内容】（一）兔肝细胞线粒体的活体染色[操作技能要求]1.学会静脉空气栓塞处死兔子的方法2.熟悉线粒体活体染色方法及注意事项[讲解和明确的内容]1.詹纳斯绿B进行线粒体活体染色的原理2.用詹纳斯绿B进行染色时为何让组织块上表面露在染液外面3.为什么要取兔肝边缘较薄的肝组织4.空气栓塞处死兔子的要点：注意兔子的固定方法，耳缘静脉的选择，注射的方向，针头进入血管的标志，注射的空气量以及注射器的选择[观察要点]1.注意观察光镜下肝脏线粒体的形状与分布2.观察电镜照片上线粒体嵴的数目与分布方式（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察[操作技能要求]1.捣髓法处死蟾蜍的方法2.学会液泡系的活体染色方法[讲解和明确的内容]1.为什么要选取蟾蜍胸骨剑突软骨最薄部分的一小片2.中性红作为液泡系活体染色剂的特点：在生活状态下中性红染色可能与液泡中的蛋白有关[观察要点]注意观察软骨细胞液泡系的形态及与周围软骨细胞的区别[相关理论内容]1.光镜下观察到的液泡系包括哪些细胞内结构2.细胞内膜系统的组成（三）依据提纲讲解线粒体及溶酶体的理论内容。
实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害毒的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通过把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B(Janus peen B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞、洋葱磷茎内表皮细胞蟾蜍胸骨剑突软骨细胞、小麦种子或黄豆幼根根尖。
2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：（一）线粒体的超活染色与观察1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
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一、实验目的
1. 了解活体染色的定义及原理； 2. 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法
和步骤。
二、定义及原理
• 所谓活体染色，是指利用某些无毒或毒性较小的染色 剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实性，而不影 响细胞的生命活动，不产生任何物理化学变化以致引 起细胞的死亡的染色方法。即在染色和观察过程中， 细胞或组织始终保持其生命状态。
死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液 泡内，用中性红染色不产生液泡着色现象；相反，中性 红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合， 而使原生质与细胞核带微红色 。
在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡 除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、 微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬 泡，都是由一层单位膜包围而成。这些细胞器几乎 每个细胞都有。
1. 原理：中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，变色 范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。其胶粒表面 带阳离子，被染部分具阴离子，它们彼此之间就 发生了电吸附作用（静电吸附）。
在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收 中性红并向液泡中排泌。由于液泡为酸性，因此进入液 泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。原生 质和细胞壁一般不着色。
软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高 尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维 等，因而液泡系发达。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡 系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核 不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2. 健那绿(Janus green B)染液，原来也曾译为 詹纳斯绿B，是专一性染线粒体的活细胞染料，线 粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有 色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还 原，成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体 呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那 绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍 显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。
• 活染法弥补了活体观察法不能显示细胞精细结构的不 足，也避免了固定染色法对细胞结构的破环和造成人 为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料较少， 能显示出的结构和种类也不多。
• 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前 者是将染料注射于生物体内，染色后再取材 观察。后者是取材后，对离体的活细胞进行 染色。为保持离体细胞的正常存活，染色时 需供给细胞以正常的温度，渗透压，PH等。
三、操作程序
• 用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的 剑突部分，剪取一小块剑突软骨边缘最薄的部分，放入载片中 央的中性红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜 观察，可见软骨细胞为椭圆形、细胞核清楚易见，在细胞核的 上方有许多被染成玫瑰红色的大小膜泡，此区即液泡系。
• 取蛙肝脏边缘米粒大小的一块组织，放入10--20ml生理盐水中 洗涤去除血液，用吸水纸吸去多余水分，将肝组织置于滴有健 那绿-B的载玻片上，用镊子撕拉肝组织，然后将整块的肝组织 移出，染色10min左右，加盖玻片观察破碎的肝细胞。可见玻片 上有形状规则的椭圆形血细胞，形状不规则的近于方圆形的肝 细胞、细胞核及核仁及远远小于细胞的做不规则运动的线粒体。
• 用镊子撕取玉树叶叶片下表皮，健那绿-B染色10分钟，可在细 胞质中看到随细胞质环流而运动的被染成兰色的线粒体;
• 撕取莴笋叶下表皮，置于中性红中染色10分钟，可见许多大小 不同的液泡。
实验报告
绘制中性红活染的液泡系图和健 那绿-B活染的线粒体图，做好图例和 标注。