实验九 细胞组分的分级分离

注意事项
1．研磨时要在低温进行。 2．过滤前要先将纱布湿润。 3．离心前要注意配平。
作业与思考
• 1.简要说明分级分离细胞的原理及其意义。 2.比较一下分离细胞核时涂片①、②、③ 有什么不同？涂片③在你的实验结果中 纯度如何？ 3.描述一下涂片⑤所见结果。
谢 谢大 家
Baidu Nhomakorabea高速离心分离提取线粒体步骤：
1.• 将上述装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出， 配平后，以17000r/min离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。 2.加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L• 氯化钙液• 1ml， • • 用吸管吹打成 悬液，• 以17000r/min离心20分钟。将上清吸入另一试管。 留取沉淀物，加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙 溶液混匀成悬液。 3.取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于干净的载玻片上（分 别标记为④、⑤），涂片，各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液， 盖上盖片染20分钟。 4.油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。
• 4.将装有滤液的离心管配平后，放入离心机， 2500r/min离心15分钟；⑴取上清液，移入高速离 心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体 用;⑵同时涂一张上清液片②做好标记，自然干燥； ⑶余下的沉淀物进行以下步骤。 • 5.用6ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液， 悬浮沉淀物，以2500r/min离心15分钟弃上清，将 残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载 玻片上，涂片③，自然干燥。 • 6.将①、②、③涂片用1％甲苯胺兰染色后盖上盖 片即可观察。
• 细胞核的分离提取 • 高速离心分离提取线粒体
细胞核的分离提取步骤：
1.椎脱臼法法处死小鼠，迅速开腹取肝脏，剪成小 块，置于盛有0.9％NaCl烧杯中，反复洗涤，除去 血污，用滤纸吸去表面的溶液。 2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，取8ml预冷 的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，先加入 少量该溶液于平皿中，尽量剪碎组织后，再全部 加入。 3.将剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸 入盛有冰块的器皿中，研磨3～5次，用8层湿纱布 过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片①，做 好标记，自然干燥。
实验九
细胞组分的分级分离
实验目的
• 通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞 的组分，了解其原理、过程及作用。
实验原理
细胞内不同结构的比重和大小都不同。
在同一离心场内的沉降速度也不相同。根
据这一原理，用不同的转速的离心法，可
将细胞内各种组分分级分离出来。
速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀
实验内容