(x)小鼠骨髓嗜多染红细胞微

结果评价
♦ 正常小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率为千
分之五以下，超过千分之五为异常 。
实验步骤（制片）
♦ (4)固定 放在甲醇液中固定5~1Omin，如
当日不染色，也需固定后保存。 ♦ (5)染色 在Giema应用液中染色10~l5min， 最后用蒸馏水冲洗。
观察计数
♦ 选择细胞分散均匀、形态完整、染色良好的区
域，在油镜下按一定顺序进行嗜多染红细胞 (PCE)及微核计数。嗜多染红细胞呈灰蓝色， 而成熟红细胞呈桔红色。PCE中微核的嗜色性 与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。典型的微核 呈圆形，边缘光滑、整齐，其直径通常为红细 胞的1/20~1/5。偶尔也可呈椭圆形、肾形、马 蹄形及环形。PCE中微核多数为一个，也可能 有两个或两个以上的微核，此时仍按一个有微 核的PCE计算。每只动物计数200O个PCE，观察 含有微核的PCE数，微核率以千分率表示。
实验原理
♦ 骨髓中PCE数量充足，微核容易辨认，
而且微核自发率低。由于这些优点，骨 髓的PCE细胞成为骨髓微核试验的首选 细胞群。故一般检查嗜多染红细胞中微 核的多少来鉴别是否异常;
试剂和材料
♦ 主要试剂 ♦ 胎牛血清 ♦ 材料： ♦ 小平皿、滤纸、载玻
片、离心机、显微镜 ♦ 成年小鼠，体重1822克。
实验步骤（制片）
♦ (2)离心 以10OOrpm离心5min，用毛细吸
管吸去上清液。如沉淀物较多，可留下 少许血清，否则应吸去全部上清液。最 后，用毛细吸管尖端把沉淀物混匀。 ♦ (3)涂片 吸取一小滴混悬液滴于玻片的 一端，按常规血涂片法涂片，约2·3cm长 度，在空气中晾干(若立即染色，可在酒 精灯上稍加烘烤)。
实验步骤
♦灌药 ♦制片
实验步骤（灌药）
♦ 骨髓嗜多染红细胞微核试验要求给药后
短期内，能在骨髓内达到有效药物浓度， 常由腹腔和经口给药，给药次数可有三 种方式:一次给药、两次给药(间隔24h) 以及每日ห้องสมุดไป่ตู้次，连续五次给药。
实验步骤（制片）
♦ (1)骨髓液的制备
将小鼠颈椎脱白处死， 剪取双侧股骨，剔净肌肉，用滤纸擦掉 附在股骨上的血污和肌肉，剪掉股骨头， 露出骨髓腔。用注射器(6号针头)吸取胎 牛血清lmL，将针头插入骨髓腔内少许， 将骨髓腔内骨髓冲入离心管中，然后， 用毛细吸管轻轻地吸打骨髓，使成均匀 的混悬液。
实验原理
♦ 微核检测既可直接检测体内细胞，亦可利用培
养细胞进行检测。凡具分裂能力易于获得的培 养细胞以及很多其他细胞，都可用于显示微核。 在骨髓和外周血液的有核细胞中均可见到。但 是，在这类只有少量胞浆的有核细胞中，微核 常难以与正常核叶及核的突出物相鉴别，而在 无核的嗜多染红细胞(PCE)的胞浆中，微核却 十分易于辨认，PCE是分裂后期的红细胞由幼 年发展为成熟红细胞过程中的一个阶段，此时 红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体， 染色后易与成熟红细胞鉴别。
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试 验
目的：了解小鼠骨髓嗜多染红细胞微 核实验原理，练习实验方法。
实验原理
♦ 微核试验（micronucleus test)是检测环境致
癌物的方法。微核实质上是·孤立畸变染色体在 间期的存在形式。在癌症患者末梢血淋巴细胞 浆中，表现有一定的规律性。也存在于受环境 污染的鱼类、两栖类和鸟类末梢血有核红细胞 胞浆内，并能用药物诱发，使实验动物或胚胎 在出现恶性体征之前，在血细胞或其他细胞中 出现微核。因此微核试验是筛选致癌物、致突 变物的重要手段之一，也是预报致癌危险及其 他遗传危害的短期测试方法。