制药用水微生物检查方法的验证PPT课件
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应用隔离系统重要的目的 ⒈是保护产品免受外源性污染保证无菌实验结果的可靠性，实
现一次检出的要求。 ⒉是保护操作人员安全。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度 须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试验环境进行监控。
方法验证的必要性
⒈为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方 法是至关重要的。因此试验前必须对选择的方法进行验 证。
如培养基的质量、检验人员的操作误 差等。
试验全方面验证 如试验环境，培养基，供试液的制备，灭菌方法等全部进 行验证。 当验证试验符合要求时，就可认为在该试验条件下该供试 品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，供试品检 验结果可真实的体现。
验证方法
菌液制备 50～100cfu/ml。 验证方法 试验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。 结果判断 供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率
检查方法的验证
试验环境 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁 净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
检验依据 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业 洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度验证。
-2010版药典
隔离系统的应用
微生物检查方法验证
介绍内容
一、微生物的基础知识 二、微生物检查方法验证
微生物基础知识
微生物（microorganism, microbe）是一些 肉眼看不见的微小生物的总称。 微生物（microorganism）包括细菌、支原 体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真 菌 （霉菌、酵母菌和放线菌）等。
⒉证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于 被检供试品的微生物污染的检验。
检验结果的影响因素
⒈供试品的组分 生 菌
⒉环境影响
⒊检验方法 ⒋检验条件
抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化 剂，这 些组分在一定浓度下对微
物起一定的抑制作用也可对污染
造成损伤。 不同类型的微生物及不同的存活状态
对环境的抗性是不同的。
细菌的繁殖
细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其 特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式 繁殖。
细菌的形态
⒈细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观 察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才能观察。
⒉一般以微米（µm）作为测量单位。 ⒊在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌
均不低70% 。
验证方法
⑴按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法 及下列要求进行。 ⑵对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 ⑶验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各
试验菌每次试验的回收率。
试验菌株 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、 黑曲霉、枯草杆菌。
菌液制备 同计数培养基的适用性检查。
需要40年之久。
微生物的特点
适应强 易变异 多数细菌能耐0～－196℃的低温；硫细菌 可在250～300℃的高温条件下正常生长； 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生 活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下 能保藏几十年、几百年。
微生物的类群和形态结构
微生物按其结构、化学组成及生活习性等分 为三大类： 原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原 体、立克次氏体、螺旋体等 真核细胞型：真菌 非细胞型：病毒 噬菌体
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/30
霉菌菌落形态
霉菌在孟加拉红培养基上的形态
酵母菌显微镜下形态
微生物检查法
微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。 检查项目包括 细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 检查方法 多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法。
真菌的形态具有多样性，大小不一，大的用肉 眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃 至千倍方可观察到。其形态分单细胞、多细胞， 单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌（yeast）。 多细胞由菌丝和孢子组成，并交织成团。
药品污染常见的真菌
毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 一、毛霉属（Mucor Micheli ex Fries） 毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分 高的粮食及食品的霉烂变质。
和螺杆菌。 ⒋经革兰染色法（Gram stain）可将细菌分成两大
类：即革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）。
真菌（fungus；eumycetes）
是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道 的种超过10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的 菌丝体。许多菌丝在一起统称菌丝体。菌丝体在 基质上生长的形态称为菌落。
根霉属（RhizopuΒιβλιοθήκη BaiduEhrenberg）
根霉属广泛应用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅 速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。
曲霉属（Aspergillus）
曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质，为有隔的多细 胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有强烈的致癌性。
青霉属
菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出， 无足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一 级分枝的小梗上，长出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。 本属的常见产毒霉菌有9个种，其中展青霉可产生展青霉素，是一种 神经毒素，并具有致畸、致突变和致癌性；
（1）试验组
① 平皿法 取最低稀释级供试液1ml和50～ 100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂 培养基(平行制备2个平皿)，按平皿法测定其菌 数。
②薄膜过滤法 取最低稀释级供试液，过滤， 冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试 验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。
（2）菌液组 所加的试验菌数。 （3）供试品对照组 测定供试品本底菌数。 （4）稀释剂对照组 用相应的稀释液替代供试品，
微生物的特点
种类多 分布广 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前 已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的 20%。
微生物的特点
各体小，面积大 物体的表面积和体积之比称为表面积 大肠埃希菌的表面积是人的30万倍。
微生物的特点
吸收多 转化快 如大肠埃希菌在合适条件下，每小时可以 消 耗相当于自身重量2000倍的数量，而人体 则
现一次检出的要求。 ⒉是保护操作人员安全。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度 须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试验环境进行监控。
方法验证的必要性
⒈为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方 法是至关重要的。因此试验前必须对选择的方法进行验 证。
如培养基的质量、检验人员的操作误 差等。
试验全方面验证 如试验环境，培养基，供试液的制备，灭菌方法等全部进 行验证。 当验证试验符合要求时，就可认为在该试验条件下该供试 品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，供试品检 验结果可真实的体现。
验证方法
菌液制备 50～100cfu/ml。 验证方法 试验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。 结果判断 供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率
检查方法的验证
试验环境 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁 净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
检验依据 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业 洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度验证。
-2010版药典
隔离系统的应用
微生物检查方法验证
介绍内容
一、微生物的基础知识 二、微生物检查方法验证
微生物基础知识
微生物（microorganism, microbe）是一些 肉眼看不见的微小生物的总称。 微生物（microorganism）包括细菌、支原 体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真 菌 （霉菌、酵母菌和放线菌）等。
⒉证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于 被检供试品的微生物污染的检验。
检验结果的影响因素
⒈供试品的组分 生 菌
⒉环境影响
⒊检验方法 ⒋检验条件
抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化 剂，这 些组分在一定浓度下对微
物起一定的抑制作用也可对污染
造成损伤。 不同类型的微生物及不同的存活状态
对环境的抗性是不同的。
细菌的繁殖
细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其 特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式 繁殖。
细菌的形态
⒈细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观 察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才能观察。
⒉一般以微米（µm）作为测量单位。 ⒊在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌
均不低70% 。
验证方法
⑴按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法 及下列要求进行。 ⑵对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 ⑶验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各
试验菌每次试验的回收率。
试验菌株 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、 黑曲霉、枯草杆菌。
菌液制备 同计数培养基的适用性检查。
需要40年之久。
微生物的特点
适应强 易变异 多数细菌能耐0～－196℃的低温；硫细菌 可在250～300℃的高温条件下正常生长； 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生 活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下 能保藏几十年、几百年。
微生物的类群和形态结构
微生物按其结构、化学组成及生活习性等分 为三大类： 原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原 体、立克次氏体、螺旋体等 真核细胞型：真菌 非细胞型：病毒 噬菌体
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/30
霉菌菌落形态
霉菌在孟加拉红培养基上的形态
酵母菌显微镜下形态
微生物检查法
微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。 检查项目包括 细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 检查方法 多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法。
真菌的形态具有多样性，大小不一，大的用肉 眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃 至千倍方可观察到。其形态分单细胞、多细胞， 单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌（yeast）。 多细胞由菌丝和孢子组成，并交织成团。
药品污染常见的真菌
毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 一、毛霉属（Mucor Micheli ex Fries） 毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分 高的粮食及食品的霉烂变质。
和螺杆菌。 ⒋经革兰染色法（Gram stain）可将细菌分成两大
类：即革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）。
真菌（fungus；eumycetes）
是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道 的种超过10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的 菌丝体。许多菌丝在一起统称菌丝体。菌丝体在 基质上生长的形态称为菌落。
根霉属（RhizopuΒιβλιοθήκη BaiduEhrenberg）
根霉属广泛应用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅 速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。
曲霉属（Aspergillus）
曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质，为有隔的多细 胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有强烈的致癌性。
青霉属
菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出， 无足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一 级分枝的小梗上，长出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。 本属的常见产毒霉菌有9个种，其中展青霉可产生展青霉素，是一种 神经毒素，并具有致畸、致突变和致癌性；
（1）试验组
① 平皿法 取最低稀释级供试液1ml和50～ 100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂 培养基(平行制备2个平皿)，按平皿法测定其菌 数。
②薄膜过滤法 取最低稀释级供试液，过滤， 冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试 验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。
（2）菌液组 所加的试验菌数。 （3）供试品对照组 测定供试品本底菌数。 （4）稀释剂对照组 用相应的稀释液替代供试品，
微生物的特点
种类多 分布广 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前 已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的 20%。
微生物的特点
各体小，面积大 物体的表面积和体积之比称为表面积 大肠埃希菌的表面积是人的30万倍。
微生物的特点
吸收多 转化快 如大肠埃希菌在合适条件下，每小时可以 消 耗相当于自身重量2000倍的数量，而人体 则