黄酮类成分分析

B环无邻二-OH
例 银黄口服液
Ch.P（2000）
【处方】金银花提取物，黄芩提取物
【鉴别】（2）取本品0.1ml，加水10ml，摇匀，
取溶液2ml，加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液
显黄色，再加盐酸1~2滴，黄色不褪。
B环无邻二-OH
（二）薄层色谱法
常用吸附剂
硅胶 聚酰胺 纤维素
弱极性药物 含游离羟基及其苷类 多糖苷类混合物
1. 硅胶薄层色谱
样品极性越大，越易被硅胶吸附 样品极性大 Rf 小 展开剂极性要大 样品极性小 Rf大 展开剂极性要小
含羟基越多，越容易产生拖尾现象 措施 * 铺板时加碱液
* 展开剂加酸、水 * 改用聚酰胺TLC法
OH
OO
CH2
O
CH3
OO OH
OH OCH3
OH OH OH
OH
OH O
例 二陈丸中橙皮苷的鉴别
（2）与金属盐的配位反应
铝盐（Al3+）、锆盐（Zr4+） 铅盐（Pb2+）、锶盐（Sr2+）
芹菜素 木犀草素
有荧光
Al3+、Zr4+能与大 多数黄酮类药物 产生黄绿色荧光
+ 醋酸铅
碱式醋酸铅
硝酸铝
+
三氯化铝 二氯氧化锆
黄色配位物 有荧光
黄色↓ 红色↓
5. 紫外光谱特征 交叉共轭
B
A
C
苯甲酰基 吸收带Ⅱ 240 ~ 285nm
Ch.P.（2010）
制备 NaOH
100:17:13 3cm
20:10:1:1 8cm
2. 聚酰胺薄层色谱 黄酮类分子中的酚羟基与聚酰胺
分子中的酰胺基形成氢键
因酚羟基的数目、位置的不同使 形成氢键的能力有差异而得到分离
聚酰胺 属于氢键吸附
影响聚酰胺吸附力的因素
1. 样品分子中酚羟基越多，吸附力↑ 2. 样品的共轭双键越多，吸附力↑ 3. 样品能形成分子内氢键，吸附力↓ 4. 溶剂极性大，吸附力↓
易溶于水 难溶于有机溶剂
酚羟基↑，水中溶解度↑
3. 酸碱性
（1）弱酸性
8
OH 7
6 5
OH
酚羟基 ↑，酸性↑
1
6′
2 1′
5′
4′ OH
4 3 2′
3′
C7 或 C4′-OH酸性最强 C5 -OH酸性最弱
槲皮素
HO
O
OH OH
杨梅素
HO
O
OH OH
OH O
2
OH HO
芹菜素
O
OH OH OH O
1
OH
黄芩素
HO
O
4
OH O HO
木犀草素
O
OH OH
HO
OH O
5
3
OH O
葛根素
O
淫羊藿苷
2
1
（2）极弱碱性 1-O
可与强酸成盐而显特殊颜色
H2SO4或HCl
·· ··
烊盐
4. 显色反应
异黄酮类、查耳酮 类的盐酸-镁粉反应
（1）盐酸-镁粉反应 为负反应，但在盐
酸中也会显红色
红 ~ 紫红
Mg(Zn)
，加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再
加盐酸1~2滴，黄色不褪。
锆-枸橼酸反应 （区分C3-OH或C5-OH ）
黄色
鲜黄 褪色
锆-盐酸反应 （区分B环有无邻二-OH）
黄色
黄色 褪色
芹菜素
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槲皮素
例 黄芩提取物
Ch.P（2005）
本品为黄芩经提取干燥制得的粉末。
【鉴别】取本品少量，加水2ml，滴加氢氧化 钠试液1滴，溶液显橙黄色，滴加稀醋酸，使溶液 颜色基本褪去，然后再滴加5%二氯化氧锆溶液1 滴，溶液显黄色，加稀盐酸颜色不褪。
桂皮酰基 吸收带Ⅰ 300 ~ 400nm
葛根素（异黄酮类） 甘草苷（二氢黄酮类）
Ⅰ带 304 ~ 350 Ⅱ带 250 ~ 270
芹菜素
Ⅰ带 358 ~ 385 Ⅱ带 250 ~ 270
山萘素
Ⅰ带 低强峰或带Ⅱ的肩峰 Ⅱ带 245 ~ 270
5，7，4′-三羟基异黄酮 5，7，4′-三羟基二氢黄酮 5，7，4′-三羟基黄酮 5，7，4′-三羟基黄酮醇 4，2’，4′-三羟基查尔酮 4，6，4′-三羟基橙酮 5，7，4′-三羟基3-O-鼠李糖花青素苷
黄酮类成分分析
一、概述
山楂 消食健胃，行气散瘀 白果 敛肺定喘，止带浊，缩小便 陈皮 理气健脾，燥湿化痰 黄芩 清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎 银杏叶 敛血，平喘，活血化瘀，止痛 槐花 凉血止血，清肝泻火 满山红 止咳，祛痰 橘红 散寒，燥湿，利气，消痰
二、结构特征与理化性质
（一）结构特征 C6-C3-C6
银杏素（双黄酮类）
葛根素（异黄酮类） 红花苷（查耳酮类）
儿茶素（黄烷-3-醇类） 无色矢车菊素（黄烷-3,4-醇类）
飞燕草素（花色素类）
（二）理化性质
1. 物理性质 有色结晶性固体 旋光性 二氢黄酮类 二氢黄酮醇类 二氢异黄酮类
黄酮苷均有旋光性，一般为左旋体
2. 溶解度
难溶于水 易溶于有机溶剂
γ- 吡喃酮
*2
B
A
C
**
两苯环通过三碳相连
2-苯基色原酮
UV吸收強
黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮 （2-phenylchromone）类化合物，现在则是泛指 两苯环通过中央三碳链相互联接而成的一系列化 合物。
黄酮类化合物大多以苷的形式存在
芹菜素（黄酮类） 甘草苷（二氢黄酮类）
山萘素（黄酮醇类） 二氢槲皮素（二氢黄酮醇类）
例 益心酮片中总黄酮鉴别 （山楂叶提取物）
Ch.P.（2010）
乙醇-丙酮-水(7:5:6) 显色
例 双黄连颗粒中黄酮的鉴别 （金银花、黄芩、连翘）
Ch.P.（2010）
醋酸
四、含量测定 （一）总黄酮含量测定 1. 直接UV法 2. 比色法 与金属离子络合显色
加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10
ml，加热使溶解，加正丁醇15ml振摇提取，分取
正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过。
取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5
分钟后，即显橙红色。
2. 与金属盐的配位反应
C3-OH、C4=O C5-OH、C4=O 邻二-OH(B环)
常用试剂
OH OH
硝酸铝，三氯化铝，二氯氧化锆
OH OH
例 银黄口服液
Ch.P（2000）
【处方】金银花提取物，黄芩提取物
【鉴别】（1）取本品1ml，加5%硝酸钠溶液
与10%硝酸铝溶液各0.3ml，生成黄色沉淀；再加
5%氢氧化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显
棕红色。
（2）取本品0.1ml，加水10ml，摇匀，取溶液2ml
图 不同类型黄酮类化合物的紫外光谱
三、定性鉴别
（一）显色反应
1. 盐酸-镁粉反应 黄酮类的经典反应
为避免中药提取液本身颜色的干扰, 可注意观察加入盐酸后升起的泡沫颜色. 如泡沫为红色，即示阳性。
例 大山楂丸
Ch.P.（2010）
【处方】 山楂（黄酮类）、六神曲、麦芽
【鉴别】（2）取本品9g，切碎，加乙醇40ml,