第五节 人工制备抗体

第五节人工制备抗体

抗体在疾病的诊断、免疫防及其基础研究中被广泛应用，人们对抗体的需求也随之增大。人工制备抗体是大量获得抗体的有效途径。以特异性抗原免疫动物，制备相应的抗血清，是早年人工制备多克隆抗体的主要方法。1975年，KÖhler 和Milstein建立的单克隆抗体（单抗）技术，使得规模化制备高特异性、均一性抗体成为可能。但鼠源性单抗在人体反复使用后出现的人抗鼠抗体（HAMA）反应，很大程度上限制了单抗的临床应用。近年，随着分子生物学的发展，人们已可通过抗体工程技术制备基因工程抗体，包括人-鼠嵌合抗体、人源化抗体或人抗体等。

一、多克隆抗体

天然抗原常含多种抗原表位。以该抗原刺激机体免疫系统，可使多种具有相应抗原受体的B细胞活化增殖发生免疫应答，分泌多种针对不同抗原表位的抗体。由不同B细胞产生的、针对多种抗原表位的混合抗体称为多克隆抗体（polyclonal antibody,pAb)。获得多克隆抗体的途径主要有动物免血清、恢复期中层得血清或免疫接种人群。其优点是：作用全面，具有中和抗原、免疫调理、介导补体依赖的细胞毒作用（CDC）、ADCC等重要作用，来源广泛、制备容易；缺点是：特异性不高、易发生交叉反应，不易大量制备，从而应用受限。

二、单克隆抗体

KÖhler和Milstein将可产生特异性抗体但短寿的B细胞与无抗原特异性但长寿的骨髓瘤细胞融合，建立了可产生单克隆抗体的B淋巴杂交瘤细胞和单克隆抗体技术。通过该技术融合形成的杂交细胞系即杂交瘤，既有骨髓瘤细胞大量扩增和永生的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。每个杂交瘤细胞由一个B细胞与一个骨髓瘤细胞融合而成，而每个B细胞克隆仅识别一种抗表位，故经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌抗单一抗原表位的特异抗体。这种由单一杂交瘤细胞产生，针对单一抗原表位的特异性抗议体，称为单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)，具有结构均一、纯度高、特异性强、效价高、易体外大量制备和强化等特点，已广泛应用于医学及生物学各领域，如细胞因子、肿瘤细胞表面抗原受体、激素等的检测。

三、基因工程抗体

基因工程抗体是应用DNA重组和蛋白质工程技术，按照人们的意愿在基因水平

上对免疫球蛋白分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。基因工程抗体保留了天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除或减少了无关结构，并赋予抗体分子新的生物学活性，因此该抗体具有更广泛的应和前景。通过基因工程技术可制备的基因工程抗体有：人-鼠嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体、小分子抗体及人抗体等。