非发酵菌及检验
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1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿 液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气、 水、物体表面等。 2、检验程序
3、检验方法：
（1）直接镜检：
（2）分离培养：血液和体液可先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：
①典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润， 边缘不齐，表面可见金属光泽。 ②大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。
③粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表 面粗糙。
④侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 ⑤粘液型：光滑凸起呈粘液状
氧化酶＋，O/F 上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精 氨酸双水解酶＋，枸橼酸盐＋，硝酸 盐＋。
3. 动力：大多为专性需氧菌，半固体上 动力不明显（动力观察应在30℃或室温12－ 24小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别）
4. 麦康凯培养基上生长：可分群
见表
非发酵菌主要菌属的生化反应
菌 属 氧化酶 葡萄糖 O/F 悬滴动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长
假单胞菌属 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属
（3）初步鉴定：染色为革 兰阴性球菌或球杆菌，成双排 列。氧化酶（－），硝酸盐还 原（－）。动力（－），不发 酵葡萄糖。 符合上述五项即可判定为 不动杆菌属的细菌。
不动杆菌属及产碱杆菌属检验程序
脓汁、痰液、尿液
脑脊液、血液
直接 涂片
分离培养
（血液琼脂、麦康凯琼脂）
革兰染色
增菌培养
35℃ 18~24h
氧化酶
荧光素
青脓素 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化
＋/＿
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＋
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＿
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生化反应：
抵抗力：较强，临床分离株对
多种抗生素耐药
（二）致病性：
可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及 与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染， 也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重 时可引起败血症，死亡率甚高。
Baidu Nhomakorabea三）微生物学检验
非发酵菌 及检验
非发酵菌及检验
非发酵菌（nonfermenters）是指一群 不能利用或仅以氧化形式利用糖类, 生化 特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。 括多个菌属，主要有：假单胞菌属 不动杆菌属
产碱杆菌属
莫拉菌属
黄杆菌属
分群依据： 1. 氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假 单胞菌为阴性） 2. 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：应开管产 酸，闭管不变。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
＿
＿ ＋ ＋
＿
＿ ＋ _ /+
＿
＿ ＋ ＿
鸟氨酸脱羧酶
苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 柠檬酸盐利用 明胶液化 生长温度37℃ 41℃
+ + + +
O/O/O/F
+ + -
+ + + + +
+/+/+/-
+ + + + +/-
第二节 假单胞菌属
（Pseudomonas）
广泛存在于自然界的空气、水 和土壤中。种类多达200余种，大 多数为条件致病菌。 革兰阴性，直或微弯曲，大多 有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无 芽胞，专性需氧。
铜绿假单胞菌
（P.aeruginosa）
为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感 染的常见病菌之一。
（一）生物性状
1、形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆 状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无 芽胞，无荚膜，单端有鞭毛1－3根，运动活泼。
培养特性：
专性需氧，4℃不长，42℃可生长。 血平板：常见透明溶血环 普通平板：可产多种色素，主要有： 绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素 （只溶于水）。从临床标本中分离的菌株 大多产生此色素
＿
＿ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＿ ＋ ＋ ＋
赖氨酸脱羧酶 ＿ 精氨酸水解酶 ＋ 硝酸盐还原 ＋/＿ 明胶液化 ＿/＋
42℃生长
＋
＿
＿
＋/＿
＋/＿
＿
＋
第三节
不动杆菌
不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶 阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。
含6个种：醋酸钙不动杆菌
洛菲不动杆菌
溶血不动杆菌
鲍曼不动杆菌
生化反应 氧化酶阴性，触酶阳性， 葡萄糖O/F为氧化型。
不动杆菌属主要菌种生化反应特征：
二、致病性
该菌广泛存在于自然界，属条件致病 菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引 起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。
三、微生物学检查
标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓 汁等。 检验程序： 检验方法： （1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物 涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性 球杆菌成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳 性。 （2）分离培养：
3、检验方法：
（1）直接镜检：
（2）分离培养：血液和体液可先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
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麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：
①典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润， 边缘不齐，表面可见金属光泽。 ②大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。
③粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表 面粗糙。
④侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 ⑤粘液型：光滑凸起呈粘液状
氧化酶＋，O/F 上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精 氨酸双水解酶＋，枸橼酸盐＋，硝酸 盐＋。
3. 动力：大多为专性需氧菌，半固体上 动力不明显（动力观察应在30℃或室温12－ 24小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别）
4. 麦康凯培养基上生长：可分群
见表
非发酵菌主要菌属的生化反应
菌 属 氧化酶 葡萄糖 O/F 悬滴动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长
假单胞菌属 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属
（3）初步鉴定：染色为革 兰阴性球菌或球杆菌，成双排 列。氧化酶（－），硝酸盐还 原（－）。动力（－），不发 酵葡萄糖。 符合上述五项即可判定为 不动杆菌属的细菌。
不动杆菌属及产碱杆菌属检验程序
脓汁、痰液、尿液
脑脊液、血液
直接 涂片
分离培养
（血液琼脂、麦康凯琼脂）
革兰染色
增菌培养
35℃ 18~24h
氧化酶
荧光素
青脓素 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化
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生化反应：
抵抗力：较强，临床分离株对
多种抗生素耐药
（二）致病性：
可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及 与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染， 也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重 时可引起败血症，死亡率甚高。
Baidu Nhomakorabea三）微生物学检验
非发酵菌 及检验
非发酵菌及检验
非发酵菌（nonfermenters）是指一群 不能利用或仅以氧化形式利用糖类, 生化 特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。 括多个菌属，主要有：假单胞菌属 不动杆菌属
产碱杆菌属
莫拉菌属
黄杆菌属
分群依据： 1. 氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假 单胞菌为阴性） 2. 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：应开管产 酸，闭管不变。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
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鸟氨酸脱羧酶
苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 柠檬酸盐利用 明胶液化 生长温度37℃ 41℃
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O/O/O/F
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+/+/+/-
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第二节 假单胞菌属
（Pseudomonas）
广泛存在于自然界的空气、水 和土壤中。种类多达200余种，大 多数为条件致病菌。 革兰阴性，直或微弯曲，大多 有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无 芽胞，专性需氧。
铜绿假单胞菌
（P.aeruginosa）
为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感 染的常见病菌之一。
（一）生物性状
1、形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆 状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无 芽胞，无荚膜，单端有鞭毛1－3根，运动活泼。
培养特性：
专性需氧，4℃不长，42℃可生长。 血平板：常见透明溶血环 普通平板：可产多种色素，主要有： 绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素 （只溶于水）。从临床标本中分离的菌株 大多产生此色素
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赖氨酸脱羧酶 ＿ 精氨酸水解酶 ＋ 硝酸盐还原 ＋/＿ 明胶液化 ＿/＋
42℃生长
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第三节
不动杆菌
不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶 阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。
含6个种：醋酸钙不动杆菌
洛菲不动杆菌
溶血不动杆菌
鲍曼不动杆菌
生化反应 氧化酶阴性，触酶阳性， 葡萄糖O/F为氧化型。
不动杆菌属主要菌种生化反应特征：
二、致病性
该菌广泛存在于自然界，属条件致病 菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引 起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。
三、微生物学检查
标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓 汁等。 检验程序： 检验方法： （1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物 涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性 球杆菌成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳 性。 （2）分离培养：