最新实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察

低渗液(5ml)冲洗至离心管内
收集骨髓细胞
注意：剪去少量骨质，避免骨髓细胞丢失；擦净血迹和肌 肉细胞以免影响观察；用0.075 mol/L KCl 收集足量细胞，反 复冲洗直到股骨发白。
颈椎脱臼法处死小鼠
3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温
37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中， 保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。
21三体综合征； 18三体综合征、猫叫综合征
18三体综合征
二、实验原理
染色体标本的观察广泛应用于一些疾病的临床诊 断中。例如白血病、恶性血液病等的诊断。
染色体是染色质在细胞分裂期的存在形式。 细胞分裂的中期，染色体在赤道板上排列清晰，
是染色体观察的最佳Βιβλιοθήκη Baidu期。
骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体 标本的制备。取材方便，操作简单和无需无菌培 养，是研究小型哺乳动物等染色体的常用方法。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
六、作 业
1.简述小鼠染色体制备的流程。 2、绘制显微镜下观察到的小鼠染色体图像。 3、如看不到染色体，请分析失败原因。
结束语
谢谢大家聆听！！！
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人骨髓染色体抽取
怎样才能制备一个好的染色体标本？
获得大量处于有丝分裂中期的细胞。 使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释
放出来。
秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
低渗不足，则细胞膨胀不够，滴片时细胞不破裂。 低渗过度，则细胞提前破裂，染色体观察不全。 空气吹打法：用吸管橡胶头内的空气混匀液体。
4. 预固定：加1ml新配制固定液
混匀
1500r/min，5min
弃上清液。
固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需现配；离心需要配平。
作用：终止低渗；维持细胞的膨胀状态；防止离心破裂
• 2、试剂 100ug秋水仙素液、 0.075 mol/L KCl
低渗液、 Giemsa染液
四、实验步骤
1.秋水仙素处理：选择体重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(
小鼠)秋水仙素，与处死前4h，对其进行腹腔注射100ug/mL 秋水仙素液。
2.取材：颈椎脱臼法处死
取两后肢股骨
纱布擦净肌肉
剪去股骨两头，暴露骨髓腔
5. 固定、制细胞悬液：加固定液5ml 吹打混匀 固定15min 离心1500r/min，5min 弃上清，加固定液 0.2~0.4ml 吹打成细胞悬液，准备制片使用。
制备细胞悬液时，根据具体情况加固定液，以悬液呈现 乳白色为宜。
6. 滴片：冰片倾斜30°, 细胞悬液距离玻片30cm高，在不重叠
位置滴1～2滴，用口吹散细胞，过火焰干燥。 注意：载玻片预冷、高度、吹散、不可使载玻片烫手。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试 管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、乙醚酒精 、擦镜纸
7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，8～10min，倒
去染液，晾干。（染色盘中进行）
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
小鼠骨髓染色体 10 ×10
小鼠骨髓染色体 10 ×40
➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
实验三、小鼠骨髓染色体制备 与观察
一、实验目的
• 初步掌握（小鼠）骨髓细胞染色体标本的制备原理 和方法
• 巩固显微镜的操作技术 • 了解小鼠的染色体形态特征
二、实验原理
染色体是组成细胞核的基本物质，是基因的载体。 染色体异常也称染色体发育不全。目前已确认染色 体病综合征100余种，智力低下和生长发育迟滞是 染色体病的共同特征。