中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点(一)解读

中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点(一)

【摘要】目的了解国内Duchenne/Becker型肌营养不良症(DMD/BMD)患者基因缺失的分布特点。方法用12对引物以多重PCR检测与56例DMD/BMD

患者，分析缺失型患者抗肌营养不良蛋白(dystrophin)基因缺失的断裂点分布，并结合国内文献报道的221例病例资料，分析9对引物的总检出率及各引物的最佳组合。结果国内dystrophin基因缺失断裂点72%位于44～51号内

含子内，以44号内含子最多(22%)，50号内含子次之(17%), 位于45～51号内含子内的断裂点是44号内含子的2.3倍。7号内含子断裂较少，仅4%的断裂点位于该内含子。9对引物的总检出率为48%，其中5对引物的总检出率为46%。两对引物的最佳组合为48号和17号，可检出35%的患者。结论国内dystrophin基因44～51号内含子高度不稳定，容易发生断裂。7号内含子可能不是国内dystrophin基因缺失断裂的高发区域。在国内5对引物的总检出率接近9对引物，48号和17号外显子的二重PCR扩增对于全国范围内DMD/BMD的

筛选，尤其是结合其他方法进行大范围的产前筛选，不失为一种可取的选择。

【Abstract】Objective To understand the distributional characteristics of dystrophin gene deletion in Chinese

population.Methods 56 Duchenne/Becker muscular dystrophy (DMD/BMD) patients were detected by twelve primers mPCR (9 primers plus exon 7,50,52) and the distribution of the breakpoints of dystrophin gene deletion was analyzed. Combining with the 221 unrelated DMD/BMD cases reported in the published papers in China, we analyzed the positive ratio detected by the nine primers mPCR and the best primers combination to detect DMD/BMD patients.Results About 72% of deletion breakpoints fell in intorns 44～51 in the Chinese&nbs p;DMD/BMD patients. About 22% of deletion breakpoints fell in intron 44 , 17%

in intron 50, whereas the majority (50%) were located within the segments encompassing introns 45～51. Only 4% of deletion breakpoints fell in intron 7. Nine primers mPCR could detect 48% of all the cases of DMD/BMD, and five (exons 12,51,17,48,45) of these nine primes could detect 46% of all the cases of DMD/BMD. The best two-primer combination was exons 48 and 17, which could detect 35% deletion of all the DMD/BMD patients.Conclusions Introns 44 ～ 51 were highly unstable and prone to break. Intron 7 might not be a real deletion “hot spot” in the Chinese population. In China, the positive rate of deletion detection with five primers mPCR was almost the same as that with nine primers mPCR. Detecting deletion of exons 48 and 17 might be a preferable choice if the prenatal screening on a wide range of pregnancies would be needed.

【Key words】Muscutar dystrophy Gene deletion Polymerase chain reaction Dystrophin

抗肌营养不良蛋白(dystrophin)基因突变中55%～65%为缺失，5%～10%为

重复，8%左右为小的缺失和插入，点突变占25%左右〔1〕。dystrophin基因缺失分布在不同民族有不同的特点，如在以色列，Duchenne/Becker肌营养不良

症(DMD/BMD) 患者dystrophin基因突变中缺失率较低〔2〕，而希腊人和保加利亚人dystrophin基因缺失的断裂点分布有其独特的特点〔3，4〕。我们利用12对引物(9对引物〔5〕加7、50和52号外显子扩增引物)检测了56例

DMD/BMD患者，分析了缺失型患者dystrophin基因缺失的断裂点分布。并结合国内文献报道，共分析了274例无血缘关系的DMD/BMD患者9对引物检测的总检出率及各引物最佳组合。

资料和方法

一、资料

56例DMD/BMD患者均来自我院神经遗传病专科门诊，其中BMD 5例。所有患者均为男性，年龄8个月至30岁。患者中有6例两两之间有血缘关系。53

例无血缘关系的病例中12例有家族史或同胞发病，占23%。除1例8个月男婴为症状前诊断外，其余患者均有典型临床表现并经肌电图、肌酶谱检查证实。此外，结合国内文献221例资料，分析9对引物的总检出率。

二、PCR扩增

9对由Chamberlain设计的引物〔5〕由中山医科大学遗传病学教研室提供，为了解dystrophin基因缺失在中央缺失热区的断裂点，我们根据Beggs等〔6〕的设计合成了50、52号外显子扩增引物。将以上11对引物分为5对、4对、3对三组：5对引物为12、17、45、48、51号外显子扩增引物，4对引物

为4、8、19、44号，3对引物为50、51、52号。每次扩增均同时设空白和正

常对照。缺失的外显子再以单一引物PCR扩增验证1次。为了解7号内含子的断裂情况, 我们合成了7号外显子扩增引物，引物序列如下：7F：GCATGGAAGTAAATCTCATGGAAC；7R：GTGTAG-AAATGACAAGTCTCAGATG，扩增产物为279 bp。

结果