维生素D的测定
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维生素D是指具抗佝偻病活性的一类物质， 又称钙（或骨）化醇，系类固醇的衍生物， 是一类关系钙、磷代谢的活性物质，自然界 中以多种形式存在。具有维生素D活性的化 合物约有10中，记作维生素D2、D3、D4等， 其中最重要的是维生素D2、维生素D3以及维 生素D原。 维生素D2无天然存在，维生素D3只存在 于动物性食品中。但它们都可由维生素D原 （麦角固醇和7-脱氢胆固醇）经紫外线照射 形成
• （三）讨论
• （1）本法摘自GB/T5413.9—1997，婴幼儿配方食 品和乳粉通用检测方法中维生素D的测定，适用于 食品或强化食品及饲料中维生素D含量的测定。本 法对维生素D2和维生素D3不加区别，两者混合存 在时，以总维生素D定量之。 • （2）维生素D含量的表示可用质量含量mg/100g, 也可用国际单位，1国际单位（1IU）相当于0.025 μg 维生素D。
•
维生素D缺乏时具体表现为
其突出的表现是小儿的佝偻病和成人的骨 软化症并同存骨质疏松症，同时影响神经、 肌肉、造血、免疫等组织器官的功能，严重 影响儿童的生长发育。
维生素D的主要来源
• 维生素D主要来源于动物性食物，植物性食物 几乎不含有维生素D。 • 主要存在于海鱼、动物肝脏、蛋黄和瘦肉中。 • 脱脂牛奶、鱼肝油、乳酸、坚果和海产品、添 加维他命D的营养强化食品，也含有丰富的维 生素D。 • 维生素D的来源与其他营养素略有不同，除了 食物来源之外，还可来源于自身的合成制造， 但这需要多晒太阳，接受更多的紫外线照射。 • 经常晒太阳，以保证足够的紫外线照射，预防 维生素D的缺乏。
• 冷却后转移到分液漏斗中，用石油醚反复萃取，萃取 液浓缩，最后用1mL正乙烷溶解备用。
Fra Baidu bibliotek
• 2.正向硅胶柱富集
• 推荐HPLC条件： • 色谱柱：4mm x 30cm，硅胶柱； • 流动相：正乙烷与环乙烷按体积比1:1混合，并按体积 分数0.8%加入异丙醇； • 流速：1mL/min； • 柱温：20℃； • 检测波长：265nm • 注射50μL维生素D标样（1μg/mL）和200μL样品溶液， 很据维生素D标样保留时间收集样品于试管中，将试 管用氮气吹干，准确加入0.2mL甲醇溶解，供检测用。
高效液相色谱法
• （一）原理
• 试样在煎性没食子酸保护下皂化，用石油醚萃 取不皂化物，萃取物经正相色谱柱分离富集， 再用反相色谱柱进一步分离，紫外检测器测定， 与标准试样比较定量。
• （二）操作方法
• 1.样品处理 • 样品溶液中加入2%煎性没食子酸乙醇溶液混 合后，再加入75%KOH溶液加热回流皂化30min，
• 维生素的测定方法有：比色法、紫外分光 光度法、高效液相色谱法、薄层层析法等。 比色法灵敏度高，但操作十分复杂、费时。 气相色谱法虽然操作简单、精密度也高， 但灵敏度低。高效液相色谱法是目前分析 维生素D的最好方法，灵敏度高、分析速度 快，是我国国际GB/T5413.9—1997和 AOAC995.05所采用的方法。这里仅介绍高 效液相色谱法。
• 3.反相C18柱检测
• • • • • • • 推荐HPLC条件： 色谱柱：4.6mm x 25cmC18或同等性能色谱柱； 流动相：甲醇； 流速：1mL/min； 柱温:20℃ 检测波长:265nm. 注射50μL维生素D标准溶液和50μL样品溶液，得到 标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。很据峰 面积（或峰高）的比值求出样品中维生素D的含量。
维生素D是指具抗佝偻病活性的一类物质， 又称钙（或骨）化醇，系类固醇的衍生物， 是一类关系钙、磷代谢的活性物质，自然界 中以多种形式存在。具有维生素D活性的化 合物约有10中，记作维生素D2、D3、D4等， 其中最重要的是维生素D2、维生素D3以及维 生素D原。 维生素D2无天然存在，维生素D3只存在 于动物性食品中。但它们都可由维生素D原 （麦角固醇和7-脱氢胆固醇）经紫外线照射 形成
• （三）讨论
• （1）本法摘自GB/T5413.9—1997，婴幼儿配方食 品和乳粉通用检测方法中维生素D的测定，适用于 食品或强化食品及饲料中维生素D含量的测定。本 法对维生素D2和维生素D3不加区别，两者混合存 在时，以总维生素D定量之。 • （2）维生素D含量的表示可用质量含量mg/100g, 也可用国际单位，1国际单位（1IU）相当于0.025 μg 维生素D。
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维生素D缺乏时具体表现为
其突出的表现是小儿的佝偻病和成人的骨 软化症并同存骨质疏松症，同时影响神经、 肌肉、造血、免疫等组织器官的功能，严重 影响儿童的生长发育。
维生素D的主要来源
• 维生素D主要来源于动物性食物，植物性食物 几乎不含有维生素D。 • 主要存在于海鱼、动物肝脏、蛋黄和瘦肉中。 • 脱脂牛奶、鱼肝油、乳酸、坚果和海产品、添 加维他命D的营养强化食品，也含有丰富的维 生素D。 • 维生素D的来源与其他营养素略有不同，除了 食物来源之外，还可来源于自身的合成制造， 但这需要多晒太阳，接受更多的紫外线照射。 • 经常晒太阳，以保证足够的紫外线照射，预防 维生素D的缺乏。
• 冷却后转移到分液漏斗中，用石油醚反复萃取，萃取 液浓缩，最后用1mL正乙烷溶解备用。
Fra Baidu bibliotek
• 2.正向硅胶柱富集
• 推荐HPLC条件： • 色谱柱：4mm x 30cm，硅胶柱； • 流动相：正乙烷与环乙烷按体积比1:1混合，并按体积 分数0.8%加入异丙醇； • 流速：1mL/min； • 柱温：20℃； • 检测波长：265nm • 注射50μL维生素D标样（1μg/mL）和200μL样品溶液， 很据维生素D标样保留时间收集样品于试管中，将试 管用氮气吹干，准确加入0.2mL甲醇溶解，供检测用。
高效液相色谱法
• （一）原理
• 试样在煎性没食子酸保护下皂化，用石油醚萃 取不皂化物，萃取物经正相色谱柱分离富集， 再用反相色谱柱进一步分离，紫外检测器测定， 与标准试样比较定量。
• （二）操作方法
• 1.样品处理 • 样品溶液中加入2%煎性没食子酸乙醇溶液混 合后，再加入75%KOH溶液加热回流皂化30min，
• 维生素的测定方法有：比色法、紫外分光 光度法、高效液相色谱法、薄层层析法等。 比色法灵敏度高，但操作十分复杂、费时。 气相色谱法虽然操作简单、精密度也高， 但灵敏度低。高效液相色谱法是目前分析 维生素D的最好方法，灵敏度高、分析速度 快，是我国国际GB/T5413.9—1997和 AOAC995.05所采用的方法。这里仅介绍高 效液相色谱法。
• 3.反相C18柱检测
• • • • • • • 推荐HPLC条件： 色谱柱：4.6mm x 25cmC18或同等性能色谱柱； 流动相：甲醇； 流速：1mL/min； 柱温:20℃ 检测波长:265nm. 注射50μL维生素D标准溶液和50μL样品溶液，得到 标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。很据峰 面积（或峰高）的比值求出样品中维生素D的含量。