双波长薄层扫描法测定冬凌草片中总黄酮的含量
双波长薄层扫描法测定冬凌草片中总黄
酮的含量
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【摘要】目的采用双波长薄层扫描法测定冬凌草片中总黄酮的含量。方法采用日本岛津CS-9301双波长飞点薄层扫描仪，硅胶GF254薄层板，展开剂：醋酸乙酯甲酸水（8∶1∶1），激发波长269 nm。结果片剂中其它成分对测定无干扰。总黄酮的点样量（X）在1～6 μg范围内与峰面积（Y）线性良好，Y=133.3X+80.416，r=0.999 2，n=5,平均回收率是98.67%，RSD=1.50%,实验的精密度、稳定性、重现性都很好。结论该法操作简便，精密度好，结果准确可靠。
【关键词】双波长薄层扫描法；总黄酮；含量测定
Abstract:ObjectiveTo determine the total flavonoid in Rabdosia rubescens Tablets by TLCS.MethodsThe shimadzu CS-9301 TLC scanner was selected with silic-gelthin-layer.The developing solvent was ethyl acetate-formic acid water(8∶1∶1), and the excitation wavelength was 269 nm.ResultsThe determination of the total flavonoid was not disturbed by other
components in the Rabdosia rubescebs tablets. The calibration curves was linear in the range of 1～6 μg for total flavonoid(r=0.999 25) and the average recovery was 98.67%. The precision, stability,and reproducibility of the experiment were very good. ConclusionThe method is rapid,accurate and reliable.
Key words:TLCS; Total flavonoid; Quantitative determination
冬凌草为唇形科香茶菜属植物，又名冰凌草，以地上部分入药。广泛分布于黄河流域及其以南广大地区，主产于河南太行山区。味甘苦，性微寒，具清热解毒、消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效［1］。本实验采用双波长薄层扫描法，以芦丁为对照品，对冬凌草片中总黄酮进行了含量测定。
1 仪器与材料
1.1 仪器
日本岛津CS-9301双波长飞点薄层扫描仪，KQ-100A型超声波清洗器，10 cm×20 cm硅胶板GF254（上海信谊仪器厂），双槽层析缸。
1.2 材料
冬凌草（河南济源市济世药业有限公司提供，0.25 g/片，批号为20050625，20050724，20060656，20060680，20060945），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品25 mg,置25 ml容量瓶中，以80%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2 供试品溶液的制备
取冬凌草片4片，研细，精密称重约1.581 6 g平均片重约（0.394 5 g），用80%乙醇超声提取2次，30 min/次，过滤，合并两次滤液，置100 ml容量瓶中，加80%乙醇定容至100 ml，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 扫描条件的确定
双波长反射法锯齿扫描：λs=269 nm，λR=221 nm，SX=3。
2.4 线性关系的考察
用1 μl定量毛细管吸取芦丁对照品溶液各1，2，3，4，5，6 μl点于硅胶GF254薄板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）为展开剂展开，展距约12 cm，取出晾干，扫描。以峰面积为纵坐标，以对照品点样量为横坐标，绘制标准曲线，测得回归方程为：Y=133.3X+80.416, r=0.999 2。结果表明，冬凌草在1～6 μg范围内点样量与峰面积线性关系良好。
2.5 稳定性实验
吸取对照品溶液及供试品溶液各6 μl点于同一硅胶GF254薄板上，按上述条件每隔30 min重复扫描测定，持续2 h。结果积分值保持不变，性质比较稳定。
2.6 精密度实验
吸取对照品溶液6.0 μl点于同一硅胶GF254薄板上，共5点，依法展开，扫描。结果表明，RSD=1.47%（n=5）［2］。
2.7 回收率实验
取已知含量的冬凌草样品提取液5 ml ,加入5 mg芦丁对照品，混匀后制成回收液。取回收液2.0 μl，对照品溶液1.0 μl和3.0 μl点在同一块硅胶上，以同法测定，外标二点法定量，计算回收率。结果见表1。表1 回收率实验测定结果（略）
2.8 样品的含量测定
取冬凌草样品溶液6 μl，按上述方法依次测定5批样品含量。结果见表2。表2 样品含量测定结果（略）
3 结论
用双波长薄层扫描法测定冬凌草片中总黄酮的含量，平均回收率达98.67%，RSD为1.50%，且该方法简便，不受辅料等其它成分的影响，准确性高，重现性好，值得推广。
【参考文献】
［1］屈红丽，可钰，尹鹏，等.冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定［J］.时珍国医国药，2006，17（10）：1929.
［2］孙毓庆.分析化学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，1999：9.
分光光度法测定总黄酮含量-操作流程图-简易图解-李熙灿-Xican Li
分光光度法测定总黄酮含量：操作流程图2017.10 【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research. 2012;26:1050-1053. 【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。 【检测方法与实验流程图】 图1实验流程图 【溶液配制】 1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。 2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。 3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。 4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。 5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。浓度尽量高，但要有精确的数值。 【标准曲线绘制】（芦丁） 精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准液，代替上图中的“样品液0.5mL”，依“实验流程 图”，测A508nm值：
薄层扫描法
薄层扫描法 一、定义?薄层扫描法(TLCＳ)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC)系指用一定得波长得光照射在薄层板上,对薄层色谱中有紫外或可见吸收得斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描,将扫描得到得图谱及积分值用于药品定性定量得分析方法。?回顾薄层色谱法（TLC） 1、薄层板得制备(硅胶板,Aｌ２O3板,聚酰胺薄膜等)? 2、点样(选择合适得展开剂，在薄板底1cm处画基线,点样) 3、展开(浸入展开剂，展开到距薄板顶端１～2cm) 4、检视（在紫外光灯下观察斑点） 了解一下薄层扫描仪 薄层扫描仪得组成及主要功能 薄层色谱扫描仪有多个厂家生产,型号不同,仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能就是基本相同得。每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。?(１)分光器及测量范围 大多数薄层扫描仪得分光器为光栅，少数为棱镜,极个别得用滤光片,其测量范围光栅为200－800nm,棱镜为２0０－２500nm。?(２)光源及检测器?光源室具有可见光源钨灯,波长范围为４０0-800,紫外光源氘灯波长范围为２00-4０0nm，荧光光源为氙灯或汞灯。操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜得位置;检测器一般为光电倍增管。
表７-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪 二、ＴLCS基本原理与方法 薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。?
１、薄层吸收扫描法得基本原理?薄层吸收扫描法就是用可见光或紫外线得单色光照射展开后得薄层色谱板,测定薄层色谱斑点(简称斑点)得吸光度(A）随展开压离(L)得变化,而获得A—Ｌ成A—Ｒf曲线,即薄层色谱扫描图(简称扫描图）。?曲线上得色谱峰峰面积可用于定量分析。由于薄层板存在着明显得散射现象,而使斑点中物质得浓度与吸光度得关系不服从Ｂｅｅｒ定律,所以需田Kubelｋa—Ｍunk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。该方程式就是薄层扫描法得定量分析基础。定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。 设薄板固定相得厚度为X,入射光得强度为I、，当透过厚度x得得固定相后,照射在微分薄层厚度dx上得入射光强与反射光强分别为i与j时，如左图。其入射光强得增量与反射光强得增量分别符合以下两个微分方程: 即光照射到厚度为x得薄层后,光被吸收及散射。在入射方向,光强度因为被吸收与散射而减弱;在入射得反方向,则光强度因散射而增强。解上述方程得: 在薄层扫描时,人们只就是对进入薄层与由薄层出来得光有兴趣,也即上式得极
薄层色谱法详解
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。 仪器与材料 编辑 ⑴载板 变色硅胶 用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，但最大不得超过20×20，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm ×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 ⑵固定相(吸附剂)或载体 薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用
可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量
实验五 一、目的要求 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。 2、掌握可见分光光度计的使用方法。 二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有邻二酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（λmax=510nm），从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。 3、槲皮素（xx药品生物制品检定所）。 4、大山楂丸（市售品）。 四、操作步骤 1、标准液的配制： 精密称取槲皮素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀释至刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。 2、标准曲线的制备：
精密量取对照品溶液0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加入1%氢氧化钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。以第一瓶作空白，用可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归方程）。 3、样品液的制备： 精密称取120℃干燥2小时的大山楂丸6.5g，置索氏提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小时，将提取液移至250ml容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀即得。 4、含量测定： 精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。 五、注意事项 1、实验证明，提取时间为1.5小时，基本能提尽样品中黄酮。 2、实验证明，样品显色后，在30分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过30分钟，含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么？
02薄层扫描法检验操作规程
目的：建立薄层扫描法的标准操作规程 范围：本规程适用于薄层扫描法。 职责：检验员、QC主任。 依据：《中国药典》2010年版。 内容： 1 简述 薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。所得到的图谱及积分数据可用于药品的鉴别、检查及含量测定。 薄层色谱扫描法可分为吸收法与荧光法。扫描时测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度的方法称为吸收法；测定样品斑点经激发后所产生的荧光强度的方法称为荧光法。吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。荧光法测定均采用反射法。透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。 薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描薄层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。 根据扫描时光束的轨迹不同，薄层色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描，它适于形状较规则斑点的扫描。锯齿扫描是使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行往复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分
布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。 在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分光透射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。因此，薄层扫描定量一般不符合Lambert-Beer 定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk方程： (1-R)2/R=2.303εC/S 其中R为反射光强，ε为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。 由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响薄层扫描反射法定量的工作曲线方程。 2 仪器 2.1 仪器组成 薄层扫描仪主要由光源、单色器、薄层板台、检测器以及工作站组成。 2.1.1 光源在可见光区域主要使用钨灯（370～700nm），紫外区多使用氘灯（200～370nm）。此外还有汞灯，氙灯等。其中汞灯为线光源，可发射特征辐射光谱。 2.1.2 单色器用来提供一定波长的单色光。其结构与一般的紫外分光光度计类似，通常由入射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散元件等组成。薄层扫描仪多采用光栅为其色散元件。 2.1.3 薄层板台扫描时薄层板固定于薄层板台上，薄层板台可横向及纵向移动，以完成对整块薄层板的扫描。 2.1.4 检测器多采用光电倍增管。此外还有监测入射光能量的参比光电倍增管，以减少入射光强度变化对扫描结果的影响。 2.1.5 工作站可设定仪器参数，接收并存储扫描结果，进行积分和其他计算。 2.2 仪器性能检定 2.2.1 波长准确度的检查可利用汞灯的特征谱线光谱对仪器的波长准确度进行检查。选取汞灯，在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白硅胶. 薄层板扫描吸收图谱，图谱中的峰位波长与汞灯的谱线中相应波长的差即为仪器波长准确度。汞灯谱线的已知波长为25 3.6,313.0,33 4.2,36 5.0,404.7,435.8,54 6.1,578.0nm。在CAMAG等仪器的工作站中有专用的仪器检定软件，按要求操作即可自动进行仪器波长准确度等检查。其结果应符合仪器
双波长法测淀粉含量
附录4 直链淀粉和支链淀粉的测定（双波长法） 1、目的 淀粉一般都是直链淀粉和支链淀粉的混合物。直链淀粉和支链淀粉含量和比例因植物种类而不同，决定着谷物种子的出粉率和食物品质，并影响着谷物的贮藏加工。通过本实验学习掌握双波长测定谷物中直链淀粉和支链淀粉的含量。 2、原理 根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。 直链淀粉与碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用产生紫红色。如果用两种淀粉的标准溶液与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描或做吸收曲线，即可达到实验目的。 3、仪器、试剂和材料 1、仪器 （1）电子分析天平 （2）分光光度计1台 （3）ph计 （4）容量瓶100mlx2，50mlx16 （5）吸管0.5mlx1，2mlx1，5mlx1 2、试剂 （1）乙醚 （2）无水乙醇 （3）0.5mol/LKOH溶液 （4）0.1mol/LHCL溶液 （5）碘试剂：称取碘化钾2.0g，溶于少量蒸馏水，在加碘0.2g，待溶解后用蒸馏水稀释定容至100ml。 （6）直链淀粉标准溶液：称取直链淀粉纯品0.1000g，放在100ml容量瓶中，加入0.5mol/LKOH10ml，在热水中待溶解后，取出加蒸馏水定容至100ml，即为1mg/ml直链淀粉标准溶液。 (7)支链淀粉标准溶液：用0.1000 g 支链淀粉按（6）法制备成1mg支链淀粉标准溶液。 3、材料 小麦粉 4、操作步骤 1、选择支链、直链淀粉测定的波长参比波长。 直链淀粉：取1mg/ml直链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸
馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出直链淀粉吸收曲线。 支链淀粉：取1mg/ml支链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出支链淀粉吸收曲线。 2、制作双波长直链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml直链淀粉标准溶液0. 3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，直链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长直链淀粉标准曲线。 3、制作双波长支链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml支链淀粉标准溶液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，支链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长支链淀粉标准曲线。 4、样品中直链淀粉、支链淀粉及总淀粉的测定：样品粉碎过60目筛，用乙醚脱脂，称取脱脂样品0.1g左右（精确到1ml），置于50ml容量瓶中。加0.5mol/LKOH溶液10ml，在沸水浴中加热10min，取出，以蒸馏水定容至50ml，静置。吸取样品液2.5ml两份（即样品液和空白液），均加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，样品中加入碘试剂0.5ml，空白液不加碘试剂，然后定容至50ml。静置20min，以样品空白液为对照比色。 五、结果处理 直链淀粉（%）=（X1*50*100）/（2.5*m*1000） 支链淀粉（%）=（X2*50*100）/（2.5*m*1000） 式中， X1----查双波长直链淀粉标准曲线得样品中直链淀粉含量（mg） X2----查双波长支链淀粉标准曲线得样品中支链淀粉含量（mg） m-----样品质量（g） 总淀粉（%）=直链淀粉（%）+支链淀粉（%）
薄层色谱法测定标准操作规程
薄层色谱法测定标准操作规程 目的：建立薄层色谱法测定标准操作规程。（《中华人民共和国药典》2010版附录） 范围：适用于薄层色谱法的测定。 职责：检验员，QC主管。 内容： 1 简述： 薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 薄层板： 2.1.1市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。 2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶 H、微晶纤维素等，其粒径一般为10~40um。 2.2 点样器：采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。 2.3 展开容器：应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。水平展时使用专用水平展开缸。 2.4 显色与显色装置按各品种项下规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸气熏蒸显色，喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用玻璃容器或适宜的展开缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 2.5 检视装置为装有可见光或紫外光（254nm及365nm）光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备： 3.1.1 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30min，聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷与甲醇的混合溶剂在展开容器中上行展开预洗，取出，晾干，活化后使用。 3.1.2自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水或0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素钠适量，加水适量，放置使溶胀，加热煮沸至完全溶解，放置，取上清液，即得），在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（涂层厚度为0.25、0.3或0.5mm）。取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上
可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量
实验五可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量 一、目的要求 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。 2、掌握可见分光光度计的使用方法。 二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有邻二酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（λ max=510nm），从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。 3、槲皮素（中国药品生物制品检定所）。 4、大山楂丸（市售品）。 四、操作步骤 1、标准液的配制：精密称取槲皮素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀释至刻度，即得0.2mg/ml的对照品溶液。 2、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加入1%氢氧化
钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。以第一瓶作空白，用可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归方程）。 3、样品液的制备：精密称取120℃干燥2小时的大山楂丸6.5g，置索氏提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小时，将提取液移至250ml容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀即得。 4、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。 五、注意事项 1、实验证明，提取时间为1.5小时，基本能提尽样品中黄酮。 2、实验证明，样品显色后，在30分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过30分钟，含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么？ 2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同？
薄层扫描法
薄层扫描法 一、定义 薄层扫描法（TLCS）又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。 回顾薄层色谱法（TLC） 1、薄层板的制备（硅胶板，Al2O3板，聚酰胺薄膜等） 2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样） 3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm） 4、检视（在紫外光灯下观察斑点） 了解一下薄层扫描仪 薄层扫描仪的组成及主要功能 薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。 （1）分光器及测量范围 大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测 量范围光栅为200-800nm,棱镜为200-2500nm。 （2）光源及检测器 光源室具有可见光源鸨灯，波长范围为400-800,紫外光源免灯波长范围为 200-400nm,荧光光源为氟灯或汞灯。操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位
置；检测器一般为光电倍增管。
@7-5-4翻滋瑚 L 项iSM ?初新P F 脯 或於处BITI M 通备 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪 、TLCS 基本原理与方法 薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。 1.薄层吸收扫描法的基本原理 薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱 PD 由?5?5醐制招 L 顼浪MC-草色最P-就枚; PD-表 7-5-2
薄层扫描操作规程
Standard Operating Procedure 1、目的：建立薄层扫描操作规程，规范薄层扫描法的操作。 2、范围：本公司产品、原料、辅料、中间体的检验。 3、责任人：QC检验员。 4、正文： 简述：薄层扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别，杂质检查或含量测定。 仪器与用具 4.2.1玻板。除另有规定外，用10cm×10cm，10cm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 4.2.2吸附剂或载体。最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。薄层涂布,除另有规定外，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液％～％)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。
4.2.3涂布器。应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 4.2.4点样器。一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 子须密闭。 4.2.6薄层扫描仪。 试药与试液：蒸馏水、羧甲基纤维素钠水溶液％～％)。 操作方法。 4.4.1薄层板制备。除另有规定外,将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为～0.5mm）,取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。或用商品预制板于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。 4.4.2点样。除另有规定外,用点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边～1.5cm，样点直径一般不大于3mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 4.4.3展开。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，按质量标准项下的规定检测。 注意事项。 4.5.1展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡或按质量标准规定操作。 4.5.2除另有规定外，薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采用吸收法，或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与对照品同板点样，展开，扫描，积分和计算。
双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量(精)
【摘要】目的：建立蒲公英中总黄酮的含量测定方法。方法：应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs=278nm，参比波长 λR=356nm，测定蒲公英中总黄酮的含量。结果：回归方程为 Y=873851X+80.593，r=0.999，RSD=2.6％，蒲公英总黄酮含量为4.236%。结论：用该方法测定蒲公英中总黄酮的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。【关键词】双波长薄层色谱扫描法总黄酮芦丁 蒲公英属菊科类为植物蒲公英，是常用的中药类抗菌、抗真菌的药物，具有清热解毒、利胆保肝、医治乳痈疔疮等药理作用。主要成分含有蒲公英甾醇、绿原酸、总黄酮等成份，现已制成注射剂、片剂、糖浆等不同剂型，广泛应用于人与畜各科多种感染性炎症，均有良好疗效。这种中草药价廉物美，药源丰富，应当进一步开发，做到物尽其用。针对其总黄酮的含量，我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；高硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。 1.2 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；蒲公英（产地为内蒙，由内蒙古成大方圆有限公司饮片分装）；其它试剂均为分析纯。 2 薄层分析与鉴定 2.1 对照品溶液的配置［1］ 精密称取芦丁对照品25mg，置50ml容量瓶中，以85%乙醇溶解并加至刻度，精密吸取10ml置20ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取内蒙蒲公英（提前粉碎研磨成细粉）10g，用13倍量药材的85%乙醇加热回流2次，每次1小时［2］，回收蒸发乙醇至干（旋转蒸发仪），残渣加入50ml热水溶解，先用石油醚（50，50，30ml）萃取3次，要下层液（除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素），再用正丁醇（50，50，30ml）萃取3次，要上层液（除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质），合并正丁醇提取液用85%乙醇30ml溶解，过滤至50ml容量瓶中，再用85%乙醇洗涤滤纸至刻度，摇匀。精密量取10ml置20ml容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，备用。 2.3 分离与鉴定 分别取供试品溶液和对照品溶液各6ul，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸水（体积比8：1：1）为展开剂展开［3］，取出，晾干。 3 含量测定 3.1 扫描条件［4］ 反射锯齿扫描，测定波长为λs=278nm，参比波长λR=356nm，背景校正ON，灵敏度中，狭缝1.2mmⅹ1.2mm，SX=3。 3.2 标准曲线制备 取芦丁对照品溶液，以不同点样量（2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ul）点于同一硅胶G板上，相同展开剂展开，取出，晾干后进行扫描，以峰面积积分
试验六双波长分光光度法
典型实验教学案例简介 案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量 药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。 一、实验目的 1．掌握双波长分光光度法的测定原理。 2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。 二、实验原理 当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。 SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。 TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
三、仪器与试剂 1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶 2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾 四、实验步骤 1．磺胺甲噁唑的含量测定 （1）平均片重测定：10片，精密称定。 （2）供试品溶液配制： 图2 TMP 紫外吸收图谱 1. TMP(5.0μg/ml); 2.SMZ(25.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料 图l SMZ 紫外吸收图谱 1. TMP(0.2μg/ml); 2.SMZ(10.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料 精密称取片粉 (约50mg SMZ, 10mg TMP) 片剂 乙醇 溶解、定容 过滤 研磨 100m
薄层色谱扫描仪标准操作规程
XXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立KH-2100型薄层色谱扫描仪仪使用标准操作规程。 2 范围：KH-2100型薄层色谱扫描仪操作程序。 3 责任：化验室操作员。 4 使用说明： 4.1 开机 4.1.1 将KH-2100 型薄层色谱扫描仪电源接通，插好连接KH-2100型薄层色谱扫描仪和计算机USB连接线。 4.1.2 打开KH-2100型薄层色谱扫描系统（点击计算机桌面上“KH-2100 型薄层色谱扫描系统”图标）。 4.1.3 打开KH-2100型薄层色谱扫描仪的电源开关。 4.1.4 仪器自检，KH-2100 型薄层色谱扫描系统的工作站软件已打开，将显示仪器自检结果（X、Y复位检测、单色仪检测、氘灯光源检测、卤钨灯光源检测）。 4.1.5 进行光源寿命检查，检测光源的光强是否符合检测标准。 注：以上操作在薄层板扫描前30min左右完成，目的是预热仪器。 4.2 薄层板扫描 4.2.1 填写用户管理数据：点击“样品扫描”窗口工具栏中的【用户管理】
按钮，输入报告人、测试时间、测试地点、设备名称、设备编号、薄层板类型、样品、标准品、湿度、温度、展开剂、显色剂、备注，点击【确定】按钮; 4.2.2 数据测量将已显色的薄层板上的斑点位置进行测量（测量斑点距起点边缘的距离）； 4.2.3 放置薄层板将薄层板放入扫描仪的载物台，薄层板边缘尽量靠近载物台内侧（薄层板前沿接近舱门方向）； 4.2.4 设置扫描参数：在【参数设定】菜单中根据测试类型选择样品，样品数目（薄层板上斑点数目），起点位置（第一个斑点距薄层板最近边缘的距离），纵向扫描范围（根据斑点的位置确定范围），再根据斑点之间的距离确定等间距扫描或不等间距扫描（如果是等间距扫描，只需单击【等间距扫描】，填写等间距距离和起点位置即可，如果是不等间距扫描，单击【不等间距扫描】，依次填写斑点距离数值）。 4.3 开始扫描：点击样品扫描窗口工具栏中的【开始测试】按钮，等待测试完毕。 4.4 处理扫描数据：如果扫描出的样品峰形为倒峰，点击【荧光处理】；察看自动分峰的结果，对分峰有误的地方采用手动修改方式：添加峰、删除峰、修改峰、分开峰、合并峰和设定基线。 4.5 保存扫描结果：点击样品扫描窗口工具栏中的【保存】按钮。 4.6 计算含量：选中主窗口工具栏中的【含量计算】按钮，进入含量计算窗口，输入标准品浓度，然后依次点击峰图，填写样品量，点击【样品】（标准品）按钮，再接着重复上一操作选择下一个样本，所有的标准品（样品）选择完毕后，点击【计算含量】。 4.7 点击含量计算窗口的【保存】按钮，保存所有数据。
淀粉测定方法
淀粉的测定方法（1） 测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法） 一、酶水解法 1.原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 2.适用范围 ，适用于所有含淀粉的食物。 3.仪器 （1）回流冷凝器 （2）水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）乙醚 （2） % 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma公司， 3.2.1） g，加100 ml水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。）（3）碘溶液：称取 g碘化钾溶于20 ml水中，加入 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。 （4） 85 %乙醇。 （5）其余试剂同《蔗糖测定方法》 5.操作方法 样品处理 称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml 85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50 ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20 ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1 h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20 ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。加热至沸，冷后移入250 ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液，置于250 ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1 h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100 ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。） 测定
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量 《成都大学学报：自然科学版》2010年第1期 | 姚倩郭晓强张良蕾肖飞何钢黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一类天然产物，具有抗氧化及抗自由基作用，可用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等的治疗．槐米中含有大量的黄酮类物质，本研究采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁等黄酮类成分，制成芦丁颗粒剂，并采用分光光度法对所含总黄酮进行了测定．实验结果表明，该方法快速、准确、灵敏，适合于控制所制颗粒剂中有效部位的含量． 1 仪器与材料 1．1 仪器 实验所用仪器包括：2802PC型紫外扫描仪(尤尼柯上海仪器有限公司)，UV一1800型紫外可见分光光度计(苏州莱顿科学仪器有限公司)，CT15RT型台式高速离心机(上海天美科学仪器有限公司)，AS5150A超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)． 1．2 材料 实验所用材料包括：实验用芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供；实验所用试剂均为分析纯，由成都科龙试剂厂生产． 2 方法与结果 2．I 测定方法 2．1．1 对照品溶液的制备． 精密称取芦丁对照品约1O ITlg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液． 2．1．2 供试品溶液的制备． 将芦丁颗粒研细，取约2 g，置50 mL量瓶中，加甲醇20 30 mL，摇匀，超声30 S，用甲醇稀释至刻度，制得供试品溶液． 2．1．3 黄酮含量测定方法． 分别精密量取芦丁对照品溶液与供试品溶液各 3 mL，分置25 mL量瓶中，加5％NaNO~溶液1 mL，摇匀，静置6 min，再加人10％(NO3) 溶液1 mL，摇匀，继续静置6 min，加4％的NaOH溶液5 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，于505 nln波长处测定吸光度，分别记为As及．另在25 mL量瓶中制备一不含黄酮的试剂空白，测定其在506 nln 波长处的吸收度，记为．并以以( 一)及( 一)比值计算总黄酮含量． 2．2 空白干扰试验
双波长法测定复方磺胺甲恶唑含量
双波长法测定复方磺胺甲噁唑含量 一、目的 1.掌握复方制剂的分析特点及赋形剂的干扰与排除方法。 2.掌握双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑与甲氧苄啶含量的原理与方法。 二、实验内容 1.供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg （20片平均片重的8分之一）与甲氧苄啶10mg（20片平均片重的8分之一）)，置于100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟磺胺甲口恶唑与甲氧苄啶溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50mg（按原料药95%含量计）与甲氧苄啶对照品10mg（按原料药95%含量计），分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(1)与对照品溶液(2)。 3.磺胺甲噁唑的测定 精密量取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各2ml，分置100ml量瓶中，各加0.4％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液(2)的稀释液；以257nm为测定波长(λ2)，在304nm波长附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为参与波长(λ )，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对1 照品溶液(1)的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值(△A)，计算，即得。 4.甲氧苄啶的测定
精密量取上述供试品溶液与对照品溶液(1)(2)各5ml，分置100ml量瓶中，各加盐酸-氯化钾溶液[取盐酸液(0.1mol/L)75ml与氯化钾6.9g，加水至1000ml摇匀] 稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液(1)的稀释液，以239.0nm为测定波长(λ2)，在295nm波长附近(每间隔0.2nm)选择等吸收点波长为参比波长(λ1)，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(2)的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值(△A)，计算，即得。 本品每片中含磺胺甲噁唑(C10H11N3O2S)应为0.360～0.440g，含甲氧苄啶(C14H12N4O3)应为72.0～88.0mg。 三说明 1.磺胺甲噁唑与甲氧苄啶的结构分别为： NH2SO 2NH CH3 O N OC H3 CH3O CH3O CH2N N NH 2 NH2 (SMZ) (TMP) SMZ与TMP的紫外吸收图谱分别为：
薄层色谱扫描仪
KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 文章类别：法定型薄层色谱扫描仪发表日期：2007-5-16 21:16:44 KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 ----中药GMP控制专用机型 上海科哲生化科技有限公司是国内最大最专业的薄层色谱仪器公司，受到上海科委的重点扶持，是国内唯一的法定型薄层色谱扫描仪生产商。针对基层用户方法相对固定，分析任务较为繁重，对易用性、稳定性要求较高，我公司将原来的KH-2000升级为KH-2100，性能更为优越，将2000版、2005、2010版药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，形成药厂专用薄层色谱扫描仪，使用者只需动手，不需动脑即可完成操作；产品与日本岛津CS-9301PC薄层色谱扫描仪处于同一档次，是中药企业质控的最优选择。 友情提示： 所谓法定薄层色谱扫描仪是指符合2005版药典一部薄层色谱扫描法、《中国药品检验标准操作规范》中的《薄层色谱扫描法》、《药品检验仪器检定规程》中的《薄层色谱扫描仪检定规程》的详细规定，由氘灯-钨灯组合光源、单色仪、X-Y移动平台组成，波长准确度：≤±5nm；背景漂移：≤±0.5Abs；基线噪声：≤±0.02Abs；重复性误差：RSD≤2.0%；扫描方向为沿展开方向自下而上扫描的非成像型薄层色谱扫描仪。 主要优点： 1、拥有国家计量认证，完全符合有关要求，使用无风险； 2、符合国家《薄层色谱扫描仪检定规程》所有要求，方法合法； 3、拥有ISO9001：2000质量保证体系，性能稳定，故障少； 4、药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，随时调用，非常方便； 5、定量准确，价格合理，性价比高； 6、自动化程度高，操作简单，适合成批分析； 仪器组成：