肝糖原提取和测定

肝糖原的提取和鉴定

一、实验目的

1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。

2.熟悉肝糖原的鉴定方法。

二、实验原理

肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一。其储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是动物体内糖的重要的来源之一。肝糖原的合成或分解对血糖浓度的调节起着重要的作用。

糖原属于高分子糖类化合物，微溶于水，无还原性，与碘作用变成红棕色。提取肝糖原是利用三氯醋酸破坏肝组织中的酶，且肝组织中的蛋白质也被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留在溶液中。过滤除去沉淀，滤液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。将沉淀的糖原溶于水，即可得到糖原溶液。

糖原与碘作用呈红棕色。糖原被酸水解为葡萄糖，可用班氏试剂检验。利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定组织中糖原的存在。

三、实验材料、仪器和试剂

1. 材料：

小白鼠等动物新鲜肝脏组织

2. 仪器：

（1）天平（2）研钵（3）离心机

（4）离心管（5）恒温水浴锅（6）试管

（7）广泛试纸（8）移液管（9）洗耳球

（10）电炉（11）量筒（12）滤纸

3．试剂：

（1）10%的三氯醋酸溶液

（2）5%的三氯醋酸溶液

（3）95%乙醇溶液

（4）浓盐酸

（5）20%的NaOH溶液

（6）碘液：(取碘1g、碘化钾2g溶于500mL蒸馏水中)

（7）班氏试剂：(将硫酸铜17.3g溶于100mL温蒸馏水中；取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于700mL温蒸馏水中，待冷却后，将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL)

四、操作步骤

(一)肝糖原的提取

（1）肝匀浆的制备：迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用滤纸吸取附着的血液。称取约1g肝脏置研钵中，加入少许石英砂及10%的三氯醋酸溶液1mL，研磨至呈乳状后再加入5%的三氯醋酸2mL，继续研磨，直至肝脏组织已充分磨成均匀糜浆。

（2）提取糖原：将制备好的肝匀浆以3000r/min的转速离心10min。取上清液于另一离心管并量取体积，加入等体积的95%乙醇溶液，混匀后静置10min，使糖原呈絮状析出。将沉淀溶液以3000r/min的转速离心10min，弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上1～2min，向沉

淀中加入蒸馏水1mL，用细玻璃棒搅拌至溶解，即成糖原溶液。(二)肝糖原的鉴定

（1）与碘的呈色反应：取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴，然后两管各加入碘液2滴，混匀。观察两试管中溶液的颜色变化，并解释现象。

（2）糖原水解液中葡萄糖的鉴定：在剩余的糖原溶液中加入浓盐酸3滴，放入沸水浴中加热10min，取出冷却，用20%的NaOH溶液中和至中性(用pH试纸检测)。然后加入班氏试剂2mL，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察管中沉淀的生成，并解释现象。

五、注意事项

（1）实验用小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时肝糖原易分解而使其含量减少。

（2）肝脏离体后，肝糖原会迅速分解，所以在杀死动物后，所得刚脏必须迅速用三氯醋酸溶液处理。