细胞化学染色表现及要求(cytochemicalstain)
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细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• （2）普鲁士蓝反应：铁与酸性亚铁氰化钾 作用，形成如亚铁氰化铁蓝色沉淀，如铁染 色。
• （3）雪夫反应: 过碘酸氧化细胞内糖类中 的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂 作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘 酸-雪夫反应。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
一、过氧化物酶染色（POX）
【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆中含有 髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）,能将底物H2O2分解，产生新生态氧， 它能够将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。 联苯胺蓝自我脱氢氧化，则显棕色四甲基 苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠与联苯 胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位 于细胞浆酶所在细部胞化学位染色。表现和要求
3.复染
• 目的在于Baidu Nhomakorabea各种细胞能显示出来便于观察。
选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显
的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看
出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性
红，过碘酸-雪夫反应常用甲基绿。对核着色效
果较好的有中性红、甲基绿、苏木精、核固红、
沙黄等，使浆着色较好的有伊红、刚果红、光
绿等。
(cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
骨髓片POX染色
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
骨髓片POX染色
AML-M4：部分呈阳性反应， 部分成弱阳性反应
APL：呈强阳性反应
AML-M5：呈弱阳性 细胞(c化yto学ch染e色mi表ca现lsAt和aiLn要)L求：呈阴性，<3%
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 细胞化学染色临床意义: • 1.辅助判断急性白血病的类型。仅从细胞
形态学观察白血病的诊断正确率约50～ 70%，如结合细胞化学染色则可提到 90%以上。 • 2.辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• NAP积分 油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别 记录其分级情况，全部阳性细胞之和即为阳性率。将得出各种 积分的百分率乘以该积分数，再相加即为积分值。
POX染色临床意义
主要有助于急性白血病类型的鉴别
（1）急粒其白血病性原粒细胞可呈弱阳性反应，颗 粒粗大，呈局灶性分布；急淋其原淋细胞和幼淋均 呈阴性反应；急单时白血病性原单呈阴性反应或弱 阳性反应，颗粒细小，呈弥散分布。
（2）急单与恶性组织细胞白血病鉴别：异常组织细 胞 POX染色呈阴性反应，急单白血病细胞呈弱阳 性反应。
(cytochemicalstain)
三、中性粒细胞NAP染色
【原理】 中性粒细胞胞浆中的碱性 磷酸酶能水解磷酸萘酚钠，释放出 萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶 性的有色沉淀定位于酶活性处。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
正常血细胞的染色反应
• 过氧化物酶主要存在于粒细胞和单核细胞中。 原粒大多呈阴性反应，部分可出现少量阳性 颗粒。自早幼粒细胞起至成熟中性粒细胞均 呈阳性反应，并随着细胞的发育成熟阳性反 应程度逐渐递增，中性分叶核粒细胞呈强阳 性反应。
–淋巴细胞、幼细红胞(c化y细to学ch染胞e色mi表c、a现lst和a巨in要) 求核等均呈阴性反应。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 【正常血细胞的染色反应】 结果与POX染色基本一致。
• 【临床意义】 本染色临床意义与POX染色基本相似。
• 【方法评价】过氧化物酶染色要求涂片新鲜，保持酶活 性，才能得出正确结果，而苏丹黑B染色则无此要求。 虽然SB染色临床意义基本同POX染色 ，但其灵敏度及 特异性两者有所不同。SB染色的特异性低于POX染色， POX阳性见于髓系细胞，而SB阳性也可见于淋系细胞； 但SB染色的敏感性高于POX染色，例如急性粒细胞白 血病POX染色阴性的细患胞化者学染，色表其现和S要B求染色可阳性。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
2. 有色沉淀反应
通过不同化学反应，使被检测的化学物质最终形 成稳定的有色沉淀。列举以下三种化学反应： • （1）偶氮偶联法：含萘酚的底物，在相应酶的作用 下释放出萘酚，萘酚与重氮盐（如坚牢蓝紫酱GBC、 坚牢蓝B、六偶氮付品红等）结合，偶氮偶联形成有 色沉淀。如NAP染色、特异性酯酶染色、非特异性酯 酶染色、ACP染色等。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B（Sudan black B， SBB）是一种脂溶性重氮染料，能溶解细 胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖 脂和类固醇）中，而使脂类物质显示出来， 呈棕黑色或深黑色。脂类物质在粒细胞中 丰富，单核细胞中也有少量。
细胞化学染色表现和要求
(cytochemical stain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
概述
• 细胞化学 (组织化学，组化)染色以
形态学为基础并结合化学或生物化学技术， 对细胞内各种化学成分、代谢产物作定位、 定性和半定量检查的一门科学。可弥补单纯 细胞形态学检查识别的不足。
• 不同细胞化学染色，染色步骤不同，但基 本步骤为固定、有色沉淀反应及复染。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 1.固定 为了保持细胞结构及化学成分的不
变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不 同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、 酶类、糖类等变成不溶性物质。固定的方法 有物理法和化学法，临床上常用的是化学法 固定。物理法包括干燥和火焰固定；化学法 包括蒸汽固定和液体固定，如甲醛、乙醇、 甲醇、丙酮等。
• （2）普鲁士蓝反应：铁与酸性亚铁氰化钾 作用，形成如亚铁氰化铁蓝色沉淀，如铁染 色。
• （3）雪夫反应: 过碘酸氧化细胞内糖类中 的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂 作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘 酸-雪夫反应。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
一、过氧化物酶染色（POX）
【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆中含有 髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）,能将底物H2O2分解，产生新生态氧， 它能够将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。 联苯胺蓝自我脱氢氧化，则显棕色四甲基 苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠与联苯 胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位 于细胞浆酶所在细部胞化学位染色。表现和要求
3.复染
• 目的在于Baidu Nhomakorabea各种细胞能显示出来便于观察。
选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显
的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看
出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性
红，过碘酸-雪夫反应常用甲基绿。对核着色效
果较好的有中性红、甲基绿、苏木精、核固红、
沙黄等，使浆着色较好的有伊红、刚果红、光
绿等。
(cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
骨髓片POX染色
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
骨髓片POX染色
AML-M4：部分呈阳性反应， 部分成弱阳性反应
APL：呈强阳性反应
AML-M5：呈弱阳性 细胞(c化yto学ch染e色mi表ca现lsAt和aiLn要)L求：呈阴性，<3%
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 细胞化学染色临床意义: • 1.辅助判断急性白血病的类型。仅从细胞
形态学观察白血病的诊断正确率约50～ 70%，如结合细胞化学染色则可提到 90%以上。 • 2.辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• NAP积分 油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别 记录其分级情况，全部阳性细胞之和即为阳性率。将得出各种 积分的百分率乘以该积分数，再相加即为积分值。
POX染色临床意义
主要有助于急性白血病类型的鉴别
（1）急粒其白血病性原粒细胞可呈弱阳性反应，颗 粒粗大，呈局灶性分布；急淋其原淋细胞和幼淋均 呈阴性反应；急单时白血病性原单呈阴性反应或弱 阳性反应，颗粒细小，呈弥散分布。
（2）急单与恶性组织细胞白血病鉴别：异常组织细 胞 POX染色呈阴性反应，急单白血病细胞呈弱阳 性反应。
(cytochemicalstain)
三、中性粒细胞NAP染色
【原理】 中性粒细胞胞浆中的碱性 磷酸酶能水解磷酸萘酚钠，释放出 萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶 性的有色沉淀定位于酶活性处。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
正常血细胞的染色反应
• 过氧化物酶主要存在于粒细胞和单核细胞中。 原粒大多呈阴性反应，部分可出现少量阳性 颗粒。自早幼粒细胞起至成熟中性粒细胞均 呈阳性反应，并随着细胞的发育成熟阳性反 应程度逐渐递增，中性分叶核粒细胞呈强阳 性反应。
–淋巴细胞、幼细红胞(c化y细to学ch染胞e色mi表c、a现lst和a巨in要) 求核等均呈阴性反应。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 【正常血细胞的染色反应】 结果与POX染色基本一致。
• 【临床意义】 本染色临床意义与POX染色基本相似。
• 【方法评价】过氧化物酶染色要求涂片新鲜，保持酶活 性，才能得出正确结果，而苏丹黑B染色则无此要求。 虽然SB染色临床意义基本同POX染色 ，但其灵敏度及 特异性两者有所不同。SB染色的特异性低于POX染色， POX阳性见于髓系细胞，而SB阳性也可见于淋系细胞； 但SB染色的敏感性高于POX染色，例如急性粒细胞白 血病POX染色阴性的细患胞化者学染，色表其现和S要B求染色可阳性。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
2. 有色沉淀反应
通过不同化学反应，使被检测的化学物质最终形 成稳定的有色沉淀。列举以下三种化学反应： • （1）偶氮偶联法：含萘酚的底物，在相应酶的作用 下释放出萘酚，萘酚与重氮盐（如坚牢蓝紫酱GBC、 坚牢蓝B、六偶氮付品红等）结合，偶氮偶联形成有 色沉淀。如NAP染色、特异性酯酶染色、非特异性酯 酶染色、ACP染色等。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B（Sudan black B， SBB）是一种脂溶性重氮染料，能溶解细 胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖 脂和类固醇）中，而使脂类物质显示出来， 呈棕黑色或深黑色。脂类物质在粒细胞中 丰富，单核细胞中也有少量。
细胞化学染色表现和要求
(cytochemical stain)
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
概述
• 细胞化学 (组织化学，组化)染色以
形态学为基础并结合化学或生物化学技术， 对细胞内各种化学成分、代谢产物作定位、 定性和半定量检查的一门科学。可弥补单纯 细胞形态学检查识别的不足。
• 不同细胞化学染色，染色步骤不同，但基 本步骤为固定、有色沉淀反应及复染。
细胞化学染色表现和要求 (cytochemicalstain)
• 1.固定 为了保持细胞结构及化学成分的不
变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不 同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、 酶类、糖类等变成不溶性物质。固定的方法 有物理法和化学法，临床上常用的是化学法 固定。物理法包括干燥和火焰固定；化学法 包括蒸汽固定和液体固定，如甲醛、乙醇、 甲醇、丙酮等。