全血胆碱脂酶测定

A管（样品管）
37℃水浴 30min（准确计时） 碱性羟胺4ml,振3min 1∶2盐酸溶液2ml, 摇1min 10%三氯化铁溶液2ml
摇匀、过滤、比色
计算
1.被水解 的乙酰胆碱吸光度=
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对照管吸光度（B管）－ 样品管吸光度（A管）
2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱( μmol )
---即0.02ml血经37 ℃，30min反应条件下的
胆碱酯酶活性绝对值C
3.胆碱酯酶活性相对值（%）
样品胆碱酯酶活性绝对 值 100 健康人碱酯酶活性绝对 值
浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值
男：3.22 ±0.336 μmol
女：3.19 ±0.398 μmol
注意事项
采血前先准备好试管，加入磷缓 采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集 中放置
实验器材
一次性注射器(1ml) 12个，采血用； 微量移液器（20μl）；分光光度计； 玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸； 恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ） 移液管(0.2ml，1ml，5ml)； 试管；漏斗；容量瓶
试剂
试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。 1．磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2 准确称取磷 酸氢二钠(Na2HP04· 12H2O)16.72g和磷酸二氢钾 (KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml， 置4℃冰箱中保存。 2．碱性羟胺溶液 临用时将139 g/L的盐酸 羟胺溶液与140 g/L的氢氧化钠溶液等体积混 合。 3．盐酸溶液1+2 浓盐酸l份加水2份混合。
胆碱
+
乙酸
乙酰羟胺
FeCl3 HCl
羟肟酸铁(棕红色络合物)
三氯化铁比色法
[原理] 血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆 碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱 与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺，然后在酸 性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟 酸铁络合物。其颜色深浅与乙酰胆碱的量 成正比，在520nm进行比色定量，从而推 算出胆碱脂酶活性。
试剂
4．三氯化铁溶液 (100 g/L) 称取10g三氯化 铁(FeCl3· 6 H2O )，加浓盐酸0.84ml，溶解后再 加水至100ml，贮存于棕色瓶中。 5．氯化乙酰胆碱标准溶液 (1)标准贮备液：精确称取氯化乙酰胆碱 1.2716g，用pH=7.2的磷酸盐缓冲液溶解并稀 释至100ml。此溶液1ml含70 μmol乙酰胆碱。 置4℃冰箱内保存。 (2)标准应用液：取标准贮备液用磷酸盐缓 冲液稀释10倍。此液1ml含7 μmol乙酰胆碱， 于临用前配制。
[分析步骤]
1. 乙酰胆碱标准曲线的绘制 2. 样品测定
1.乙酰胆碱标准曲线的绘制
（1）取六只具塞试管，配制不同浓度的乙酰胆碱溶液
管号 乙酰胆碱标准应 用液（ml） 1 0 2 0.2 3 0.4 4 0.6 5 0.8 6 1.0
磷酸盐缓冲液 （ml）
乙酰胆碱含量 （μmol）
2
0
1.8
1.4
全血胆碱酯酶活性的测定
——三氯化铁比色法
实验目的
掌握全血ChE活性测定的意义 掌握全血ChE活性测定原理、方法
方 法
Asch-DTNB比色法（GBZ52） 三氯化铁比色法 溴麝香草酚蓝（B· T· B）比色法 纸片法 Biocheck法（便携式分析仪）
三氯化铁比色法
[原理]
乙酰胆碱
碱性羟胺 胆碱酯酶
准确控制水浴温度和放置时间
加三氯化铁显色后，在20min内比色
参比管的溶液留用到最后
实验报告要求
[实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果]
[分析与讨论]
1.6
2.8
1.4
4.2
1.2
5.6
1.0
7.0
（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇2 min （3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇2 min （4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤 （5）测吸光度:λ=520nm，参比管-第1管 （6）绘制标准曲线
2.样品测定
0.98ml 磷酸缓冲液 20 μl 血 0.98ml 磷酸缓冲液 20 μl 血 B管（对照管） 37℃水浴 5min 乙酰胆碱标准应用液1ml 碱性羟胺4ml, 振3min 乙酰胆碱标准应用液1ml