亲和素和生物素系统
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亲和素和生物素系统
亲和细胞化学不同于免疫细胞化学，亲 和细胞化学是利用两种物质之间的高度 亲和能力而相互结合的化学反应。 目前，亲和组织化学中的亲和物质包括 亲和素与生物素、植物凝集素与糖类、 葡萄球菌A 蛋白（SPA ）与IgG、抗原 与抗体、阳离子与阴离子、激素与维生 素和脂质与受体等。
亲和素和生物素系统
LSAB法优缺点
• 此方法与ABC 法相比，不需A、B 两液提前混合， 操作者容易掌握，稳定性高，由于采用了低等电 点的链霉亲和素，其内源性生物素干扰要低于 ABC 法。 • 该法生物素化二抗和链霉亲和素HRP （AKP）的 孵育（室温）时间仅需10 15min，其敏感性和所 用时间与EnVision 法一致。 • 最大的缺点是内源性生物素的干扰。
标记链霉亲和素-生物素法 （Labelled streptavidin biotin ， LSAB）
• 它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或AKP 酶的链霉亲和素 （streptavidin ）连接来测定细胞及组织中 的抗原。
• 链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合 后，就能形成链霉亲和素-生物素-酶复合物， 这种复合物中至少存在1 个尚未被生物素占 据的链霉亲和素结合位点，可以和各种生 物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲 和纯化技术和酶标技术，LSAB 法敏感性更 高、背景更清晰。
• 此方法为前两种方法的改进，即先按一定 比例将亲和素与酶标生物素（或称生物素 化酶）结合，形成亲和素-生物素-过氧化物 酶复合物（ABC 复合物）。
• ABC 复合物不能饱和，即亲和素上的4 个结合位 点最多允许3 个位点与生物素化酶结合，留1~2 个位点与生物素化二抗结合。 • 抗原先后与特异性一抗、生物素化二抗、ABC 复 合物结合，最终形成巨大复合体，因该复合体网 络了大量酶分子，从而提高了检测的灵敏度。
• 亲和素和生物素系统是在免疫组织化学技 术方法上不断加以改进，与细胞生物化学 紧密结合后的产物。 • 这种方法使免疫组化技术的敏感性得到进 一步提高，更有利于微量抗原（或抗体） 在细胞或亚细胞水平的定位，扩大了其应 用范围。
生物素
• 生物素（biotin ），也称维生素H，是一种 分子质量为244Da 的小分子维生素。 • 抗体分子经生物素化后，其结合抗原的能 力不受损失，细胞经生物素化后仍能保持 正常的分裂、增殖能力，因此被用作抗体、 细胞的标记。
链霉亲和素
• 链霉亲和素（streptavidin ）是一种从链霉 菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量 60000，且不含糖链。 • 同亲和素一样，链霉亲和素也具有4个生物 素结合位点，亲和力高达10－15 mol/L，是 一种更完美的生物素结合蛋白。因为它很 少有低聚糖残余成分，可保持中性等电点， 避免了组织中的非特异性染色。
• 将亲和素与标记酶（HRP）结合，一个亲和素可 结合多个HRP • 将生物素与抗体（一抗或二抗）结合，一个抗体 分子可连接多个生物素分子 • 细胞的抗原（或通过一抗）先与生物素化的抗体 结合，继而将酶标记亲和素结合在抗体的生物素 上，如此多层放大提高了检测抗原的敏感性。
标记亲和素-生物素法（labeled avidin biotin，LAB）
亲和素
• 亲和素（avidin）是一种分子质量为 68000Da的一种碱性糖蛋白。亲和素具有 与其他示综物质，如，荧光素、酶、胶体 金等，结合的能力。 • 生物素和亲和素之间有极强的亲和力，比 抗体对抗原的亲和力要高出100 万倍。 • 亲和素有4 个亚单位，它具有4 个同生物素 亲和力极高的结合位点，因其能使生物素 失活，故又称抗生物素。
桥接亲和素-生物素法（bridged avidin biotin，BAB）
• 先使抗原与生物素化的抗体结合，再以游 离亲和素为“桥”将生物素化抗体与酶标 记生物素连接，也可达到多层放大效果。
亲和素-பைடு நூலகம்物素-过氧化物酶复合物法 （avidin biotin-peroxidase complex， ABC）
亲和细胞化学不同于免疫细胞化学，亲 和细胞化学是利用两种物质之间的高度 亲和能力而相互结合的化学反应。 目前，亲和组织化学中的亲和物质包括 亲和素与生物素、植物凝集素与糖类、 葡萄球菌A 蛋白（SPA ）与IgG、抗原 与抗体、阳离子与阴离子、激素与维生 素和脂质与受体等。
亲和素和生物素系统
LSAB法优缺点
• 此方法与ABC 法相比，不需A、B 两液提前混合， 操作者容易掌握，稳定性高，由于采用了低等电 点的链霉亲和素，其内源性生物素干扰要低于 ABC 法。 • 该法生物素化二抗和链霉亲和素HRP （AKP）的 孵育（室温）时间仅需10 15min，其敏感性和所 用时间与EnVision 法一致。 • 最大的缺点是内源性生物素的干扰。
标记链霉亲和素-生物素法 （Labelled streptavidin biotin ， LSAB）
• 它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或AKP 酶的链霉亲和素 （streptavidin ）连接来测定细胞及组织中 的抗原。
• 链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合 后，就能形成链霉亲和素-生物素-酶复合物， 这种复合物中至少存在1 个尚未被生物素占 据的链霉亲和素结合位点，可以和各种生 物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲 和纯化技术和酶标技术，LSAB 法敏感性更 高、背景更清晰。
• 此方法为前两种方法的改进，即先按一定 比例将亲和素与酶标生物素（或称生物素 化酶）结合，形成亲和素-生物素-过氧化物 酶复合物（ABC 复合物）。
• ABC 复合物不能饱和，即亲和素上的4 个结合位 点最多允许3 个位点与生物素化酶结合，留1~2 个位点与生物素化二抗结合。 • 抗原先后与特异性一抗、生物素化二抗、ABC 复 合物结合，最终形成巨大复合体，因该复合体网 络了大量酶分子，从而提高了检测的灵敏度。
• 亲和素和生物素系统是在免疫组织化学技 术方法上不断加以改进，与细胞生物化学 紧密结合后的产物。 • 这种方法使免疫组化技术的敏感性得到进 一步提高，更有利于微量抗原（或抗体） 在细胞或亚细胞水平的定位，扩大了其应 用范围。
生物素
• 生物素（biotin ），也称维生素H，是一种 分子质量为244Da 的小分子维生素。 • 抗体分子经生物素化后，其结合抗原的能 力不受损失，细胞经生物素化后仍能保持 正常的分裂、增殖能力，因此被用作抗体、 细胞的标记。
链霉亲和素
• 链霉亲和素（streptavidin ）是一种从链霉 菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量 60000，且不含糖链。 • 同亲和素一样，链霉亲和素也具有4个生物 素结合位点，亲和力高达10－15 mol/L，是 一种更完美的生物素结合蛋白。因为它很 少有低聚糖残余成分，可保持中性等电点， 避免了组织中的非特异性染色。
• 将亲和素与标记酶（HRP）结合，一个亲和素可 结合多个HRP • 将生物素与抗体（一抗或二抗）结合，一个抗体 分子可连接多个生物素分子 • 细胞的抗原（或通过一抗）先与生物素化的抗体 结合，继而将酶标记亲和素结合在抗体的生物素 上，如此多层放大提高了检测抗原的敏感性。
标记亲和素-生物素法（labeled avidin biotin，LAB）
亲和素
• 亲和素（avidin）是一种分子质量为 68000Da的一种碱性糖蛋白。亲和素具有 与其他示综物质，如，荧光素、酶、胶体 金等，结合的能力。 • 生物素和亲和素之间有极强的亲和力，比 抗体对抗原的亲和力要高出100 万倍。 • 亲和素有4 个亚单位，它具有4 个同生物素 亲和力极高的结合位点，因其能使生物素 失活，故又称抗生物素。
桥接亲和素-生物素法（bridged avidin biotin，BAB）
• 先使抗原与生物素化的抗体结合，再以游 离亲和素为“桥”将生物素化抗体与酶标 记生物素连接，也可达到多层放大效果。
亲和素-பைடு நூலகம்物素-过氧化物酶复合物法 （avidin biotin-peroxidase complex， ABC）