检定菌管理规程

• 白色念珠菌
• 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基 中或改良马丁琼脂培养基上, 于23～28℃培养 18～48小时后, 将上述培养物用0.9%无菌氯化钠 溶液制成每1ml中含菌数小于100CFU（菌落形 成单位）的菌悬液。
• 黑曲霉孢子悬液
• 取购回的二代黑曲霉菌液，取1ml加0.9%无菌氯 化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至制 成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
检定菌的传代
大拇指按在管中央（斜面向上），先轻动管硅氟胶塞。
3.将菌种斜面和待接种斜面夹在左手食、中、无名指之间，
4.手拿接种针(环)柄末端,使其垂直于酒精灯火焰中,烧红并上
下移动,烧至柄下2～3寸处.
将试管口通过火焰后移开,但使试管口仍靠近并面向火焰.
5.用右手无名指及小指夹住二管之胶塞,稍稍旋转后轻轻拨出,
检定菌的传代示意图
• 检定菌贴上适当的标 识(内容包括：菌种名 称、编号、代次、传 代日期、传代操作人、 贮存条件)后保藏、使 用。
• 填写菌种传代、保藏 及领用记录，内容包 括：菌种名称、传代 过程、传代日期、母 代批号、子代批号、 培养生长情况、传代 者签名、领用日期、 用途、废弃日期等。
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菌种及其代号
藤黄微球菌 [CMCC（B）28001]—ML 生孢梭菌 [CMCC（B）64941]——Cs 白色念珠菌 [CMCC（F）98001]—－Ca 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102]——Ecoli 铜绿假单胞 [CMCC（B）10104]——Pa 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003]——Sta 枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501]——Bs 短小芽孢杆菌 [CMCC（B）63202]——Bp 黑曲霉菌 [CMCC（F）98003]——An 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC ( B ) 50094] —— Sp
细菌
接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 萄球菌、铜绿假单胞菌与大肠埃希菌的新鲜培养 物少许至营养肉汤培养基中 , 于 30 ～ 35 ℃培养 18～24小时后, 将上述培养物用0.9%无菌氯化钠 溶液制成每 1ml 中含菌数小于 100CFU （菌落形 成单位）的菌悬液。
• 生孢梭菌
• 取经30～35℃培养18～24小时的生孢梭菌硫乙 醇酸盐流体培养物1ml，将上述培养物用0.9%无 菌氯化钠溶液制成每1ml中含菌数小于100CFU （菌落形成单位）的菌悬液。
检定菌的保藏
菌种保藏的原理 • 根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造 的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细 胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不 至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、 缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代 谢作用。 • 低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。
6.将接种环入菌种试管中,先与试管壁接触,待冷后在斜面上 挑取少量菌体（一般为一接种环）
.
7.再将接种环入另一待接种之试管斜面中,自上而下在斜面上 划一直线或曲线. 8.将试管口再次通过火焰,然后塞上胶塞,灼烧用过的接种 环放回原处。
9.将胶塞塞紧,按菌种属性放入不同温度的生化培养箱中培养 （细菌培养温度30～35℃，18～24小时；真菌培养温度23～ 28℃，3～5天）。
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美国国家菌种保藏中心提供的标准菌株
中国医学菌种保藏中心提供的标准菌株
• 检定菌的采购
• 化验员应根据实验需要填写请购单由质量 检测中心经理审核批准后，交由采供部到 省、市药检所或中检所购买（标准储备菌 株2代斜面） • 接受标准储备菌株2代斜面时应仔细核对标 签上菌名、菌号以及代次。并填写菌种接 受及领用记录。
关于黑曲霉
• 转种操作应在超净工作台（或相当此环境） 中进行，关闭风机，靠近酒精灯操作； • 转种完毕的冻存管和使用过的器具应经 121℃湿热灭菌30分钟再作处理；
菌液的保存周期
• 菌悬液保存于2～8℃，可在24小时内使用，若在 室温下放置，应在2小时内使用 • 黑曲霉孢子相当稳定，可以保存于4 ℃ 0.9% 氯 化钠溶液中较长时间（可在验证过的存储期内） 使用，作为孢子悬液储备液使用。由此可以减少 菌液制备工作量和反复操作黑曲霉的风险。
每种标准储备菌 株一般制备4-5支工作菌工作菌株3代斜面 株斜面
一般每2-3个月使用一支 工作菌株来制备阳性菌液
工作菌株3代斜面 标准储备菌 株2代斜面
传 代 转斜面
制备阳性菌液
工作菌株3代斜面
4代工作菌种斜面
工作菌株3代斜面
菌液（5代）
工作菌株3代斜面
阳性对照菌悬液（小于100CFU）
检定菌的传代
– 现我组的菌株采琼脂斜面低 温保存法 （铜绿假单胞为 室温保藏） – 新购入的检定菌菌种放在专 用冰箱中保藏，实验室应配 备带锁的房间存放检定菌冰 箱或冰箱自带锁，专人负责 管理及保管钥匙。
编制菌种批号
菌种代号—年份—月份—购买次数-代数流水号-支数编号
如2015年3月11日为当月第一次购买大肠埃希菌菌斜面， 批号为Ecoli-150311-2，(一般购买的菌种为第二代)，其 第一次传代斜面批号为Ecoli-150311-3-×（第3代第× 支），第二次传代批号为Ecoli-150311-2-4-×（第4代第 ×支），以此类推。
检定菌管理规程
质量检测中心
张廷滔
内容
1.概念 2.检定菌的采购 3.检定菌的传代 4.检定菌的保藏 5.菌悬液的制备
概念
• 标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的， 遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 • 标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培 养物。 • 商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准 菌株等效的菌株。 • 代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养， 并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式， 新培养物对接种培养物而言就称为一代。 • 工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。
• • • •
国内药品微生物检验所用的菌种代号是 CMCC（F）或 CMCC（B） CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 B —— 代表细菌， F ——代表真菌。
• 检定菌的使用
检定菌子代菌种由菌种保藏人员负责发放，并有 领用记录。
阳性对照菌液的制备
• 常用细菌、酵母菌以及霉菌菌悬液 制备标准操作流程
• 传代所用的培养基斜面
– 营养琼脂斜面（细菌） – 改良马丁琼脂斜面（真菌）
– 培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用
检定菌的传代操作
注明菌种代号，传代日期。
1.取待接种的培养基斜面试管，在试管斜背面
待温度平衡后,再与斜面试管一起由传递窗移入阳性 对照室。
2.自冰箱取出的菌种斜面，室温放置约30分钟，