第九章 行为毒理 毒理学课件
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D 感觉功能试验 到目前为止，在行为毒理学领域中，用 于测试动物感觉功能的方法多数还是定性的方法，而不是 敏感性的定量方法。目前常用的试验方法有：①嗅觉定向 试验；②视觉定位试验；③辩别学习；④听觉惊吓反应； ⑤悬崖回避试验；⑥味觉定向试验。
E 游泳试验 根据大鼠游泳时身体姿势及四肢利用情况对 其游泳能力的发育进行评价。试验时将幼鼠放在水温为 25±2℃的容器内，根据动物游泳的姿势，四肢利用情况及 游泳方向，给予评分，根据得分的高低，评价其游泳能力 发育状况。
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
4. 因此，自七十年代后期以来，行为毒理学尤其是方法 学的研究得到了迅速的发展。
日本、英国相继在药品鉴定指南中明确指出，必须对后代 进行行为方面如运动、学习、视觉等方面的检查。
欧洲经济共同体（EEC）也要求其成员国在化学物质安全 性评价中，应做“无临床症状生殖和生长发育方面的毒 性试验”。
4 试验环境
要求所有条件（温度、湿度、光照、噪声等）适合并 一致。接触受试物的时间和行为检测时间也要一致。
5 实验方法
1）一般行为检查主要包括： ①动物的外观：主要是毛发、眼睑、四肢、呼吸、尾部的 位置等状态及分泌物、排泄物的颜色和量。 ②姿势和运动的观察：运动的种类、姿势、步态。例如是 否有探索行为过多等不安定的状态。 ③对刺激的反应：主要是对光、声及空气吹浮的反应。 ④触摸后观察：全身状态（震颤、僵硬）、皮肤颜色、感 觉过敏等。 ⑤反应和生理状况：接近反应、触摸反应、翻正反射、挟 尾反应、前后肢抓力及体温、心率、呼吸等。
在1995年至1996年期间，以美国和加拿大两国为中心， 并且有欧洲化学物质生态和毒理学中心（ECETOC）及美 国工业卫生署（AIHC）协同参与下，成立了化学物质的 安全性评价组织（OECD），于1996年撰写出有关进行神 经毒性试验方法指南的初稿。
1998年3月30日至4月1日，召开了国际OECD神经行 为毒性的研讨会。会上着重讨论了神经毒性的评价原则及 其试验方法，为化学物质和农药的安全性评价提供了统一 的、标准的、国际上认可的方法。
障碍。七十年代，Harada等首次报道了“胎儿水俣病”
（fetal minamata），即母亲在妊娠期间接触甲基汞，
影响胎儿的神经系统发育，导致胎儿出生后智力和运
动功能发育障碍。
5.
这些发现使人们认识到在化学物质安全性评价
中，仅仅从形态学的改变来评价是不够的，而应对后
代行为和功能的改变给予足够的重视。
八十年代，美国先后在新生产化学物质的安全性毒性评价 试验方法指南中，增加了“行为功能观察指标测试试验 （FOB）和活动量”等行为测试方法，把行为毒理学方 法作为一种敏感的的化学物质安全性评价手段，逐渐 列入化学物质安全性评价法规中。
这构成了化学物质安全性毒理学评价的第四个阶段。
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
3）实验动物学习和记忆能力的测定 A 压杆试验 B 迷宫试验
第九章 行为毒性及其试验方法
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
4. 1973年，Jones和Smith报导了胎儿酒精综合征（fetal
alcohol syndrome, FAS），即母亲在妊娠期间长期饮
Baidu Nhomakorabea
用酒精性饮料引起的胎儿异常综合征，包括特殊的面
部畸形，出生前后功能发育障碍和中枢神经系统功能
2 剂量分组和期限
❖ 一般设三个剂量组。便于求出剂量反应关系。另设 阴性和阳性对照组。
❖ 最高剂量可参考：亚慢性毒性试验的阈剂量或最大 无作用剂量
3 试验期限
❖一般以亚慢性接触为主（90天），停止给药后应再继续观 察4周或更长时间，以判断其恢复的可能性。
❖有时也观察急性接触引起的行为变化，求出其急性阈剂量
次日，以16转/分旋转，观察其跌落时间，评定其耐力。
C 活动试验 用于活动量测试的装置，大多与计算机相连， 即可以测定几分钟，又可以连续测定几天的活动量，数据 全部使用计算机自动分析，常见的装置有短期活动量的测 试系统和长期活动量的测试系统等。这类试验主要通过对 动物活动类型及活动量多少分析，来评价化学物质如一些 药物和农药是否对运动功能产生损害。
B 转棒试验 主要用于小鼠 该方法是将小鼠放于一个旋转的棒上，观察其平衡力
与耐力。
将一直径4.5cm，长60cm的直棒，用隔板分成6格，每 格一鼠。将棒支于30厘米高的支架上，以一定转速旋转直 棒。
开始时以9转/分训练，然后正式试验。从9转/分逐渐增 加转速到12、16、20、22转/分，观察小鼠落下时直棒的旋 转速度，评价其平衡能力。
三、行为毒理学评价的目的与原则 1 行为毒理研究的目的
是利用行为毒理的方法研究外来化合物接触机体后 的效应，并以此为指征确定其阈剂量，为制定卫生限量 标准提供更为灵敏、严格的试验依据
2 行为毒理评价的原则
主要是对那些在环境中存在的可能具有神经毒性，或者 可疑具有神经毒性的化学物质以及可能具有潜在神经毒 性的物质，可通过各种途径与人类可能接触或进入人体 的，原则上都应该进行行为毒性的评价。
2）实验动物的平衡、运动和感觉行为的测定 A 翻正反射试验 适用于大、小鼠
倒提鼠尾，旋转2~3次后，使其由距离桌面20~30cm处 落下，根据其落下后的姿势判断化合物破坏其平衡能力。
评分方法：反复试验5次。 侧卧出现2次以下为1级，3~4次为2级，5次为3级； 仰卧出现2次以下为4级，3~4次为5级，5次为6级； 不论侧卧还是仰卧，翻正速度缓慢为7级， 不能翻正为8级
四、行为毒理实验
1 实验动物的选择
原则上是选择生理学和动物学上的分类与人类更接近 的，同时也要既容易获得，又经济的动物。
目前国际上最通用的动物是一般是初成年大鼠或小鼠； 小鼠鼠龄30天以上，大鼠42天以上。20只/组，雌雄各半。
但也要注意，动物对化学物质敏感性问题，如某种杀 虫剂用啮齿类动物不能检测出其神经毒性，但给小鸡投予 后，经过一段时间，可以发现其神经毒性。所以，对行为 毒性实验来说，化学物质的吸收、代谢和排泄等方面与特 定动物神经系统易感性的选择应予足够的重视和充分的考 试。 有时也可用猫、狗、猴、鸽子等。
E 游泳试验 根据大鼠游泳时身体姿势及四肢利用情况对 其游泳能力的发育进行评价。试验时将幼鼠放在水温为 25±2℃的容器内，根据动物游泳的姿势，四肢利用情况及 游泳方向，给予评分，根据得分的高低，评价其游泳能力 发育状况。
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
4. 因此，自七十年代后期以来，行为毒理学尤其是方法 学的研究得到了迅速的发展。
日本、英国相继在药品鉴定指南中明确指出，必须对后代 进行行为方面如运动、学习、视觉等方面的检查。
欧洲经济共同体（EEC）也要求其成员国在化学物质安全 性评价中，应做“无临床症状生殖和生长发育方面的毒 性试验”。
4 试验环境
要求所有条件（温度、湿度、光照、噪声等）适合并 一致。接触受试物的时间和行为检测时间也要一致。
5 实验方法
1）一般行为检查主要包括： ①动物的外观：主要是毛发、眼睑、四肢、呼吸、尾部的 位置等状态及分泌物、排泄物的颜色和量。 ②姿势和运动的观察：运动的种类、姿势、步态。例如是 否有探索行为过多等不安定的状态。 ③对刺激的反应：主要是对光、声及空气吹浮的反应。 ④触摸后观察：全身状态（震颤、僵硬）、皮肤颜色、感 觉过敏等。 ⑤反应和生理状况：接近反应、触摸反应、翻正反射、挟 尾反应、前后肢抓力及体温、心率、呼吸等。
在1995年至1996年期间，以美国和加拿大两国为中心， 并且有欧洲化学物质生态和毒理学中心（ECETOC）及美 国工业卫生署（AIHC）协同参与下，成立了化学物质的 安全性评价组织（OECD），于1996年撰写出有关进行神 经毒性试验方法指南的初稿。
1998年3月30日至4月1日，召开了国际OECD神经行 为毒性的研讨会。会上着重讨论了神经毒性的评价原则及 其试验方法，为化学物质和农药的安全性评价提供了统一 的、标准的、国际上认可的方法。
障碍。七十年代，Harada等首次报道了“胎儿水俣病”
（fetal minamata），即母亲在妊娠期间接触甲基汞，
影响胎儿的神经系统发育，导致胎儿出生后智力和运
动功能发育障碍。
5.
这些发现使人们认识到在化学物质安全性评价
中，仅仅从形态学的改变来评价是不够的，而应对后
代行为和功能的改变给予足够的重视。
八十年代，美国先后在新生产化学物质的安全性毒性评价 试验方法指南中，增加了“行为功能观察指标测试试验 （FOB）和活动量”等行为测试方法，把行为毒理学方 法作为一种敏感的的化学物质安全性评价手段，逐渐 列入化学物质安全性评价法规中。
这构成了化学物质安全性毒理学评价的第四个阶段。
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
3）实验动物学习和记忆能力的测定 A 压杆试验 B 迷宫试验
第九章 行为毒性及其试验方法
二、化学物质行为毒性研究问题的提出
4. 1973年，Jones和Smith报导了胎儿酒精综合征（fetal
alcohol syndrome, FAS），即母亲在妊娠期间长期饮
Baidu Nhomakorabea
用酒精性饮料引起的胎儿异常综合征，包括特殊的面
部畸形，出生前后功能发育障碍和中枢神经系统功能
2 剂量分组和期限
❖ 一般设三个剂量组。便于求出剂量反应关系。另设 阴性和阳性对照组。
❖ 最高剂量可参考：亚慢性毒性试验的阈剂量或最大 无作用剂量
3 试验期限
❖一般以亚慢性接触为主（90天），停止给药后应再继续观 察4周或更长时间，以判断其恢复的可能性。
❖有时也观察急性接触引起的行为变化，求出其急性阈剂量
次日，以16转/分旋转，观察其跌落时间，评定其耐力。
C 活动试验 用于活动量测试的装置，大多与计算机相连， 即可以测定几分钟，又可以连续测定几天的活动量，数据 全部使用计算机自动分析，常见的装置有短期活动量的测 试系统和长期活动量的测试系统等。这类试验主要通过对 动物活动类型及活动量多少分析，来评价化学物质如一些 药物和农药是否对运动功能产生损害。
B 转棒试验 主要用于小鼠 该方法是将小鼠放于一个旋转的棒上，观察其平衡力
与耐力。
将一直径4.5cm，长60cm的直棒，用隔板分成6格，每 格一鼠。将棒支于30厘米高的支架上，以一定转速旋转直 棒。
开始时以9转/分训练，然后正式试验。从9转/分逐渐增 加转速到12、16、20、22转/分，观察小鼠落下时直棒的旋 转速度，评价其平衡能力。
三、行为毒理学评价的目的与原则 1 行为毒理研究的目的
是利用行为毒理的方法研究外来化合物接触机体后 的效应，并以此为指征确定其阈剂量，为制定卫生限量 标准提供更为灵敏、严格的试验依据
2 行为毒理评价的原则
主要是对那些在环境中存在的可能具有神经毒性，或者 可疑具有神经毒性的化学物质以及可能具有潜在神经毒 性的物质，可通过各种途径与人类可能接触或进入人体 的，原则上都应该进行行为毒性的评价。
2）实验动物的平衡、运动和感觉行为的测定 A 翻正反射试验 适用于大、小鼠
倒提鼠尾，旋转2~3次后，使其由距离桌面20~30cm处 落下，根据其落下后的姿势判断化合物破坏其平衡能力。
评分方法：反复试验5次。 侧卧出现2次以下为1级，3~4次为2级，5次为3级； 仰卧出现2次以下为4级，3~4次为5级，5次为6级； 不论侧卧还是仰卧，翻正速度缓慢为7级， 不能翻正为8级
四、行为毒理实验
1 实验动物的选择
原则上是选择生理学和动物学上的分类与人类更接近 的，同时也要既容易获得，又经济的动物。
目前国际上最通用的动物是一般是初成年大鼠或小鼠； 小鼠鼠龄30天以上，大鼠42天以上。20只/组，雌雄各半。
但也要注意，动物对化学物质敏感性问题，如某种杀 虫剂用啮齿类动物不能检测出其神经毒性，但给小鸡投予 后，经过一段时间，可以发现其神经毒性。所以，对行为 毒性实验来说，化学物质的吸收、代谢和排泄等方面与特 定动物神经系统易感性的选择应予足够的重视和充分的考 试。 有时也可用猫、狗、猴、鸽子等。