积雪草组织培养外植体的灭菌方法
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为 ７ ％， ５ 处理 时 间为 ３ ； ０ 次氯 酸 钠 质 量 浓 度选 用 １ Ｓ ％和 ２ ％ ２ 水 平 ；氯 化 汞 质量 分数 选 用 ０１ 个 ． ％和 ０２ ２个 水 平 ；处 ． ％ 理 时 间均 为 ８ｒｉ。 预 实 验 方 案 ： ｎ ａ
幼嫩芽的顶芽作为外植体 。 些外植体来 自室外 ， 这 顶芽暴露 在空气中， 了受到空气 中的杂菌污染外 ， 除 还容易受到泥 土、 肥料中的杂菌污染 。 本研究采用不同的灭菌方法对 积雪草外 植体进行试验 ， 探讨积雪草组 织培养 中外植体的有效灭菌方
组 织 培 养 过 程 中 的 外 植 体 接 种 成 功 与 否 ， 要 取 决 主 于 外 植 体 的 选 取 和 消 毒 灭 菌 方 法 的 掌 握 Ｉ 。在 积雪 草 的 】 … 组 织 培 养 研究 中 ， 们 以 成 龄 或 幼龄 植 株 上 当年 生 的 、带有 我
水冲洗后 ，先用酒精消毒 ，再配合次氯酸钠、氯化汞等进行 灭菌。 本试验选 用 目前应用 比较普通的酒精与次氯酸钠和酒 精与氯化汞组合 ， 进行预试验比较 ， 采用单因素预试实验方 法对积雪草外植体灭菌消毒剂进行筛选ｌ 。酒精体积分数 ｌ
ｃ 的 带 有 幼嫩 顶 芽 的 茎 段 ，放 入 清洗 液 或洗 衣 粉 水 中浸 泡 ｍ
２ ｎ ｍｉ，流 水 冲洗 ２ ，备 用 。 ｈ
ｌ 试验 方法 ２
１ ． 外 植 体 灭 菌 消 毒剂 的筛 选 试 验 ．１ ２
外 植体 用 自来
等作 用 ，还具有抗肿瘤、抗结核作用 ，还被 用作 昆虫 拒食剂和美容制剂 Ｊ 。
组 实验 ，每 组 实 验均 用 的试 剂 是 ７＇酒 精 。 ５ｏ ／
基金项目： 湖南省大学生研究性学 习与创新性 实验计划
项目
作者 简介 ：于静 （９ ７ ，女，吉林长岭人 ，湖 南科 １８ 一）
技 学 院 生物 工 程专 业 ２０ ０ ７级 学 生 。 讯作 者 ： 常 健 （９ ８ 通 李 Ｉ６
（） ７％酒 精 消 毒 处 理 ３ ＋０２ ４ ５ ０Ｓ ． ％氯化 汞 灭 菌 处理 ８
ｒ ｎ ｎｉ
收 稿 日期 ：２ ｌ 一 ｌ—０ ００ ０ ６
Ｉ ． 消毒剂不 同浓度、不同处理 时间的对比试验 ２ ２ 通过外植体灭菌消毒 剂的筛选试验后 ， 了确定筛选出 为 来的消毒剂 的最佳处理时间与灭菌浓度 ， 以下方法设计三 按
第 ３卷 第 １ １ ２期
２ １年 ｌ 月 ００ ２
湖南科技学院学报
Ｖ Ｉ １ ｏ１ ０－ ． ３Ｎ ２
Ｄ Ｃ２ ｌ Ｃ ．Ｏ Ｏ
积 雪草 组 织 培养 外植 体 的灭 菌 方 法
于
摘
静
谢会兰
李光辉 田
礼
骆
鹰
李常健水
（ 南 科技 学院 生 命科 学 与 化 学 工程 系 ，湖 南 永州 ４ ５０ ） 湖 ２ １ ０
要：在单 因素预 实验 的基础上 ，采用单一变量实验设计 ，筛选 出了植物组织培养 中积雪草外植体 最佳灭菌方法 ，总
结 出酒 精 浸 泡 时 间 、氯 化 汞质 量 分数 、氯 化 汞 浸 泡 时 间 等对 积 雪草 茎 外植 体 的污 染程 度 及 成 活 率 均有 显 著 影 响 。 实验 表 明 ，
对积雪草外植体先用 ７ ％的酒精 消毒 ２０ ，再配合 ０１ ５ ｓ ． ％的氯化汞溶 液处理 ６ｒｉ，能达到理想的灭菌效果。 ｎ ａ
关键词：积 雪草；组织培 养；外植体 ；灭 菌
中图 分 类号 ：Ｑ ３ 一３ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １ ７— ２ ９ （ ０ ０ ２０ ５— ３ ６ ３２ １ ２ １ ）１ － ０ ２ ０
蔬 菜 食 用 ，具有 治 疗 腮 腺 炎 、烧 伤 止 痛 和 慢 性 肾 功能 衰 退 Ｊ
草 。外植体取材 实验在 ２ １ ０ ０年 ４月进 行，选择晴天上午 ８ ：
０ 集 外植 体 。外 植 体 使 用前 先 进 行 以 下预 处 理 ：先 用 自 ０采
来水冲洗数 次，吸干外植体表面的水分 ，再将其剪成 １ ２ ～
法。
（）７％酒精消毒处理 ３ ＋１ １ ５ ０Ｓ ％次氯酸钠灭菌处理 ８
ａ ｎ ｒ ｉ
（） ７％酒 精 消 毒 处理 ３ ＋２ ２ ５ ０Ｓ ％次 氯 酸钠 灭 菌 处理 ８
ｍ ｉ ｎ
１ 材 料与方 法
１ 试验 材 料 １
ｍ ｉ ｎ
（） ７％ 酒 精 消 毒 处 理 ３ ＋０Ｉ ３ ５ ０Ｓ ． ％氯化 汞 灭 菌处 理 ８
一
方法 ｌ ：确定消毒剂氯wk.baidu.com汞浓度
设计四组实验 ：第 ｌ
） ，湖南宁远 人，教授 ，博士 ，主要从 事生物学教学与研
组 实验是 ７ ％酒精消毒 ３ Ｓ ０Ｉ ５ ０ ＋ ．％氯化汞灭菌 ８ ｎ 第 ２组 ｍｉ；
实验是 ７ ％酒精消毒 ３ Ｓ ０２ ５ ０＋ ． ％氯化汞灭菌 ８ ｉ； ３组实 ａ ｒｎ 第
积 雪 草 （ ｅ ｔ ／ ａｉｔａ Ｃ ｎｅ ａ ｓ ｉ ）又称 落 得 打 、崩 大 碗 、 半边 ｌ ａ ｃ
本 试验 所 用外 植 体 采 自 自湖 南 科技 学 院校 园 野 生积 雪
钱， 为伞形积雪草属植物 ， 主要分布于 南北半球热带和 亚热 带地区 ，主产于南非、印度、斯里兰卡、马来西亚、澳 大利 亚 ，日本亦有分布…。我国仅 产 １ ，分布于江苏、浙江、 种 江西、湖北、湖南、广西、广东 、四Ｊ 、贵州和云 南等省 ， Ｉ Ｉ 积雪草多生长于 ２ ０ ０ ０米以下的山路旁 、沟边、草地等肥沃 阴湿处…。有关资料报道 ，积雪草在 民间可作为凉茶饮 用和
究。
５ ２
验是 ７％酒 精 消毒 ３ Ｓ ０６ ５ ０ ＋ ．％氯 化 汞 灭 菌 ８ ｎ 第 ４组 实验 ｍｉ； 是 ７％酒 精 消 毒 ３ Ｓ ０８ ５ ０ ＋ ．％氯化 汞 灭 菌 ８ ｎ ｍｉ。 方法 ２ ：确 定 酒精 消毒 剂 处 理 的最 佳 时 间 设 计 四组 实
幼嫩芽的顶芽作为外植体 。 些外植体来 自室外 ， 这 顶芽暴露 在空气中， 了受到空气 中的杂菌污染外 ， 除 还容易受到泥 土、 肥料中的杂菌污染 。 本研究采用不同的灭菌方法对 积雪草外 植体进行试验 ， 探讨积雪草组 织培养 中外植体的有效灭菌方
组 织 培 养 过 程 中 的 外 植 体 接 种 成 功 与 否 ， 要 取 决 主 于 外 植 体 的 选 取 和 消 毒 灭 菌 方 法 的 掌 握 Ｉ 。在 积雪 草 的 】 … 组 织 培 养 研究 中 ， 们 以 成 龄 或 幼龄 植 株 上 当年 生 的 、带有 我
水冲洗后 ，先用酒精消毒 ，再配合次氯酸钠、氯化汞等进行 灭菌。 本试验选 用 目前应用 比较普通的酒精与次氯酸钠和酒 精与氯化汞组合 ， 进行预试验比较 ， 采用单因素预试实验方 法对积雪草外植体灭菌消毒剂进行筛选ｌ 。酒精体积分数 ｌ
ｃ 的 带 有 幼嫩 顶 芽 的 茎 段 ，放 入 清洗 液 或洗 衣 粉 水 中浸 泡 ｍ
２ ｎ ｍｉ，流 水 冲洗 ２ ，备 用 。 ｈ
ｌ 试验 方法 ２
１ ． 外 植 体 灭 菌 消 毒剂 的筛 选 试 验 ．１ ２
外 植体 用 自来
等作 用 ，还具有抗肿瘤、抗结核作用 ，还被 用作 昆虫 拒食剂和美容制剂 Ｊ 。
组 实验 ，每 组 实 验均 用 的试 剂 是 ７＇酒 精 。 ５ｏ ／
基金项目： 湖南省大学生研究性学 习与创新性 实验计划
项目
作者 简介 ：于静 （９ ７ ，女，吉林长岭人 ，湖 南科 １８ 一）
技 学 院 生物 工 程专 业 ２０ ０ ７级 学 生 。 讯作 者 ： 常 健 （９ ８ 通 李 Ｉ６
（） ７％酒 精 消 毒 处 理 ３ ＋０２ ４ ５ ０Ｓ ． ％氯化 汞 灭 菌 处理 ８
ｒ ｎ ｎｉ
收 稿 日期 ：２ ｌ 一 ｌ—０ ００ ０ ６
Ｉ ． 消毒剂不 同浓度、不同处理 时间的对比试验 ２ ２ 通过外植体灭菌消毒 剂的筛选试验后 ， 了确定筛选出 为 来的消毒剂 的最佳处理时间与灭菌浓度 ， 以下方法设计三 按
第 ３卷 第 １ １ ２期
２ １年 ｌ 月 ００ ２
湖南科技学院学报
Ｖ Ｉ １ ｏ１ ０－ ． ３Ｎ ２
Ｄ Ｃ２ ｌ Ｃ ．Ｏ Ｏ
积 雪草 组 织 培养 外植 体 的灭 菌 方 法
于
摘
静
谢会兰
李光辉 田
礼
骆
鹰
李常健水
（ 南 科技 学院 生 命科 学 与 化 学 工程 系 ，湖 南 永州 ４ ５０ ） 湖 ２ １ ０
要：在单 因素预 实验 的基础上 ，采用单一变量实验设计 ，筛选 出了植物组织培养 中积雪草外植体 最佳灭菌方法 ，总
结 出酒 精 浸 泡 时 间 、氯 化 汞质 量 分数 、氯 化 汞 浸 泡 时 间 等对 积 雪草 茎 外植 体 的污 染程 度 及 成 活 率 均有 显 著 影 响 。 实验 表 明 ，
对积雪草外植体先用 ７ ％的酒精 消毒 ２０ ，再配合 ０１ ５ ｓ ． ％的氯化汞溶 液处理 ６ｒｉ，能达到理想的灭菌效果。 ｎ ａ
关键词：积 雪草；组织培 养；外植体 ；灭 菌
中图 分 类号 ：Ｑ ３ 一３ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １ ７— ２ ９ （ ０ ０ ２０ ５— ３ ６ ３２ １ ２ １ ）１ － ０ ２ ０
蔬 菜 食 用 ，具有 治 疗 腮 腺 炎 、烧 伤 止 痛 和 慢 性 肾 功能 衰 退 Ｊ
草 。外植体取材 实验在 ２ １ ０ ０年 ４月进 行，选择晴天上午 ８ ：
０ 集 外植 体 。外 植 体 使 用前 先 进 行 以 下预 处 理 ：先 用 自 ０采
来水冲洗数 次，吸干外植体表面的水分 ，再将其剪成 １ ２ ～
法。
（）７％酒精消毒处理 ３ ＋１ １ ５ ０Ｓ ％次氯酸钠灭菌处理 ８
ａ ｎ ｒ ｉ
（） ７％酒 精 消 毒 处理 ３ ＋２ ２ ５ ０Ｓ ％次 氯 酸钠 灭 菌 处理 ８
ｍ ｉ ｎ
１ 材 料与方 法
１ 试验 材 料 １
ｍ ｉ ｎ
（） ７％ 酒 精 消 毒 处 理 ３ ＋０Ｉ ３ ５ ０Ｓ ． ％氯化 汞 灭 菌处 理 ８
一
方法 ｌ ：确定消毒剂氯wk.baidu.com汞浓度
设计四组实验 ：第 ｌ
） ，湖南宁远 人，教授 ，博士 ，主要从 事生物学教学与研
组 实验是 ７ ％酒精消毒 ３ Ｓ ０Ｉ ５ ０ ＋ ．％氯化汞灭菌 ８ ｎ 第 ２组 ｍｉ；
实验是 ７ ％酒精消毒 ３ Ｓ ０２ ５ ０＋ ． ％氯化汞灭菌 ８ ｉ； ３组实 ａ ｒｎ 第
积 雪 草 （ ｅ ｔ ／ ａｉｔａ Ｃ ｎｅ ａ ｓ ｉ ）又称 落 得 打 、崩 大 碗 、 半边 ｌ ａ ｃ
本 试验 所 用外 植 体 采 自 自湖 南 科技 学 院校 园 野 生积 雪
钱， 为伞形积雪草属植物 ， 主要分布于 南北半球热带和 亚热 带地区 ，主产于南非、印度、斯里兰卡、马来西亚、澳 大利 亚 ，日本亦有分布…。我国仅 产 １ ，分布于江苏、浙江、 种 江西、湖北、湖南、广西、广东 、四Ｊ 、贵州和云 南等省 ， Ｉ Ｉ 积雪草多生长于 ２ ０ ０ ０米以下的山路旁 、沟边、草地等肥沃 阴湿处…。有关资料报道 ，积雪草在 民间可作为凉茶饮 用和
究。
５ ２
验是 ７％酒 精 消毒 ３ Ｓ ０６ ５ ０ ＋ ．％氯 化 汞 灭 菌 ８ ｎ 第 ４组 实验 ｍｉ； 是 ７％酒 精 消 毒 ３ Ｓ ０８ ５ ０ ＋ ．％氯化 汞 灭 菌 ８ ｎ ｍｉ。 方法 ２ ：确 定 酒精 消毒 剂 处 理 的最 佳 时 间 设 计 四组 实