有关物质方法学研究

有关物质方法学研究

● 主要内容

1、有关物质检查方法建立的研发思路

2、有关物质方法的建立和方法学验证

2.1、原料药和制剂的相关理化性质

2.2、有关物质分析方法的选择

2.3、有关物质分析方法的验证

2.4、有关物质杂质的定量方法

3、有关物质杂质的分析

4、有关物质杂质限度的制订

有关物质检查方法建立的研发思路

● 研发思路：有关物质检测方法的建立重点是测定方法的先进性、准确性、可行性。

● ⑴首先有关物质的方法选择，对于仿制药有EP、BP、USP等质量标准的药品，首选以

上的色谱条件进行筛选，尤其关注的离子对试剂的使用。

● ⑵选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等度测定的，方法二最好选用梯度色

谱条件，比较两种方法测定结果的杂质个数及杂质含量等。确证有关物质测定方法的准确性。

● ⑶对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同检测方法的优劣，选择较好的色谱

条件作为本品有关物质检查的测定方法。

● ⑷对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行全面的质量比较，分析其杂质的种

类和含量，确保自制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。

● 原料药和制剂的相关理化性质

● 在建立有关物质检查方法前，需首先了解原料药和制剂的相关理化性质。

● ⑴对于原料药，了解原料药的基本性质和结构特点。了解原料药合成工艺过程中的起始

原料、副产物、副产物产生的杂质、中间产物或可能产生的降解产物等。结合相关已知的杂质来确定有关物质检测的条件。

● ⑵对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存储条件等，主要了解

辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在不同存贮条件下可能产生的杂质等。对于复方制剂，同时要考虑到复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。

● 有关物质分析方法的选择

● 有机杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及降解产物的不同采

用不同的检测方法。通过合适的分析技术将不同结构的杂质进行分离、检测，从而达到对杂质的有效控制。目前普遍采用的杂质检测方法主要有：

● ⑴高效液相色谱法（HPLC）目前采用的分析方法主要以高效液相色谱法为主，为常用

的分析方法。选择不同的色谱柱对杂质进行有效的分离。

● ⑵薄层色谱法(TLC) 是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重

要的实验技术，但准确性较低。

● ⑶气相色谱法(GC) 气相色谱法主要是用于能气化的物质的检测和分离。一般用于有

机残留溶剂的检测和分离。也可用于一些能挥发的杂质的检测。

● ⑷毛细管电泳法（CE）毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电

场为驱动力，依据样品中各组分的淌度和（或）分配行为的差异而实现各组分分离的一

种分析方法。其应用比较广泛，但该方法测定精密度不高，专属性不稳定，且CE仪器价格较高。

● 由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在进行杂质分析时，应注意不同原理的分

析方法间的相互补充与验证，如HPLC与TLC及HPLC与CE的互相补充，反相HPLC 系统与正相HPLC系统的相互补充，HPLC不同检测器检测结果的相互补充等。

● 有关物质分析方法的验证

● ①检测波长的选择

● 有关物质检测波长是结合主成分与杂质的最大吸收波长进行选择。

● 测定方法：分别称取待测供试品、对照品、空白辅料、市售对照样品适量，用流动相溶

解并稀释到一定浓度，配制成对照品溶液、供试品溶液以及空白辅料溶液，分别于采用HPLC法测定，采用DAD检测器进行，确定待测物质中各杂质的最大吸收波长、主峰的最大吸收波长以及空白辅料的干扰情况等，有杂质对照品的同时进行扫描，或HPLC 进行测定。必要时可将供试品溶液适当破坏后测定各降解产物的最大吸收波长。

● 判断结果：根据测定结果确定有关物质测定的检测波长。

● 有关物质分析方法的验证

● ②专属性试验

● 专属性系指在其它成分可能共存的情况下，采用的方法能准确测定出被测杂质的特性

● ⑴对于原料药，可根据其合成工艺，采用各步反应的中间体（尤其是后几步反应的中间

体）、立体异构体、粗品、重结晶母液等作为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求，从而验证分析方法对工艺杂质的分离能力。

● ⑵根据药物的化学结构特点、制剂的处方与工艺、储存条件等选用合适的酸、碱、光、

热、湿、氧化反应等加速破坏性试验来验证分析方法的专属性。

● ⑶强制降解试验在试验过程中，应注意破坏性试验要适度，应着重考察敏感条件。如在

一定条件下稳定，则无必要再提高条件的剧烈程度进行重复试验。破坏试验的程度暂无统一要求，一般以强力破坏后主成分的含量仍占绝大部分为宜。要达到这种破坏程度，需要在研究过程中进行摸索，先通过初步试验了解样品对光、热、湿、酸、碱、氧化条件的基本稳定情况，然后进一步调整破坏性试验条件（如光照强度、酸碱浓度、破坏的时间、温度等），以得到能充分反映降解产物与主成分分离的结果和图谱。

● 有关物质分析方法的验证

● ③检测限与定量限

● 检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，是反映分析方法灵敏度的一个重

要指标；最低检测限不得大于该杂质的报告限度，以保证检出需控制的杂质。

● 测定方法：取待测物质对照品适量，加流动相配制成一点浓度的对照品溶液，按倍倍稀

释法，以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。同时将信噪比为3：1的样品溶液进样6针，以峰面积计算相对标准偏差。

● 判断结果：最小检测限浓度下样品峰面积的相对标准偏差应≤20%，以最小检测限来确

定供试品溶液配制的浓度作为依据。

● 定量限是指被测杂质能够被定量测定的最低量。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的

定量检测能力。杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确测出。