大分子物质水解实验

实验八 大分子物质（淀粉）水解实验

郑州大学生物工程系微生物实验

一、目的要求

1、了解不同细菌对含碳及含氮化合物的分解和利用情况，认识微生物代谢类型的多样性

2、掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法。

二、基本原理

微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，表现在对生物大分子糖类和蛋白质分解能力以及最终代谢产物的不同，反映出它们具有不同的酶系。微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。

有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。本实验安排微生物对生物大分子的分解利用（淀粉水解实验），让同学们对微生物的代谢类型多样性有一个初步和感性的了解，同时学习利用微生物形态、结构以及生化反应的特征对某些细菌进行初步的分类。

三、实验材料

1、菌种

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌。

2、培养基

淀粉水解培养基：蛋白胨10 g，氯化钠5 g，牛肉膏5 g，可溶性淀粉2 g，水1000mL，琼脂15-20 g,121 ℃灭菌20 min

3、接种用具

平皿，试管，移液管，接种环，酒精灯，打火机，废物杯，油性笔。

4、试剂

卢哥氏碘液

四、实验步骤

（1）配制固体淀粉培养基，灭菌冷却至50℃左右，无菌操作制备平板

（2）翻转平板使底皿背面向上，用油性笔在其背面玻璃上划线均分为三个部分。

（3）在平板底部三个区域分别标注三种供试菌株名称，并用接种环以划线方式在三个区域分别接上菌种。

（4）将接完种的平板倒置于37℃恒温培养箱，培养24h。

（5）观察结果时，可打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，是碘液均匀铺满整个平板。

如菌苔周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以 “+”、“—”表示有无透明圈）

五、实验报告

记录试验菌种对淀粉水解的结果。以“＋”表示阳性，“－”表示阴性。

六、思考题

不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？

实验九 抗生素及化学试剂对微生物生长的影响（滤纸片法）

一、实验目的：

1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响

2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法

二、实验原理

许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材

菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌斜面菌种。

培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液

仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）

（1）菌液制备：无菌操作将金黄色葡萄球菌菌接种至装有5mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）

（3）涂平板：无菌操作吸取0.2mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平板，用无菌涂布棒涂布均匀。

（4）标记：将上述平板皿底用记号笔分成4等分，分别标明一种药敏片的名称。

（5） 贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入各种消毒剂（生理盐水，青霉素，链霉素，结晶紫）在容器内壁沥去多余液体，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置，在平板中央贴上仅有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。（不要在培养基表面拖动滤纸片）

（6）培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养24 h，观察并记录抑（杀）菌圈大小

五、实验报告

取出培养平皿，观察滤纸征周围有无抑菌圈产生，并测量抑菌圈的大小。将测量结果填入下表中供试药敏片金黄色葡萄球菌/mm 大肠杆菌/mm

生理盐水

青霉素

链霉素

结晶紫