药物分析--吩噻嗪类含量测定

四、液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用技术集HPLC的高分离效能和 MS的高专属性及高灵敏度于一体，已经成为目前测 定复杂生物样本中微量药物的首选方法，同时也是 进行药物及有关物质定性分析的常用方法。
色谱图：
图11-4 血浆中7种抗抑郁类和5种抗精神病类药物的LC-MS/MS检测典型色谱图
（二）乙醇水溶液的氢氧化钠滴定法
• 本类药物的盐酸盐的水溶液显酸性，在乙醇
-水溶液中，可用NaOH滴定剂滴定，电位法指示滴 定终点。
等当点
突跃体积
NaOH HCl NaCl H2 0
V1
B.HCl NaOH B NaCl H2 0
V2
滴定体积△V= V1-V2
二、分光光度法
碱性溶液pKb>10，冰醋 酸中滴定突跃不明显，
需加入醋酐，使碱性增
强，突跃更明显
2.一般方法
＊ 供试品：以消耗标准液体积计算 ＊ 溶剂： HAc，一般用量10~30ml ＊ 滴定剂：0.1mol/L HClO4 无水HAc溶液 ＊ 指示剂：电位法
3. HClO4在冰醋酸溶液中，具强氧化性，可氧化吩噻 嗪类药物产生红色的氧化物，干扰指示剂终点的 观察。排除方法：
1.五氟利多；2.匹莫奇特；3.氯普噻吨；4.硫利达嗪；5.三氟拉嗪；6.阿 米替林；7.氯米帕明；8.氟西汀；9.丙米嗪；10.马普替林；11.地昔帕明； 12.舍曲林；IS.还阳酚
（二）离子对高效液相色谱法(Ion-RP-HPLC)
常用的离子对试剂：烷基磺酸盐阴离子对试剂， 如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷磺酸钠等。
BH++C7H15SO2O- pH3.5 [BH+C7H15SO2O-]
影响离子对形成的条件
反离子的性质与浓度 流动相的组成 pH 离子强度等
影响待测组分的保留
而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。
【示例11-37】
盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 （ USP32-NF27）
测定波长： 254nm（最大吸收波长） 277nm（等吸收波长）
空白对照液：0.1mol/L盐酸溶液
计算公式： 12.5C(A254 A277 )U /V (A254 A277 )S
（一）直接分光光度法
在254nm的波长处，C17H19ClN2S.HCl的吸收系数
（
E1% 1cm
）为915计算。
（二）提取后分光光度法-排除辅料干扰
【示例11-36】盐酸氯丙嗪口服液USP32-NF27
量取盐酸氯丙嗪适量Vml 氨水碱化氯丙嗪 三氯甲烷提取6次 合并三氯甲烷提取液 蒸气浴浓缩提取液至5～10ml 空气流蒸干
A=(E11%cm(1 )

E1% 1cm(2
)
)C
x
l
Cx

Ax
(E E ) 1% 1cm(1 )
1% 1cm(2 )

A
(
A 254 Cs

A 277 Cs
)s
Cx

(A254 (A254
A277 )x A277 )s
Cs
D=500 250 =12500 10
含量（mg
式中：C(mg/ml)为对照品溶液的浓度； V(ml)为所取供试品的体积； 括号内的公式分别为供试品溶液(U)和对照
品溶液(S)在下标所示波长处的吸光度差。
A254 =E11c%m(254)Csl
A 1% E = C 1cm(254)
254 ( s ) s
A 1% E = C 1cm(277)
277(s) s
对照品0.124mg/ml
含量（mg
/
ml）=50
Ax As
Cs
三、高效液相色谱法
（一）反相高效液相色谱法(RP-HPLC)
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相：水－甲醇或水－乙腈系统，极性较强
极性较强的组分在分离时先流出柱子，极性较 弱的组分后流出柱子，适合于共存组分极性差异较 大样品的分析。杂环类药物分析一般在流动相中加 入含氮碱性竞争试剂(扫尾剂:醋酸铵、三乙胺、二乙 胺、乙腈等),以抑制碱性药物与未硅烷化的硅醇基作 用。
/
ml）=
12500 V 1000

(A254 (A254

A277 )x A277 )s
Cs
（五）钯离子比色法
吩噻嗪类药物在pH 2±0.1的缓冲溶液中，与 钯离子(Pd2+)形成红色配合物，在500nm波长附近 具有最大吸收
由于钯离子仅与未被氧化的硫元素配合显色， 消除了药物中氧化物对测定的干扰。
BH+A- + HClO4
BH+ClO4 + HA
游离碱类盐
被置换出的弱酸
当HA酸性较强时，反应不能定量 完成，必须除去或降低HA的酸性， 使反应顺利地完成。
因此，要根据不同情况采用相应测定条件。
HClO4滴定
供
冰
试+醋
品
酸
结 指示剂 果
空白试 验校正
10ml~30ml
若供试品为氢卤酸 盐再加5%醋酸汞的 冰醋酸液3ml~5ml
定量依据
样品在二波长下吸收度差值（A）：
A

Aab 1

Aab 2

(
Aa 1

Ab 1
)

(
Aa 2

Ab 2
)

Aa 1

Aa 2
( 1
2 )Cal
=(E11%cm(1 )

E1% 1cm(2
)
)Ca
l
Ab 1

Ab 2
A Ca
即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，
比色液的浓度：50 ~ 250 g/mL 显色稳定性：10分钟后可稳定约2小时
【示例11-38】盐酸异丙嗪注射液USP32-NF27
精密称取适量置 分液漏斗
依次加氯化钾 氢氧化钠碱化 甲醇
正庚烷提 取3次
合并正庚 烷提取液
盐酸酸化
合并盐酸提取液 并定容至50ml
称取标准品和对照品溶液各2ml +PdCl2显色，测A470
第十一章 吩噻嗪类抗精神病药 物的分析
第四节 含 量 测 定
• 性质：弱碱性、紫外光吸收特性、金属离 子配合呈色
• 测定方法：酸碱滴定法、分光光度法、高 效液相色谱法和液相色谱-质谱联用技术
一、酸碱滴定法
(一)非水溶液滴定法
结构：母核上10位取代基的烃胺-NR2、哌嗪基及哌
啶基具有碱性
1. HClO4非水溶液滴定法基本原理
Kb＜10-12时，应用醋酐作为溶剂。 冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著
增大。
【示例11-31】盐酸氯丙嗪测定ChP（2010）
取本品约0.2g ，精密称定，加冰醋酸10ml与醋 酐30ml，溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴 定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试 验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于 35.53mg 的C17H19N2ClS.HCl。
【示例11-32】盐酸氯丙嗪注射液测定JP（15） • 提取后HClO4非水滴定法：
取本品约0.15g置
乙醚提取6次，合并
分液漏斗,加氨水碱化
水浴加热挥干乙醚 HClO4非水滴定法
残渣
丙酮溶解 溴甲酚绿-结晶紫指示液
紫红色→蓝紫色
每1ml高氯酸滴定液(0.05mol/L)相当于17.77mg 的 C17H19N2ClS.HCl。
（1）改用中性溶剂 （2）加抗坏血酸 （3）电位法指示终点
Baidu Nhomakorabea
4、适用范围
主要用于Kb＜10-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较 弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终
点指示的方法，可使pKb为8～13的弱碱性药物采用本 法滴定。
Kb为10-8～10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂； Kb为10-10～10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶 液；
H2SO4溶解定容 硫酸氯丙嗪 max =298测定A。
对照品：50 g / ml 同法测定As。
c(mg / ml) 500 cs Ax V As
萃取→除去抗氧剂的干扰
（三）提取后双波长分光光度法
提取后分光光度法能够除去一些干扰物 质，但却不能除去吩噻嗪类药物的氧化物。 提取时，氧化物随游离碱进入有机相；测定 时，因结构相近，氧化物在吩噻嗪类药物的 测定波长处产生吸收，干扰测定。