纸色谱与薄层色谱法

• （3） 展开：广口瓶需预先用展开剂（9：1 的环己烷-乙酸乙酯）饱和，将点好样品的 薄层板放入装有展开剂的广口瓶中，薄层 板浸入展开剂的深度为距薄层板底边约 0.7cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封 室盖，等展开至规定距离（距薄层板上端 小于1cm左右），取出薄层板，尽快划一横 线，晾干，测出显色点与起始线的距离和 溶剂上升的距离，并计算比移值。
装置图
薄层色谱
纸色谱
五. 注意事项
• 1.薄层板制备好之后，一定要进行活化，除去水分； • 2.点样时要注意样点直径要不超过2mm。点几个样点时间 隔应1-1.5㎝。一次点样若不够，可点几次，但要等溶剂 挥发后再点下一次，防止量多出现拖尾现象； • 3.所用滤纸应质地均匀平整 且实验中手不要触及滤纸的表 面，以免污染； • 4.避免两条滤纸在大试管中碰一起，切勿将样点浸入展开 剂中； • 5.若溶质展开后较分散,则选取其最高浓度中心； • 6.在向滤纸喷洒茚三酮时，要以雾状喷洒，不能有液滴在 其表面凝集，更不能有液滴在其表面流动，以免影响展开 效果.
(2) 薄层色谱
薄层色谱常用TLC表示，按其作用机理可以 分为吸附薄层层析、分配薄层层析等。 基本原理是当待分离的混合物随溶媒（流动 相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在 差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合 等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比） 不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两 相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组 份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移 动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组 份，向前移动速度越慢。因而样品中所含的各单 一组份，可以达到分离的目的。
四．操作步骤
（一）、薄层色谱 偶氮苯和苏丹III的分离
（1）、薄层板制备：将硅胶G和CMC溶液调成均匀 的糊状，用滴管涂于洁净的载玻片上，取下涂好 薄层板，置水平桌面上于室温下晾干，在110℃ 烘60分钟。置于干燥器中留以备用。 （2）、点样：距底边1cm处划一横线作为起始线， 点样直径不应超过2mm，点间距离约为1 cm，点 样时必须注意勿损伤薄层表面。样品溶液的含水 量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散 大，像降落伞。取三块分别点样试剂为偶氮苯和 混合液，混合液和苏丹III，偶氮苯和苏丹III
（二） 纸色谱--氨基酸的纸上层析
• （1）取两片新华一号滤纸，分别用铅笔在距下端点约 1cm处起始线，用直尺从中间折叠，在左右两侧点样距约 1.5cm，试剂分别为亮氨酸和混合液，甘氨酸和混合液.展 开剂为5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸（6-8ml）展开剂（上 层）在2/15cm的大试管中。 • （2）待展开剂上升约7厘米时，取出作终点线后在烘箱中 烘干。 • （3）干燥后喷上0.2%的茚三酮乙醇溶液，烘箱中烘干后 显色。 • （4）取一块薄层板分别点样亮氨酸和甘氨酸，用展开剂 为5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸展开。（选做） • （5）测出显色点与起始线的距离和展开剂上升距离，并 计算比移值。
纸色谱与薄层色谱法
一.实验目的
1.了解用色谱法定性分析及提纯化合物的原 理； 2.熟悉并掌握薄层色谱及纸色谱的基本操作。
二.实验原理
(1) 色谱法 色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在 某一物质中的吸附或溶解性能(分配)的不同，或 其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质, 进行反复的吸附或分配的作用,从而使各组分分离。 流动的混合物溶液称Fra Baidu bibliotek流动相；固定的物质 称为固定相。 根据分离的原理不同,可分为吸附色谱、分配 色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等， 根据操作条件的不同，又可分为柱色谱、纸色谱、 薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等类型。
六.思考题
• 1. 如何利用Rf值来鉴定化合物? • 2. 在混合物薄层色谱中,如何判定各组分在 薄层上的位置? • 3. 展开剂的高度若超过了点样线,对薄层色 谱有何影响? • 4. 纸上层析属于吸附色谱还是分配色谱?
• 薄层层析的优点：适用于小量样品（几到 几十微克）的分离又可用来精制样品，特 别适用于挥发性较小或较高温度易发生变 化而不能用气相色谱分析的物质。
(3) 纸色谱
纸色谱主要用于多功能团或高极性化合物的 分析和分离。 • 基本原理是以纸为载体，以纸上所含水分或 其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色 谱。供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组 成成分的位置，但由于影响比移值的因素较多， 因而一般采用在相同实验条件下与对照物质对比 以确定其异同。作为药品的鉴别时，供试品在色 谱中所显主斑点的颜色（或荧光）与位置，应与 对照品在色谱中所显的主斑点相同。
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• Rf=溶质最高浓度中心至原点中心距离/溶剂 前沿至原点中心的距离
三.实验试剂和仪器
• 甘氨酸、亮氨酸的水溶液，两种氨基酸各取等体 积组成混合液，展开剂为5：4：1的水-正丁醇-冰 醋酸（体积比），0.2%的茚三酮乙醇溶液。大试 管一支，滤纸（2*15cm）,喷雾器一支，电吹风 一把，毛细管（口径1mm）若干支，直尺一把， 铅笔一支 • 1%偶氮苯的苯溶液，1%苏丹III的苯溶液，1%的 羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ）的水溶液，硅胶Ｇ，9： 1的环己烷-乙酸乙酯。研钵一个，电子天平，载 玻片（7.5*2.5cm）5片，烘箱，广口瓶一个。