厌氧芽胞梭菌标本的制作
厌氧菌培养与鉴定技术
ANAEROBIC/HYPOXEMIC WORKSTATION历史：所有这些罐子，其培养皿/样本操作均在有氧环境中进行，而仅在培养时才置于厌氧环境中。
ELECTROTEKELECTROTEK完善的厌氧培养技术始于适当的样本采集和运输。
适当地采集试样，并快速置于厌氧运输小瓶中ELECTROTEK厌氧罐由于不能提供操作过程的厌氧环境，并且因容量的限制而无法实现灵活的样本厌氧培养，故其应用也越来越受到限制。
一台允许所有操作与培养综合功能的厌氧工作站使厌氧菌实验避免了氧气暴露的风险。
因不当的制备或贮存，使培养介质含有氧气或氧化性物质，最终将抑制厌氧菌的生长。
任何时候都应当使用经预还原处理的厌氧培养介质。
ELECTROTEK专性厌氧菌培养最好是在经预还原处理且厌氧灭菌的培养基上（PRAS培养基）。
养肉汤。
预还原是指氧气通过培养基组分物质化学移除。
ELECTROTEK以下为常见的主要用于临床标本厌氧菌分离的培养基：1、布鲁氏菌血琼脂2、卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB琼脂）3、拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE琼脂）4、苯乙醇琼脂（PEA琼脂）5、硫乙醇酸钠肉汤ELECTROTEKELECTROTEK布鲁氏菌血琼脂：含有血细胞允许溶血试验，可使特定微生物快速生长非选择性培养基，所有厌氧菌均能很好生长同样，疾病预防控制中心的厌氧菌血琼脂也可被使用。
ELECTROTEK卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB ）：革兰氏阴性厌氧杆菌选择性培养基。
绝大多数的革兰氏阴性兼性厌氧杆菌被卡那霉素抑制，绝大多数革兰氏阳性菌被万古霉素抑制。
产色厌氧菌（如普雷沃菌属和卟啉单胞菌属）在KVLB 琼脂上产生许多色素。
ELECTROTEK 拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE ）：绝大多数厌氧菌被庆大霉素和胆汁抑制，只有脆弱拟杆菌群作为唯一的厌氧菌能在此琼脂上快速生长。
当细菌（如脆弱拟杆菌群）分解七叶甙而生长于此琼脂上时，将显现深棕色反应。
ELECTROTEK苯乙醇琼脂（PEA ）：该介质支持绝大多数专性厌氧菌生长且抑制兼性厌氧菌生长（如肠杆菌科），专性厌氧菌可呈弥漫性或过度生长。
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
厌氧培养装置
厌氧手套箱：价格昂贵、操作时间长、气体消耗 大、不易推广
厌氧盒+厌氧气袋：应用最普遍、简便 或厌氧罐+厌氧气袋：方便实用
厌氧罐抽气换气法：需配置抽气换气装置 第二代厌氧气体发生剂不需加水、不需触酶
1.除去表面陈旧的脓和分泌物,从深处吸出 或刮取标本.
2.首先接种在厌氧培养基,立即置厌氧盒或 厌氧罐内,同时撕开并放入产气袋,放指示剂, 立即盖好盖或封好厌氧袋口.
3.剩余部分标本种需氧培养基 4.剩余最后标本作涂片两张 5到达实验室后，将已接种需氧和厌氧的培
养皿置35度培养
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
（6）穿刺抽出的腹腔液。 （7）通过腰椎穿刺抽出的脑脊液。 （8）窦道标本可插入小导管用注射器 吸出，注射器和针头内的气体应全部排 出，将其内容物直接注入一个已排出气 的无菌试管内。也可自窦道损伤部位取 材做活组织检查。
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
3.床边采集标本的步骤
临床细菌室厌氧菌培养基本程序
需做厌氧血培养的高危人群
肠脓毒症、女性生殖道感染、褥疮及呼吸道感染患 者
ICU患者或近期做过腹部外科手术的患者 严重烧伤和外伤患者 伴有严重心血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤、移植和
免疫抑制患者 老年患者 临床高度怀疑有厌氧菌感染的患者
绝大多数住院患者需要做厌氧血培养
厌氧气袋 厌氧盒或厌氧罐
北京医院细菌室采用方式
生产厂商
厌氧袋试验合，内含气体发生器
及指示剂共20套(45534)
AYL-S7-349 厌氧菌属检验标准操作规程3.0
1．概述厌氧菌广泛存在于外界环境和人体的口腔、肠道和女性生殖道等部位，常引起内源性感染。
据文献报道，约60％的临床感染有厌氧菌参与，且大多数是与需氧菌混合感染，故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
2．标本类型脓胸及未破溃的脓肿、肺分泌物、血液标本、窦道、深部脓肿等的标本。
3．检验流程3.1 形态与染色标本涂片、革兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，并估计标本中大致的含菌量，可用“少量”“十”“++”“+++”“++++”表示。
镜检不仅能反映各种厌氧菌特殊形态，同时也能为鉴定厌氧菌提供参考和依据。
如脆弱拟杆菌菌体细长，两端尖；韦荣球菌是极小的革兰阴性球菌。
同时厌氧菌芽胞的位置、形态、大小对鉴定很有意义，必要时作芽胞形成试验。
例如，芽胞在菌体极端且大于菌体呈鼓槌状，是破伤风梭菌的特征。
根据厌氧菌的特殊形态，可初步确定有无厌氧菌感染，及时向临床医师发出一级报告，建议采用哪类药物。
3.2 培养特性一般标本接种3个血琼脂平板，分别放置于有氧、无氧和含5％～10％C0环境中培养。
如果只要求检出厌氧菌，只需接种1个厌氧血琼脂平板，也可增2加1个相应的选择厌氧血琼脂平板。
为便于在混合培养中及早发现厌氧菌，一般将标本分3段划线接种，在第1和第2段交界处贴1张甲硝唑(5 mg/片)纸片，若出现隐约抑菌圈，则提示有厌氧菌生长。
不同厌氧菌的生长速度和菌落形态各异，色素也有不同，荧光产生与否也有助于鉴定，根据上述特征，可初步推测厌氧菌的种类。
3.2.1 革兰阴性杆菌在BBE琼脂平板上有灰黑色、直径>1 mm的菌落，菌落周围有黑色的晕，可初步鉴定为脆弱拟杆菌。
在卡那万古溶血琼脂平板上，有棕色或黑色菌落，或用伍德灯照射有砖红色荧光者，为产黑素普雷沃菌。
菌落沉人琼脂内，使培养基表面留有小坑者，可能是解脲拟杆菌和纤细拟杆菌。
菌落表面有小斑点，或如面包屑，结合涂片所见，可初步鉴定为具核梭杆菌。
3.2.2 革兰阴性球菌菌体很小，排列成双、短链或小堆，菌落小，不透明，可能是小韦荣球菌。
厌氧菌培养标本处理标准操作程序
厌氧菌培养标本处理标准操作程序1 检验目的检测是否为厌氧菌感染。
2 原始样本要求各类标本。
3 采样容器厌氧菌运送培养拭子、血培养瓶。
4 试剂革兰染液、厌氧发生袋。
5 检验程序5.1 标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、无菌体液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜，将取样刷剪下，可放入运送培养基或床边接种。
已破溃脓肿，用无菌拭子擦去表面脓液，取深部分泌物。
5.2 标本运送和处理a) 血、脑脊液和腹水标本可注入厌氧血培养瓶，在血培养仪中直接进行培养。
b) 如临床有要求，也可床边接种。
不能床边接种的标本，用运送培养基送检。
c) 标本送达实验室后，立即接种相应培养基，放入厌氧袋内进行培养，同时应放入氧消耗剂和厌氧指示卡，迅速密封培养。
5.3. 阳性处理若怀疑有厌氧菌生长，将接种于厌氧袋内的血琼脂平板上的菌落或生长于硫乙醇酸钠肉汤管底的菌或厌氧瓶内的菌涂片后革兰染色，初步分成革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌和革兰阳性杆菌。
5.4 耐氧试验厌氧环境培养 48 小时后，将可疑菌接种于两个血平板，分别放入有氧、无氧环境中培养 48 小时，如都能生长为兼性厌氧菌；如有氧环境不生长，而在无氧环境生长则为专性厌氧菌。
5.5 初步分群5.5.1 菌落形态对菌落的大小、形态、颜色、有无斑点、透明与否、是否为黏液样菌落进行分类。
5.5.2 色素产黑素拟杆菌-不解糖拟杆菌群孵育 2～10 天可产生黄褐色至黑色色素；龋齿放线菌在室温孵育 3～4 天后产生粉红色菌落；内氏放线菌延长孵育时间可产生黄褐色色素。
5.5.3 溶血产气荚膜梭菌在血平板上形成双溶血环，许多梭杆菌在空气中暴露30min 后菌落周围变绿色。
5.5.4 荧光产黑素拟杆菌、不解糖拟杆菌或韦荣球菌发生红色荧光，梭杆菌常发生黄绿色荧光，艰难梭菌发生绿色荧光。
5.5.5 触酶厌氧革兰阴性杆菌中大部分脆弱拟杆菌、多形拟杆菌、吉氏拟杆菌和腐败拟杆菌触酶阳性；梭菌属、双歧杆菌属、乳杆菌属和消化链球菌属触酶阳性；消化球菌属中某些菌株和丙酸杆菌触酶阳性，真杆菌亦可能为阳性。
制作微生物标本的步骤
制作微生物标本的步骤
制作微生物标本是一个非常重要的过程，它可以帮助科研人员对微生物进行观察和研究。
以下是制作微生物标本的一般步骤：
1. 样品采集，首先，需要准备好要观察的微生物样品。
这可能涉及到从环境中采集样品，或者从培养基中得到纯培养的微生物。
2. 固定，接下来，需要将微生物固定在载玻片或其他适当的基材上。
这通常涉及使用化学物质（如甲醛或乙醇）来固定微生物的结构，以便在后续的染色和观察过程中保持其形态完整。
3. 染色，染色是制作微生物标本中的关键步骤。
常用的染色方法包括革兰氏染色、吉姆萨染色和折射率染色等。
这些染色方法可以帮助突出微生物的特定结构或细胞器，并使其在显微镜下更易于观察。
4. 封片，一旦微生物标本制备完成，需要使用透明的封片液将载玻片封好，以保护标本并避免其干燥或受到外界污染。
5. 观察，最后，制作好的微生物标本可以通过光学显微镜或电
子显微镜进行观察。
科研人员可以通过观察微生物的形态、结构和特征来进行进一步的研究和分析。
总的来说，制作微生物标本是一个需要细致操作和谨慎处理的过程。
每一个步骤都需要严格控制，以确保最终的标本能够真实地反映微生物的形态和结构特征，为后续的研究工作提供可靠的数据支持。
厌氧培养简介标本采集和运送和鉴定
钢末法：将钢丝绒、钢末浸入酸性硫酸铜
溶液中，其表面形成一层金属铜，这种铜 铁结合物极易吸收氧而被氧化。使罐内无 氧。 以上有指示剂美蓝，无氧为白色，有 氧为蓝色。
气袋法：其原理与厌氧罐雷同。
厌氧手套箱法：是一种特制的操作培
养箱 其它培养法：在一些基层单位，缺乏 特殊仪器设备，提供一些简易方法。如平 皿焦性没食子酸法、生物耗氧法、疱肉培 基法、液体培养法、高层琼脂培养法。 大多厌氧菌初代培时间长，至少48hr.放 线菌72~96hr。
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•
临床意义
由厌氧菌感染在人类感染疾病中占相 当大的比例，如脑脓肿，牙周脓肿，口腔 脓肿80%以上由厌氧菌引起，可以是单独， 也可与兼性厌氧菌或需氧菌混合感染。
•
（一）厌氧菌感染的条件 • 组织缺氧或氧化还原电势降低均可造成 厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易遭受厌氧菌 感染，原因很多，如局部组织供血障碍，见 于血管损伤，肿瘤压迫，烧伤，动脉硬化， 组织水肿，梗死，有异物。大面积烧伤，刺 伤亦可。
在正常情况下厌氧菌可寄生于皮肤和粘膜 ，不一定是真正的致病菌，下列标本无送检价 值，不宜做厌氧培养： （1）鼻咽拭子 （2）齿龈拭子 （3）痰和 气管抽取物 （4）胃和肠道内容物，肛拭 （5）接近皮肤和黏膜分泌物 等。
经皮肤粘膜采集标本时，局部消毒，多 使用针管抽取，减少与空气接触的机会，抽取 时穿刺针头应消毒刺入病变部位，一般抽 3~4ml,若病变液体少，先抽取还原液或还原肉 汤注入病变部位，再抽取。
性感染，造成局部组织氧化还原电势降低，
细菌繁殖产生毒素，细菌本身不侵入血流。 该毒素对脊髓前角运动细胞有高度的亲和力
，与神经节苷脂结合，封闭了脊髓抑制触突
，从而阻止了抑制性触突未端释放抑制性冲
厌氧菌培养标本采集程序
厌氧菌培养标本采集程序1.概述：厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床各科，人体的各个部位。
各种器官和组织都可以发生厌氧菌感染，大部分是与需氧菌混合感染。
故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
常规细菌培养阴性，很有可能是厌氧菌感染。
即使常规细菌培养阳性，也不能排除厌氧菌混合感染的可能性。
2.目的：规范厌氧菌标本采集程序，以保证厌氧菌标本的正确采集方法。
3.范围：临床医务人员。
4.程序：4.1厌氧菌感染指征4.1.1感染的局部产生气体：这是厌氧菌感染的重要特征。
大多数厌氧菌都能在感染的局部产生气体，产气荚膜梭菌可造成局部组织的气性坏疽。
胸膜腔可有大量气体，皮下有捻发音。
4.1.2分泌物呈恶臭气味，或为暗红色，并在紫色光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。
发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普雷沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染.4.1.3发生在粘膜附近的感染：口、鼻、咽、消化道及女性生殖道等粘膜寄生着大量厌氧菌，这些部位有破损或炎症时，容易引起厌氧菌感染，并可进一步侵入血流，引起菌血症或深部脓肿。
4.1.4常规血培养阴性的细菌性心内膜炎，并发脓毒症血栓性静脉炎，伴有黄疸的菌血症等，应考虑可能有厌氧菌感染。
4.1.5长期使用氨基糖苷类抗菌药物无效的病例，可能有厌氧菌感染。
4.1.6深部外伤如枪伤后，人被动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。
4.1.7最近有流产史，以及胃肠手术后发生的感染。
4.1.8标本直接涂片细菌染色不均，镜检可见细菌,需氧培养无细菌生长。
4.2．标本采集：标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。
标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下。
4.2.1肺部：肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜，带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管，将取样刷剪下，可放入运送培养基或床边直接接种。
厌氧菌操作流程
厌氧菌培养操作规程第一部分 标本采集和运送有厌氧菌感染指征时，需进行微生物学诊断。
而标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。
要求标本绝对不能被正常菌群所污染。
采集时尽量避免接触空气。
临床在进行厌氧菌培养前还应与实验室联系，做好接种培养的准备，进行床边接种或采用输送培养基。
一、标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下：1、肺部 肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜。
带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管。
将取样刷剪下。
可放入运送培养基或床边直接接种。
2、胸腔 直接胸腔穿刺。
3、尿道 耻骨联合上方经皮肤穿刺膀胱抽尿。
4、脓肿 封闭性脓肿用无菌空针抽取。
如已破溃，用无菌棉拭子擦去表面脓液。
取深部分泌物。
5、女性生殖道 消毒阴道从后穹隆穿刺，取脓液。
若取子宫分泌物则用无菌导管抽取，导管外套以一个保护膜套管，插入子宫后才戳穿保护膜套管，在子宫内取标本。
6、窦道或深部伤口 用空针连着导管，尽可能深入抽取。
伤口底部、边缘和窦道壁上刮下来的组织也是很好的标本，更能反映感染的细菌。
若标本量太少，可适当加少量无菌盐水，冲洗后再吸出。
7、血液标本 毛囊和皮脂腺深部的丙酸杆菌易造成污染。
用碘酊消毒后必须等一定时间，不要立即抽血。
其它注意事项：必须通过用于厌氧菌正常栖居地才能取到的标本，如痰、支气管镜采样（无特殊保护套）、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养，粪便标本厌氧菌培养．只能做难辨梭菌及肉毒杆菌的培养。
在无条件床边采样时，尽快将空针中的气体排尽，用消毒空针抽取厌氧培养标本，将针头插入无菌像皮塞。
必须用棉拭子采集的标本．可立即做床旁接种或插入运送培养基中送细菌室培养二、标本运送1、标本送入厌氧运送装置后，应尽快送到实验室，最迟不超过6小时。
厌氧菌检验 微生物学实验
实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。
2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。
二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。
2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。
2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。
2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。
3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。
三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。
位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。
破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。
六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。
最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。
4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。
标本中厌氧菌的检验流程
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标本的正确采集是确保厌氧菌检验准确的关键前提。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
厌氧菌培养标本
厌氧菌培养标本【参考范围】绝大多数无芽孢厌氧菌均存在于人和动物体内，特别是口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等处，同需氧菌与兼性厌氧菌共同构成机体的正常菌群。
例如肠道菌群细菌中99.9%是厌氧菌，皮肤、口腔、上呼吸道、女性生殖道的正常菌群中也有80%,90%是厌氧菌。
【影响因素】1.在一般情况下，应从无正常菌群寄居的部位采集标本，用无菌操作抽取体液标本，包括血液、关节液、心包积液、腹腔积液、胸腔积液和膀胱穿刺液、深部脓肿渗出物、经气管抽取的肺渗出物或直接从肺抽取渗出物以及其它组织穿刺液等。
2.采集标本时绝对不能被正常菌群污染。
应尽量避免接触空气，多使用针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。
3.做厌氧菌培养，最理想是能取得组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长，而且组织标本可真实反应出感染过程中的细菌学变化。
4.标本采集后要立即送检，送检过程也必须保持在无菌条件下进行，具体方法可以采用用无菌注射器送检(抽取标本后要排尽空气，并将针头插入无菌橡胶塞)、标本充盈法送检(标本装满标本瓶，驱除空气，加盖后产即送检。
医学教|育网搜集整理粪便作难辨梭菌培养可用此方法)，或用商品化的无氧小瓶送检。
5.在正常情况下，厌氧菌可寄居于皮肤和黏膜，此等部位所培养出的厌氧菌不一定是真正的病原菌，故下列标本无送检价值，不宜做厌氧菌培养:鼻咽拭子、齿龈拭子、痰和气管抽取物、胃和肠道内容物、肛拭、接近皮肤和黏膜的分泌物、褥疮溃疡及黏膜层表面、排出的尿或导尿、阴道或子宫拭子、前列腺分泌物。
【临床意义】1.厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床各科。
人体各种器官和组织都可发生厌氧菌感染，大部分是与需氧菌混合感染。
常规细菌培养阴性，需考虑厌氧菌感染的可能。
即使常规细菌培养阳性，也不能排除厌氧菌混合感染的可能性。
2.厌氧菌感染的临床指征:?感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，是产气荚膜梭菌所引起感染的特征;?感染易发生在黏膜及其周围创面上，口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等黏膜，均有大量厌氧菌寄生，如果这些部位及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染;?深部外伤如枪伤后及人被动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染;?分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染，分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染;?患者的分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而常规培养阴性，或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌;?长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例，可能是厌氧菌感染;?最近有流产史，以及胃肠手术后发生的感染;?常规血培养阴性的细菌性心内膜炎，并发脓毒症血栓性静脉炎，伴有黄疸的菌血症等，应考虑可能有厌氧菌感染。
厌氧菌检验(实验)
芽胞染色法（spore stain）
方法：
涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～
5min →水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾
干、油镜检
结果：
菌体呈红色，芽胞呈绿色。
破伤风梭菌形态特点
破伤风梭菌菌落特点
产气荚膜梭菌形态特点
外环不完全溶血由α毒素引起
内环完全溶血由θ毒素引起
实验内容
第一次
1.接种庖肉培养基：每人接Fra bibliotek1支庖肉基菌种：破伤风梭菌、产气荚膜梭菌
2. 每人接种1个血平板
菌种：产气荚膜梭菌、破伤风梭菌
3.培养：37℃ 48h
第二次
1.观察细菌在庖肉基中的生长现象
2.观察厌氧菌的生长情况及菌落特点
3.革兰染色镜检：产气荚膜梭菌、破伤风梭 菌 4.芽胞染色：破伤风梭菌 5.汹涌发酵现象观察（示教）
厌氧菌检验
王频佳 检验医学院
实验目的
1．掌握产气荚膜梭菌和破伤风梭菌的形态特 点和培养特性。 2．熟悉厌氧菌的常用培养方法、一般鉴定原 则和鉴别要点。
器材和试剂
1．菌种：破伤风梭菌、产气荚膜梭菌 2．培养基：庖肉培养基、血琼脂平板 3．试剂：革兰染色液、芽胞染色液 4．其他：接种环、酒精灯、显微镜、普通 培养箱、玻片、封口胶等。
芽孢杆菌的分离及芽孢杆菌制剂的制备
芽孢杆菌的分离及芽孢杆菌制剂的制备
芽孢杆菌是一种常见的细菌，它具有生长快、耐高温、抗干扰等优点，因此在医药、
食品、环保等多个领域都有广泛的应用。
本文将介绍芽孢杆菌的分离方法和芽孢杆菌制剂
的制备过程。
一、芽孢杆菌的分离
1、样品采集和处理：可以从厨房、卫生间、污水处理厂、食品加工场等环境样品中
采集芽孢杆菌。
采样前需要先清洁样品表面，避免表面杂菌的干扰。
将样品收集到采样袋
或容器中，并加入适量的生理盐水或其他缓冲液。
2、菌落计数：将样品加入到适当的培养基中进行培养，培养条件为35℃，24小时。
接着取出培养板进行菌落计数，如果菌落数大于一定数量，说明样品中含有芽孢杆菌。
3、分离芽孢杆菌：将培养板上的单个菌落用无菌擀膜或针头收集到离心管中。
然后
加入适量的生理盐水并通过液态培养进行分离，同时需要注意保持样品的无菌状态。
4、鉴定菌株：通过生化试剂或PCR等方法对分离得到的菌株进行鉴定，确定是否为芽孢杆菌。
1、芽孢杆菌的培养：选取鉴定后的芽孢杆菌菌株，通过液态培养或固态培养进行增殖。
如果是液态培养，则在恰当的时间点收集菌液；如果是固态培养，则将菌落收集到无
菌瓶中加入液体培养基，在含氧条件下进行多次的摇床培养，直到达到所需的菌量。
2、芽孢杆菌制剂的制备：将芽孢杆菌菌株添加到合适的载体中，如生物胶、淀粉等，然后培养、干燥、添加辅料等处理过程，最终制得芽孢杆菌制剂。
三、结论
通过以上的实验步骤，我们可以快速而准确地分离出芽孢杆菌，并制备出高质量的芽
孢杆菌制剂。
这对于芽孢杆菌的应用和研究有着重要的作用。
厌氧菌培养过程
只针对厌氧菌
1、选择性培养基的的选择。
可根据国标（食品安全国家标准，双歧杆菌检验等）及2017年国家食品安全标准（GB）微生物培养基用量核算表（可在青岛海博生物技术公司网站上找到这些信息），选择自己需要使用的培养基。
双歧杆菌分离计数我选择的是改良MRS培养基和MRS培养基。
2、菌落鉴定。
在选择性培养基上挑选类似目标菌的菌落先做生化鉴定，如果鉴定结果符合目标菌标准，继续做16SrDNA测序。
（生化鉴定试剂也可以在青岛海博生物技术公司找到）。
3、取样管取样，用厌氧装置运输至武汉。
（厌氧装置包括厌氧袋、厌氧产气包、氧气指示剂）。
4、菌群的分离及计数，取0.1g粪样用生理盐水或PBS缓冲液逐级稀释，以10-4-10-7涂布选择性培养基，三个重复，将涂布平板放进厌氧装置中放入培养箱培养即可，48h后（双歧杆菌）计数。
厌氧菌的鉴定程序
厌氧菌的鉴定程序1 概述厌氧菌是一大群专性厌氧菌群，必须严格无菌环境才能生长。
主要分为两类：一类是革兰阳性有芽胞的厌氧梭菌，另一类是无芽胞的革兰阳性和阴性的球菌和杆菌。
大部分无芽胞厌氧菌为条件致病菌，所引起的感染可遍及临床各科和人体各部位，在人体寄居的厌氧菌比需氧菌在数量上占有明显的优势。
2 分类包括革兰阴性球菌和杆菌及革兰阳性球菌和杆菌。
分类主要依据形态、革兰染色、鞭毛、芽胞、荚膜及终末代谢产物来判断。
2.1 革兰阳性厌氧球菌主要包括消化球菌属和消化链球菌属；其镜下形态分别为圆形或卵圆形，排列成双，成链状，黑色消化链球菌排列常呈不规则。
在厌氧血琼脂平板上形成细小不溶血菌落。
生长温度范围25～38℃，最适生长温度为 35～37℃.生长缓慢，一般需要培养 48h 才能形成肉眼可见的小菌落。
在硫乙醇酸盐肉汤中呈现沉淀或絮状，但不浑浊。
2.2 革兰阴性厌氧球菌主要包括韦荣球菌属、氨基酸球菌属、巨球菌属等。
其中韦荣球菌属最为常见，与人体有关的有小韦荣球菌、齿蚀韦荣菌、不典型韦荣球菌和殊异韦荣球菌。
此处仅介绍韦荣球菌属。
韦荣球菌属镜下呈成双、聚集不规则及短链状排列，无动力，厌氧生长，最适温度 30～37℃。
该菌属氧化酶试验阴性，触酶试验不定，不分解碳水化合物，分解乳酸盐产生乙酸盐、丙酸盐、CO2 和 H2，培养时需 CO2才能生长。
初步鉴定根据菌落和镜下形态、革兰染色、对特定抗生素的敏感性和某些快速生化试验；确切鉴定包括糖类发酵试验和气相色谱技术。
该菌属特点为革兰阴性球菌，对多粘菌素和卡那霉素敏感，对万古霉素耐药，还原硝酸盐为亚硝酸盐；在厌氧血琼脂平板上菌落形态为细小、圆形、凸起、灰白色，可初步推断为韦荣球菌属。
2.3 厌氧革兰阴性无芽胞杆菌与人类致病性相关的只要包括拟杆菌属和梭杆菌属，拟杆菌属和梭杆菌属均为革兰阴性杆菌，拟杆菌为短小的规则杆菌，而梭杆菌为细长的梭形杆菌，均不产生芽胞，不能进行有氧代谢，严格无氧环境生长。
厌氧芽胞梭菌标本的制作
厌氧芽胞梭菌标本的制作
包东武;李建华
【期刊名称】《卫生职业教育》
【年(卷),期】2011(029)003
【摘要】@@ 厌氧芽胞梭菌由于来源困难,临床标本较少,为此,我们从土壤中分离厌氧芽胞梭菌中的破伤风芽胞梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌,制备菌种、芽胞和荚膜标本片,用于临床检验专业的厌氧芽胞梭菌培养实验及其他专业芽胞和荚膜特殊结构形态观察实验,取得了良好的实验教学效果,其分离制备过程如下.
【总页数】2页(P96-97)
【作者】包东武;李建华
【作者单位】南阳医学高等专科学校,河南,南阳,473000;南阳医学高等专科学校,河南,南阳,473000
【正文语种】中文
【中图分类】G424.31
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1.溶组织芽胞梭菌胶原酶产品Xiaflex获准上市用于治疗杜普伊特伦挛缩征 [J],
2.重组大肠埃希菌-厌氧梭菌穿梭质粒pIMP1-eIL-12稳定转化生孢梭菌 [J], 张艳丽;张文卿;王秋波;丁守怡;吕锐;孟林
3.厌氧梭状芽胞菌计算机鉴定程序的编制与应用 [J], 苏明权;丁振若
4.水中还原亚硫酸盐厌氧芽胞菌的检测 [J], 于凌琪;王书梅;井良义;孙美玲;苏旭
5.西藏土壤厌氧芽胞梭菌的调查分析 [J], 赵海潮;李素芝;何代平;邹敏;江成剑
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厌氧菌培养标本的采集
厌氧菌培养标本的采集
厌氧菌是对氧气敏感的一类细菌，在有氧气的环境中不能生存或生存极差，而且多数厌氧菌是机体内正常菌群的一部
分。
因此怀疑厌氧菌感染时标本的采集需要特别注意：①应尽量避免接触空气；②不被正常菌群污染。
采集厌氧菌培养标本原则上应从无正常菌群寄居的部位采取，对穿刺点进行消毒后，无菌操作抽取血液、关节液、心包液、腹、胸腔积液和膀胱穿刺液等标本；封闭性脓肿用注射器抽取；可通过纤维支气管镜保护性毛刷或支气管肺泡灌洗从支气管、肺中获取呼吸道分泌物或经支气管肺活检获取肺活组织；子宫腔分泌物采用双套管官腔镜采取。
采集的标本应立即排空注射器内的空气（应在针头上包裹酒精棉球），立即将注射器针头插入无菌橡皮塞中以隔绝空气，运送至实验室；最好将标本立即注入密封的无氧小瓶中，瓶中装有0. 5ml厌氧培养基，并含有氧气指示剂刃天青，无氧气时不显色，小瓶内液体呈现淡黄色或无色。
小瓶内液体显示粉红色表示有氧气，不能使用。
也可在床边直接接种至预还原的培养基中，放人厌氧袋，打开气体发生装置，密封后运送至实验室。
以下标本不宜做厌氧菌培养：鼻咽拭子、咳出的痰液及气管抽取物、胃和肠道内容物、肛拭子、自行排出及导出的尿液、阴道及子宫拭子、前列腺分泌物、褥疮溃疡及粘膜层表面拭子、皮肤和粘膜拭子等。
厌氧芽胞梭菌属形态与染色、培养基、菌落特点、生化反应、致病物及检测方法
肉毒毒素（神经外毒素，豆制品中常见）
致病机制
痉挛毒素与脊髓前角细胞和脑干神经元结合，抑制性神经递质无法释放，使骨骼肌痉挛
α毒素分解细胞膜使组织细胞受损，毒素和酶发酵产生大量气体
肉毒毒素作用于外周胆碱能神经，抑制神经肌接头ACh释放，使肌肉弛缓性麻痹
致病和临床表现
破伤风：牙关紧闭，苦笑面容，持续性背部痉挛呈角弓反张状
清创扩创，切除感染坏死灶，截肢，大量使用青霉素、气性坏疽多价抗毒素；高压氧舱法
注射A、B、E三型多价抗毒素，维持呼吸
厌氧芽胞梭菌属形态与染色、培养基、菌落特点、生化反应、致病物及检测法
破伤风梭菌
产气荚膜梭菌
肉毒梭菌
形态
G+，周鞭毛，鼓槌状
G+，无鞭毛，粗大杆状，有荚膜
G+，粗短杆状，汤匙状
培养
血平板现β溶血环
血平板现双层溶血环，蛋黄平板现乳白浑浊圈
蛋黄平板现浑浊圈
致病物
破伤风溶血毒素，破伤风痉挛毒素（神经毒素）
气性坏疽：气肿，水肿，触摸皮肤有捻发感，坏死有恶臭
食物中毒：腹痛腹胀，水样腹泻
食物中毒（肉毒中毒）：少见胃肠道症状，多为神经末梢麻痹，眼肌麻痹、咽部肌麻痹等；婴儿肉毒病；创伤感染中毒
感染途径
窄而深的创口污染；不洁器械剪断脐带
窄而深伤口污染，大面积创伤
食入被污染食物；伤口被芽胞污染
防治原则
清创（双氧水、抗生素），扩创；特异性预防：百白破三联制剂；紧急预防：注射破伤风抗毒素（要先做皮试）
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起到积极推动作用，能够弥补护理实验员的不足。
需要注意的是：实验员助理一定是责任心强且学习认真的护生，工作以不影响护生学业为重；实验员要与实验员助理加强沟通与合作，要给予护生表现和锻炼的机会，但不能不管不问，完全依赖实验员助理。
护生担任实验员助理，要扬长避短，发挥助理的重要作用，对护理实验室的管理和发展起到积极作用。
参考文献：[1]张永利.护理实验教师在教学改革中的角色与功能[J].山西职工医学院学报，2007，17（1）：80.[2]文建国，阮湘云，高单飞，等.“实验员助理制”的实践与认识[J].职业时空，2007，（2）：22~23.蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉关键词：厌氧芽胞梭菌；分离培养；实验教学中图分类号：G424.31文献标识码：B文章编号：1671-1246（2011）03-0096-02厌氧芽胞梭菌由于来源困难，临床标本较少，为此，我们从土壤中分离厌氧芽胞梭菌中的破伤风芽胞梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌，制备菌种、芽胞和荚膜标本片，用于临床检验专业的厌氧芽胞梭菌培养实验及其他专业芽胞和荚膜特殊结构形态观察实验，取得了良好的实验教学效果，其分离制备过程如下。
1材料和方法1.1仪器及材料电热恒温培养箱、电热恒温水浴箱、水浴锅、电炉、庖肉培养基、血平培养基、普通琼脂平板培养基、焦性没食子酸、10%氢氧化钠溶液、纱布、石蜡、无菌毛细滴管、注射器、载玻片、染色液、中性树胶、盖玻片、标本盒、小白鼠等。
1.2方法1.2.1接种标本增菌培养取10支庖肉培养基管放入水浴锅中煮沸20分钟，以除去培养基管内的氧气；把庖肉培养基上层的石蜡在酒精灯上烤化，分别将一豆粒大小的土块（花池中的土块更好）放入培养基管内摇匀；将培养基放入80℃水浴箱内20分钟，以除去土壤中的杂菌；取出培养管并放入37℃培养箱内24～48小时。
1.2.2分离培养取出庖肉培养基，可见培养管变浑浊，管底肉渣可能部分被消化或变色，产生气体，有腐败恶臭味。
选用肉汤轻度浑浊，肉渣部分消化呈微黑色，并产生少量气体，有腐败恶臭味的培养管内的培养物分离破伤风芽胞梭菌；选用肉汤浑浊，肉渣未被消化，但变为粉红色，产生大量气体，将培养管上层的石蜡冲开的培养管内的培养物分离产气荚膜梭菌；选用肉汤浑浊，肉渣消化变黑色，产生气体，有腐败恶臭味的培养管内的培养物分离肉毒梭菌。
将以上培养物分别分离划线接种于血平板培养基和普通平板培养基上，于平皿盖外部中央放2层纱布，中间包夹1g 焦性没食子酸，加10%氢氧化钠溶液1ml 于纱布上，迅速将接种好的平板培养基反转扣在纱布上（纱布直径应小于培养基，且不能与培养基表面接触），并用熔化的石蜡封固外周，放37℃培养箱厌氧培养24～48小时，或直接把接种后的平板培养基直接放入37℃厌氧培养箱或厌氧罐中培养。
1.2.3菌种鉴定（1）破伤风芽胞梭菌的鉴定。
破伤风芽胞梭菌在普通培养基上，形成不规则的圆形，中心实周边松似羽毛细丝，边缘呈锯齿状的扁平菌落（在血平板上易呈迁徙状生长，不易获得单个菌落，应提高琼脂的浓度）。
涂片革兰氏染色，油镜观察可见革兰阳性细长杆菌，一般为（2～3）μm ×（0.3～0.5）μm ，芽胞位于菌体的一端，圆形，大于菌体，似鼓槌状。
生化反应不分解糖类，能液化明胶，产生硫化氢，大多数菌株吲哚实验阳性[1]。
（2）产气荚膜梭菌的鉴定。
产气荚膜梭菌在血平板上形成2～4mm 、圆形、凸起、表面光滑、灰白色、不透明、边缘整齐的菌落，大多数菌株的菌落近周有完全溶血环，其外又有较宽的不完全溶血环，形成双层溶血。
取典型菌落做革兰染色油镜观察，可见两端钝圆，大小为（1～1.5）μm ×（3～5）μm 的革兰阳性粗大杆菌，单个或成双存在，可见椭圆形芽胞形位于菌体中央或次极端，直径小于菌体的宽度。
生化反应，本菌能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖产酸产气，不分解甘露醇，做汹涌发酵实验6小时出现明显的阳性反应[2]。
（3）肉毒梭菌的鉴定。
肉毒梭菌在血平板培养24小时，可形成2～4mm 白色粗糙的有透明溶血环的菌落，取典型菌落进行革兰染色油镜观察，可见革兰阳性粗短杆菌，两端钝圆，大小为（1～1.2）μm ×（4～6）μm ，单独或成双排列，有时可成短链状排列。
芽胞呈椭圆形，位于菌体次极端，宽于菌体，使菌体呈汤匙状或网球拍状。
生化反应，本菌分解葡萄糖和麦芽糖产酸产气，不发酵乳糖，液化明胶，产生H 2S ，但不产生吲哚[2]。
1.2.4纯培养及菌种保存分别将鉴定后的菌种转种于另一血平板培养基，用上述方法置37℃厌氧培养24～48小时，再分别厌氧芽胞梭菌标本的制作包东武，李建华（南阳医学高等专科学校，河南南阳473000）96--转种庖肉培养基各2支，放入37℃培养箱18小时，取出做菌种，放4℃冰箱保存备用。
1.2.5芽胞标本片的制备（1）破伤风梭菌芽胞标本片的制备。
将破伤风梭菌接种于庖肉培养基中，放37℃培养箱培养24～48小时；取出观察培养管变轻度浑浊，用无菌毛细吸管滴加菌液1滴于洁净玻片上，用接种环涂匀，干燥固定；用片夹夹住玻片的一端，滴加石炭酸复红液（抗酸染色第一液）3滴左右，盖满涂膜，并以弱火微加热使染液出现微汽即可，且勿煮沸烧干，染液将干时，应随时添加，持续染色3～5分钟，待标本片冷却后水冲洗；加95%酒精脱色2分钟，水冲洗；加碱性美兰液（抗酸染色第三液）复染1分钟，水冲洗；吸水后油镜观察，可见破伤风梭菌菌体被染成蓝色，芽胞被染成红色，圆形，位于菌体的极端，膨大，似鼓槌状。
用此法大批制片，染色后加盖片用中性树胶封固，晾干后贴标签长期保存使用。
（2）产气荚膜梭菌芽胞标本片的制备。
将产气荚膜梭菌接种于不含糖的庖肉培养基中，置37℃培养箱24小时；取出观察培养管变浑浊，涂片芽胞染色（同破伤风芽胞梭菌芽胞染色）；油镜观察，可见产气荚膜梭菌芽胞被染成红色，卵圆形，位于菌体的中央或次极端，不膨大，菌体染成蓝色。
用此法大批制片，长期保存使用。
（3）肉毒梭菌芽胞标本片的制备。
将肉毒梭菌接种于庖肉培养基中，放37℃培养箱24小时；取出观察培养管变浑浊，涂片芽胞染色（同破伤风芽胞梭菌的芽胞染色）；油镜观察，可见肉毒梭菌菌体被染成蓝色，芽胞被染成红色，卵圆形，位于菌体的次极端，膨大，似网球拍状。
用此法大批制片，长期保存使用。
1.2.6荚膜标本片制备将产气荚膜梭菌培养18小时的液体培养物0.5ml 注射入小白鼠腹腔，10分钟后杀死小白鼠，置37℃温箱4～6小时，由于产气荚膜杆菌产生大量气体，可使小白鼠体内充满气体，腹部膨胀，剖检可见各脏器肿胀，并有许多气泡，尤以肝脏为甚。
剖开肝脏进行涂片，干燥固定；用石炭酸复红液染色1分钟，并用微火稍微加热，待标本放凉后水冲洗；加特殊媒染剂（升汞饱和液2份、20%鞣酸液2份、钾明矾饱和液1份混合而成）作用0.5分钟，水冲洗；最后用碱性美兰液染色1分钟，水冲洗；吸水后油镜观察，结果为菌体被染成鲜明红色，荚膜呈蓝色，位于菌体外周。
亦可将涂片直接用革兰氏染色法进行染色，结果菌体呈紫色，荚膜呈透明圈，位于菌体外周。
用此法大批制片，染色后加盖片用中性胶封固，晾干后贴标签，放入标本盒内长期保存使用。
2结果从土壤中分离出的厌氧芽孢梭菌制备的菌种及芽胞和荚膜标本片均非常典型。
菌种用于临床检验专业的厌氧芽胞梭菌培养实验和汹涌发酵实验，芽胞和荚膜标本片用于临床医学专业及其他医学类各专业的细菌特殊结构观察实验，取得了非常好的实验教学效果。
3讨论近几年来厌氧芽孢梭菌引起的感染及食物中毒病例明显增多，细菌的耐药性也在不断增高，这给临床医生治疗带来了很大困难，应引起高度重视。
在实验教学中，临床标本来源有限，但从土壤中分离厌氧芽孢梭菌比较方便，操作简单，制备的标本片形态典型，可广泛应用于病原生物学实验教学。
参考文献：[1]陈兴保.病原生物学和免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2007.[2]刘荣臻.微生物学检验[M].北京：高等教育出版社，2007.蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉关键词：实验室；危险化学药品；安全教育中图分类号：G482文献标识码：B文章编号：1671-1246（2011）03-0097-02实验室是高校实验教学、科学研究的重要场所，是培养学生动手能力、创新能力，提高学生综合素质的重要基地。
随着办学规模的扩大，学生实验和教师科研项目逐渐增多，危险化学药品的使用量随之增长。
若学校的实验室安全防范措施不能及时跟上，防火防盗达不到相应要求，易发生火灾、爆炸及危险化学药品丢失等安全事故。
因此，应加强师生危险化学药品安全意识教育，让他们正确使用、储存和管理实验室危险化学药品，以保障学校实验教学、科研开发的正常进行，最大限度地减少安全事故[1]。
1危险化学药品储存过程中易产生的安全隐患1.1实验常见危险化学药品类型（1）低沸点易燃易爆药品。
如乙醚，沸点34.5℃，极易挥发，在空气中浓度达到1.85%~36.50%，即可爆炸；长时间与氧接触和光照，可生成黏稠的过氧乙醚，受热可爆炸[2]。
丙酮，沸点56.5℃，极易挥发，遇火即燃，燃烧时产生刺激性蒸气，有毒和麻醉性，使人头昏[2]。
其他如甲醇、乙醇，沸点都较低，易挥发，遇火极易燃。
这些试剂都是化学实验室中常用试剂。
（2）重金属盐类。
如汞盐中的硝酸汞、硝酸亚汞、氯化汞、氯浅议实验室危险化学药品管理范珍（安庆医药高等专科学校，安徽安庆246000）97--。