第四章中药制剂的含量测定

中药制剂质量优劣的标准
鉴别
检查
含量测定
中药制剂含量测定是研究某 中药制剂的鉴别是研究某 种成分的含量高低是否符合 种原料药或成分的存在与 规定来判定药物的优劣，是 否，从而判定药物的真伪 质量控制中的一项重要指标。
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中药制剂含量测定的意义
通过测定制剂中有效成分、毒性 成分或某些指标性成分的含量来衡 量其制剂工艺的稳定性和中药材的 质量优劣，以保证中药制剂的质量， 达到临床用药安全、有效和中药制 剂进入国际市场的需要。
干扰组分在λ1和λ2处应具有相同的吸收度
待测组分在这两个波长处的吸收光度差值应足够大
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A A 2 A ( 2 ) Cb L
b b 1 b b 1
计算分光光度法 双波长法等吸收点法
分析步骤
c a
① 选择双波长（λ1、λ2）
② 绘制标准曲线 △Ａ对浓度Ｃ作图（回归） 样品测定 λ1、λ2，分别测定Ａ1及Ａ2
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样品的分离纯化
（一）沉淀法
蛇胆糖浆口服液含有大量糖，可用无水乙醇回流样 品，冷后过滤，除糖以消除其干扰。
杂质沉淀→过滤→取滤液测定
样品+沉淀剂
复方益母草口服液中水苏碱的含量测定 待测组分沉淀→重量法或溶解后测定 利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质 中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它 杂质分离。


密度-d液体 → 溶解能力强

粘度-气体 → 传质快，有利于待测组分 的扩散 表面张力几乎为 0 → 浸润性能好
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样品的提取

超临界流体提取法

密度受压力、温度的影响大→ 改变对溶质的溶 解能力
加入甲醇、氯仿、苯等改变极性→ 提取不同极 性的成分

优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择 性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使 用易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和光谱等分 析仪器直接联用。
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样品的提取

关键——提取完全

溶剂的选择

水、酸水、碱水
亲水性的有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮
亲脂性的有机溶剂：石油醚、苯、氯仿、 乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷
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样品的提取 常见的提取方法： 萃取法 回流提取法 超声提取法 水蒸气蒸馏法 超临界流体提取法 浸渍法 连续回流提取法
微波辅助萃取法
※ 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需 用酸、碱清洗
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聚酰胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用含 酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。 硅藻土、纤维素：亲水型填料，以水基质液作为固 定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相的分配色谱
离子交换树脂：用于除去样品中的离子及萃取可离 解化合物(弱酸、弱碱药物) 活性炭：非极性吸附剂
萃取剂的选择
亲脂性有机溶剂：如苯、氯仿或乙醚 弱亲脂性的溶剂：如乙酸乙酯、正丁醇等

多次萃取（3-4次）


调整水相酸度，提取有机酸、有机碱
利用盐析作用，提高提取率
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样品的分离纯化 离子对萃取法
适合于高度电离的有机酸、 碱化合物的萃取 弱极性离子对 BH+· In-（水相） BH+· In-（有机相）
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三、薄层扫描法（TLCS） 薄层扫描法是指薄层色谱斑点的色谱扫描，薄层 色谱扫描是指固定波长，斑点移动，测定A-t或F-l曲 线。根据薄层扫描的测定方式分为薄层吸收扫描法和 薄层荧光扫描法二种方法。
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薄层扫描法（TLCS） 光源：钨灯和氘灯； 灵敏度：在200-800nm波长范围内选择合适波 长进行测定，其灵敏度可达ng级； 适用范围：适用于在可见、紫外区有吸收的物 质，及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的 样品组分。


浓缩
试样形式符合测定的要求
样品处理的主要步骤
1. 样品的粉碎 2. 样品的提取 3. 样品的分离纯化

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样品的粉碎


目的——1. 取样均匀 2. 提取完全
粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机
※ 粒度大小合适 样品粉末的分级（过筛） ※ 防止污染或损失 仪器设备洁净
粉尘和较大颗粒的损失。
（三）液-液萃取法

BH+（水相）+ In-(水相)
生物碱
离子对试剂：酸性染料，如BTB,BCG
※ 水相酸度的控制 ※ 离子对试剂的选择
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样品的分离纯化
（四）色谱法（层析法）

分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换 色谱、凝胶色谱 按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱
装柱方法：湿法装柱、干法装柱

导数光谱法
一般应用于供试品溶液中含有2中或2种以上 的组分的含量测定。
差示光谱法 利用比样品浓度稍低的标准品作为 空白,进行测定及计算的方法.
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计算分光光度法 双波长法等吸收点法
ａ为干扰组分的吸收光谱 ｂ为待测组分的吸收光谱 ｃ为混合组分的吸收光谱
a
c
波长(λ1、λ2) b
关键步骤：
选择λ1和λ2的基本条件
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样品的提取
（一）冷浸法 操作：样品→精密称定→置容器内→精密加入溶剂 →称定重量→浸泡（12~24h）→称重→补足重量 →测定 测定方法： 优缺点及适用范围： 全部测定法：过滤 →滤液→蒸干→定容→测定（残 优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提 渣需洗涤完全） 取杂质少 部分测定法：过滤 →滤液 →取若干体积测定（不适 缺点：费时（12-24 h）费溶剂（ 10-50倍） 宜挥发性较大的溶剂） 10
1% E1 cm 为728，现
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标准曲线法
从标准品吸光度-浓度曲线求得样品溶液的浓度
A KC 或 A KC

对照品对照法
在一定线性范围内根据Lambert-Beer 定律溶液 的浓度和吸光度存在以下关系
A标 C标 A样 C样
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紫外－可见分光光度法
（二）计算分光光度法

双波长分光光度法（等吸收点法、系数倍率法） 三波长法
使用前需先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净 ，于80℃干燥 分开水溶性芳香族物质与脂肪族物质，单糖与多糖，氨 基酸与多肽 22


样品的分离纯化
（五）固相微萃取 （SPME）
集萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理新方法
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样品的分离纯化
（六）消化法——测定中药制剂中的无机元素

湿法消化
(+Na2CO3/MgO)
灰分
※ 控制温度在420℃以下 ※灰化完全，切勿弃去不易溶灰分 ※不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，） 有机样品的破坏。
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一、化学分析法

适用于含量较高的成分及无机成分的测定
重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法
酸碱滴定法
滴定分析法
沉淀滴定法 配位滴定法
氧化还原滴定法
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1.薄层吸收扫描法

薄层扫描法（TLCS）
2.薄层荧光扫描法 光源：氖灯或汞灯; 灵敏度：最低可测到10-50pg;
适用范围：适合于本身具有荧光或经过适当
处理后可产生荧光的物质的测定。
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四、气相色谱法（GC）
基本原理
气相色谱法（GC）是将气化后的试样由载气 （流动相）带入色谱柱，根据各组分在流动相和 固定相间作用的不同而分离，并随载气依次流出
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中药制剂含量测定的特点
中药制剂与化学药品含量测定区别
含量测定内容 中药制剂 化学药品
对象不同
组成及成分复杂
成分单一
方法简单 成分明确
方法繁琐，大多需 供试品溶液制备 要净化分离 待测成分确定
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先根据中医药理论 一般选择主 选择药味，再综合 要成分 选择待测成分
样品处理的主要作用

释放被测组分，制成稳定试样 除去杂质，纯化
b
△Ａ
应用条件：吸收曲线有峰和谷
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பைடு நூலகம்紫外－可见分光光度法
紫外光谱法中对仪器和试剂的要求
（1）仪器的校正和检定：包括波长精度、吸收度 的准确性、杂散光等。
（2）对溶剂的要求：用1cm石英池盛装溶剂，以空气为
空白，测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度在220nm— 240nm范围内不得超过0.40；在241nm—250nm范围内不得超 过0.20；在251nm—300nm的范围内不得超过0.10；300nm以 上不得超过0.05。
采用回流装置，用单 用索氏提取装置， 样品的提取 一溶剂或混合溶剂于水浴 利用遇热易挥发溶剂 （二）回流提取法 上加热提取 反复提取 优缺点及适用范围： 优缺点及适用范围： 万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定 提取效率高，提取时间短， +HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h提 取 效 率 高 ， 所 需 溶 为 0.5 ～ 2 小时；提取杂质 剂少，提取杂质较少， （三）连续回流提取法 较多，不适用于热不稳定 操作简便；受热易分 或具有挥发性的成分 解的成分不宜使用。

硝酸—高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样 品和含动植物药制剂的破坏 硝酸—硫酸法：与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属 离子的测定，不宜采有此法。 硫酸—硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的 破坏，破坏后得到三价砷或锑。
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※ 对含氮杂环类有机物破坏不够完全



样品的分离纯化

干法消化 供试品
灼烧灰化
（Analysis of Chinese Preparation）
药物分析教研室
1
学习目的：
1
掌握样品的处理、分离和净化 方法；滴定分析法、可见-紫 外分光光度法和HPLC法的含 量计算方法。 熟悉含量测定的目的与意义以 及含量测定方法的效能指标
2
3
了解常用定量分析方法
2
第一节 含量测定的目的与意义

对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（100±10％）

标准曲线法
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吸收系数法
测定供试品溶液在规定波长处的吸收度A，根 1% E 据A=ε cl，若l和吸光系数ε 或 1cm 已知，即可 求出被测物的浓度。
A A C 或C 1% l E1cml
例:小檗碱溶液在345nm处的 测的某小檗碱溶液在345nm出的吸收度为 0.5824，计算该小檗碱溶液的浓度。

微柱色谱（固相萃取LSE）
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样品的分离纯化

LSE常用净化剂（填料）
硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层 析，强烈保留碱性化合物。

洗脱顺序：极性小→大
氧化铝：带有碱性，分离一些碱性中草药成分， 不宜用于醛、酮、内酯等类型的化合物分离
中性、酸性氧化铝：适用于酸性成分的分离
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键合相硅胶（C18或ODS）:分开脂溶性和水溶性成分 操作程序： ①柱的活化；②上样；③清洗；④洗脱 洗脱顺序：极性大→小 大孔树脂 分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯 乙烯和二乙烯苯的共聚物）型
色谱柱，经检测器检测，利用保留值进行定性，
二、紫外－可见分光光度法
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紫外－可见分光光度法 紫外分光光度计基本构造
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器
信号处理及显示
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紫外－可见分光光度法
（一）单波长分光光度法
吸收系数法（CHP最为常用） 要求： A=ECL（朗伯-比尔定律：物质对单色光吸收特性与 选择被测成分的λmax为测定波长，而共存组 浓度、液层厚度关系定律 ） 分在此波长处基本无吸收，并控制供试液的吸 对照品比较法 收度读数在0.3-0.7之间
保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定 +甲醇，加热回流至提取液无色为止
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样品的提取
（四）超声提取法

原理：超声波的助溶作用
优点：操作简便，提取速度快
※ 超声波可能引起供试品化学成分的改变 ※ 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等 进行考察
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样品的提取 （五）超临界流体提取法 （Supercritical-fluid extraction，SFE） 超临界流体——特殊的物质状态

重量分析

挥发法：又叫汽化或干燥法
如水分测定及干燥失重测定

萃取法：又称为提取法或抽取法
如冰片散中冰片的含量测定

沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定
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滴定分析 酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类 沉淀滴定法 银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物 四苯硼钠法：+生物碱→白色沉淀 亚铁氰化钾法 配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定 鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等 矿物类制剂的含量 氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、 As等成分的中药制剂；分为碘量法、高锰酸钾 28 法和亚硝酸钠法等
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样品的分离纯化 适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、 小分子的生物碱、丹皮酚等 最常用水蒸气蒸馏法

（二）蒸馏法


共水蒸馏法 通水蒸气蒸馏法 水上蒸馏法
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利用盐析作用，提高蒸馏效果

样品的分离纯化 直接萃取法

（三）液-液萃取法

原理：利用试样中被测成 分与干扰成分在有机溶剂 （萃取剂）中的溶解度不 同，通过多次萃取达到分 离净化的目的。