血凝抑制试验结果判定
实验四血凝和血凝抑制试验
3. 0.85%生理盐水. 4. 被检血清,采自被检鸡的血清.
四、操作步骤 〔一血凝试验〔HA
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水. 2. 在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀后
〔Hemagglutination and Hemagglutination
Inhibition, HA and HI
动物病原学实验之六
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理,以及使 用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结 果判定方法.
二、实验原理
〔一血凝试验〔HA
➢ 有些病毒能够促使某些动物〔如鸡、鹅、豚鼠、 绵羊和人的红细胞发生凝集,这就是红细胞凝集 现象,称做血凝试验.
以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度 作为血凝价的终点,即一个血凝单位.
〔二血凝抑制试验〔HI
1. 在血凝板的1~12孔加入50μl生理盐水,最后一孔加 100μl.
2. 第1孔加入待检血清50μl,混匀后吸50μl至第2孔,倍比 稀释直至第10孔,混匀后弃50μl.
3. 从1~11孔,每孔加稀释好的50μl 4个血凝单位的病毒悬 液.
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
➢ 象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等,凝集红 细胞的条件很严格,对红细胞的种类有很 严格的选择,同时还要掌握反应的pH和温 度等.
〔二血凝抑制试验〔HI
➢ 当病毒悬液中加入特异性抗体时,这种红 细胞凝集的现象就被抑制,称做红细胞凝 集抑制试验,也叫血凝抑制试验.
HI试验的原理图
血凝抑制试验结果判定
孔号
生理盐水 （ml） 尿囊液 （ml）
1
0.2 + 0.2
2
0.2 + 0.2
3
0.2 + 0.2
4
0.2
+ 0.2
5
0.2
+ 0.2
6
0.2
+ 0.2
7
0.2
+ 0.2
8
0.2
+ 0.2
9
0.2
+ 0.2
10
0.2
0.2弃掉
对照
病毒稀释 度 补充液 （ml） 鸡红血球 细胞悬液 （ml）
1∶10
1∶10
1∶20
1∶40
1∶80
1∶160
1∶320
1∶640
0.2弃掉
各0.2ml 各0.4ml
0.2ml
血凝试验原理
血凝素（hemagglutinin HA）：由病毒基因编码 的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。 HA能与人或其它动物多种红细胞表面N－乙酰 神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。
血凝试验结果判定
效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋” 血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此 时的稀释度即为1个血凝单位。
血凝Байду номын сангаас制试验原理
病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所 抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病 毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑 制的试验称血凝抑制试验。
血凝原理
血凝抑制原理
血凝抑制试验结果判定
血凝及血凝抑制实验
1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄色，之后直至清亮为清洗干净）。 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸取干净。
血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、红细胞制备
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。
病毒颗粒
红细胞
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
血凝抑制实验_实验报告
一、实验目的1. 了解血凝抑制实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握血凝抑制实验在禽流感病毒检测中的应用。
3. 学会通过血凝抑制实验结果判断禽流感病毒的感染情况。
二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测病毒感染的方法，通过检测血清中病毒特异性抗体的存在和效价，来判断动物是否感染过某种病毒。
在禽流感病毒检测中，该实验主要用于检测血清中的禽流感病毒抗体水平，从而判断禽流感病毒感染状态。
实验原理：当禽流感病毒与含有抗体的血清混合后，病毒表面的血凝素（HA）与抗体结合，导致病毒颗粒聚集，血凝素活性降低，从而使红细胞不发生凝集。
通过观察红细胞是否发生凝集，可以判断血清中是否含有禽流感病毒抗体。
三、实验材料1. 禽流感病毒抗原2. 1%鸡红细胞悬液3. 0.5%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）4. PBS缓冲液5. 96孔V型酶标板6. 微量移液器7. 振荡器8. 恒温培养箱9. 移液器吸头四、实验方法1. 准备工作（1）将禽流感病毒抗原用PBS缓冲液稀释至适当浓度。
（2）将鸡红细胞悬液用PBS缓冲液稀释至1%。
（3）将PVP用PBS缓冲液溶解，浓度为0.5%。
2. 血凝抑制实验（1）取96孔V型酶标板，每孔加入25μL PBS缓冲液。
（2）在第一排第1孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后，从第1孔吸取25μL加入第2孔，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μL。
（3）向每孔加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后置于振荡器上振荡10秒。
（4）将酶标板置于室温（20-25℃）下静置30分钟。
（5）观察红细胞是否发生凝集，记录结果。
3. 结果判定（1）完全抑制：红细胞不发生凝集。
（2）部分抑制：红细胞发生凝集，但凝集程度较轻。
（3）未抑制：红细胞发生凝集，凝集程度明显。
五、实验结果与分析1. 结果记录根据实验结果，记录每孔红细胞凝集情况，并计算抑制率。
血凝抑制试验结果判断 [血凝血凝抑制试验说明书]
![血凝抑制试验结果判断 [血凝血凝抑制试验说明书]](https://img.taocdn.com/s3/m/18bab48a7f1922791688e8f0.png)
血凝抑制试验结果判断 [血凝血凝抑制试验说明书]鸡新城疫血凝与血凝抑制实验鸡新城疫血凝(ha)及血凝抑制(h1)试验基本原理:许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或人红细胞的特性,称为血凝现象,可用于鉴定病毒。
血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血清学试验,称为血凝抑制试验。
器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;生理盐水/pbs、1%鸡红细胞、96孔v形微量血凝板、加样器等。
实验步骤pbs的配制:1%鸡红细胞的配制:(一)血凝试验(ha)取96孔板,按以下步骤操作:1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照;2、吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。
3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀。
4、室温静置10-30分,观察结果(见下表)。
5、结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即hi效价,用2n表示。
(二)四单位检测:(三)血凝抑制试验(hi)取一96孔板,按以下步骤操作:1、4个单位抗原的制备:按ha试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。
2、待检血清的稀释:第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混匀,吸取50ul至第3孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经倍比稀释,血清的稀释倍数为21~212。
3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混匀;4、室温静置20min;5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min混匀混匀。
血凝、血凝抑制试验
⾎凝、⾎凝抑制试验红细胞凝集试验（HA）与红细胞凝集抑制试验（HI）⼀、实验⽤设备：1、离⼼机 1台*（3000转离⼼红细胞）2、冰箱 1台*（存放抗原）3、振荡器 1台*（振荡96孔V型板）4、抗原新城疫（ND）、减蛋（EDS）、流感（AI）抗原，从正规⼚家进。
5、96孔V型板稀释⾎清清洗后可重复使⽤6、⼋道移液器 1把（5-50微升稀释⾎清）7、吸头和⼋道移液器配套使⽤，清洗后重复使⽤）8、积液槽配制4个单位抗原及盛放⽣理盐⽔加样⽤9、⼀次性采⾎管采⾎⽤10、2毫升注射器采⾎⽤11、红细胞⾮免疫鸡⼼脏采⾎或免疫鸡也可，但需离⼼5次后使⽤。
12、柠檬酸三钠配制3.8％抗凝剂⽤13、重铬酸钾配制清洁液⽤14、硫酸配制清洁液⽤15、吸管 1毫升、10毫升16、吸⽿球和吸管配套使⽤17、针头 9*13（采雏鸡）、9*25（采⼤鸡）18、蒸馏⽔当地买。
清洗96孔V型板、吸头⽤19、10毫升离⼼管离⼼红细胞⽤（塑料制）20、⽣理盐⽔做⾎清稀释液⽤、配制4单位抗原⼆、实验前的准备：1.抗原：从指定⼚家购买稳定浓缩抗原。
2.抗凝剂的配制：⽤天平称量3.8克柠檬酸三钠，溶⼊100ml⽣理盐⽔中，待溶解完全后即可使⽤。
3.1％红细胞悬液：由鸡⼼脏或翅静脉采⾎，放⼊加有抗凝剂的离⼼管内（按抗凝剂：全⾎＝1：2的⽐例），迅速混匀。
在离⼼机中以3000转/分离⼼5分钟，⽤吸管吸去上清液和红细胞上层的⽩细胞薄膜，将沉淀的红细胞加⽣理盐⽔，慢慢混合均匀，再在离⼼机中3000转/分离⼼5分钟，弃去上清液，再加⽣理盐⽔混匀，如此反复离⼼4～5次，最后⼀次离⼼后的红细胞，弃去上清液，即为红细胞泥。
放⼊4℃冰箱中可保存2—3天。
使⽤时⽤1ml 吸管吸取0.1ml红细胞泥，然后加⼊9.9ml的⽣理盐⽔，此即1%红细胞悬液。
现⽤现配。
4.被检⾎清：每只鸡⼼脏或翼下采⾎0.5-1ml,静置或离⼼，待⾎清析出后备⽤。
5.吸管清洁液的配制：使⽤1%的稀硫酸溶液。
血凝和血凝抑制试验
血清
生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl / /
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RBC RBC
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 5/0μl / 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
HI-HA试验原理
反应温度不能太高，若在37℃ （如温箱） 下进行，会影响检测结果。 标准抗原稀释液浓度必须为4个HA单位 /25μl，必须每天制备并在试验前滴定。 孵育时间要严格控制。红细胞对照完全 沉淀时要迅速判读。在一些病毒株中可 见红细胞从病毒中解脱，如果有这种情 况的发生，要提前判定或4℃下孵育。
HI试验注意事项
NDHI 的判读
注意事项 不同实验室结果可以不同 要有阳阴性对照 了解现场生产背景 临床解剖资料 免疫情况、采血周龄
应用
检测血清中的抗体水平。 鉴定病毒。 辅助诊断病毒性疾病。 作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失 败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。
禽流感免疫效果监测
发 病
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
前 发 17d 病 前 1d 5d 8d 9d 11 d 15 d 15 d 15 d 19 d 21 d 24 d 26 d 26 d
发病前后ND抗体的变化
NDHI与临床症状的关系
NDHI NDHI NDHI NDHI <4 4-7 6-8 8-10 感染100％死亡 感染发病90％不死 感染发病100%不死 感染产蛋下降、 NDHI上升 感染只见NDHI上升 病毒无法侵入
微量血凝板的清洗，对试验结果有很大的 影响。 使用过的凝集板，要按程序清洗干净。 清洗程序：试验完毕即将凝集板用自来水 反复冲洗，再用洗涤剂的温水溶液浸泡30 分钟，并在洗涤剂溶液中以棉拭子刷洗凹 孔及板面，待反应板干燥后，放到2—3% 浓度的盐酸中浸泡24小时以上，捞出用自 来水冲洗多次，最后以蒸馏水冲洗2—3次， 在37度温箱中烘干备用。
血凝试验（血凝效价的滴定)
血凝试验结果判定
血凝和血凝抑制试验
3. 4.
பைடு நூலகம்
0.85%生理盐水。 生理盐水。 生理盐水 被检血清，采自被检鸡的健康血清。 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、操作步骤
（一）血凝试验（HA） 血凝试验（ ）
1. 在血凝板第一排的 在血凝板第一排的1~12孔加入 孔加入50µl生理盐水。 生理盐水。 孔加入 生理盐水 2. 在第1孔中加入 病毒抗原， 在第 孔中加入50µl病毒抗原，反复吸取混匀 孔中加入 病毒抗原 后吸50µl到第 孔，如此倍比稀释直到第 孔， 到第2孔 如此倍比稀释直到第10孔 倍比稀释直到第 后吸 到第 混匀后弃50µl； 最后两孔 （ 11、 12） 为红细 ； 最后两孔（ 、 ） 混匀后弃 胞对照。 胞对照。
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25
弃 50µl /
50 / / 50
25 50
注： 11孔为病毒对照 应该完全凝集， 12孔为细胞对照 孔为病毒对照， 孔为细胞对照， 1) 第 11 孔为病毒对照 ， 应该完全凝集 ， 第 12 孔为细胞对照 ， 应该完全沉积到孔底，只有当对照成立时试验结果方有效。 应该完全沉积到孔底 ， 只有当对照成立时试验结果方有效。 以红细胞100 凝集的稀释度为判定终点。 100% 2) 以红细胞 100% 凝集的稀释度为判定终点 。 血凝抑制滴度大 于等于1 为阳性，小于1 为阴性，等于2 为可疑。 于等于1：24为阳性，小于1：22为阴性，等于23为可疑。
病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开， 2 ） 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开 ， 血凝素呈游离状态，例如天花 牛痘、 天花、 血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 3 ） 脑炎病毒 、 口蹄疫病毒等 ， 凝集红细胞的条 脑炎病毒、 口蹄疫病毒等， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 同时还要掌握反应的pH和温度等。 同时还要掌握反应的pH和温度等。 pH和温度等
血凝抑制实验报告
血凝抑制实验报告血凝抑制实验报告在经济发展迅速的今天，报告与我们的生活紧密相连，要注意报告在写作时具有一定的格式。
那么什么样的报告才是有效的呢？以下是小编收集整理的血凝抑制实验报告，欢迎阅读与收藏。
血凝抑制实验报告1禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。
该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。
但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。
一、血凝试验操作程序1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μLPBS液。
2、吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25μL。
第三排孔至第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。
以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒稀释倍数为1个血凝单位（HAU）。
二、血凝抑制试验操作程序1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。
（即1HAU抗原除以4）2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25μLPBS。
3、在第1孔加入25μL被检血清，充分混匀后移出25μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25μL。
血凝抑制实验报告
一、实验背景血凝抑制实验是一种检测血清中抗体水平的常用方法，主要用于监测禽流感等病毒感染。
该实验通过检测血清中抗体的存在和活性，可以判断个体是否感染过某种病毒，以及疫苗免疫的效果。
本实验旨在通过血凝抑制实验，监测禽流感病毒感染情况，评估疫苗免疫效果。
二、实验目的1. 掌握血凝抑制实验的基本原理和操作方法；2. 检测禽流感病毒感染情况；3. 评估疫苗免疫效果。
三、实验原理血凝抑制实验是利用病毒对红细胞表面的受体进行吸附，导致红细胞发生凝集的现象。
当血清中存在抗体时，抗体与病毒结合，阻止病毒与红细胞受体的结合，从而抑制血凝现象的发生。
通过观察血凝现象的变化，可以判断血清中抗体的存在和活性。
四、实验材料1. 禽流感病毒抗原；2. 鸡红细胞；3. 血清；4. PBS缓冲液；5. 微量移液器；6. 酶标板；7. 振荡器；8. 酶标仪；9. 实验室温度计。
五、实验方法1. 准备工作：将禽流感病毒抗原、鸡红细胞、血清、PBS缓冲液等实验材料准备齐全，并置于室温下平衡。
2. 血凝抑制实验操作：（1）取96孔90V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μL PBS液。
（2）吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中，充分混匀。
（3）从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25μL。
第三排孔至第四排孔同上操作。
（4）依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL 1%的鸡红细胞悬液。
（5）将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30分钟，观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
（6）将酶标板放入酶标仪，设置波长为540nm，读取各孔的吸光度值。
六、实验结果与分析1. 结果判定：（1）以血清最高稀释度抑制50%红细胞凝集的抗体滴度（ID50）为血清抗体水平。
（2）ID50越高，说明血清中抗体水平越高，病毒感染情况越严重。
血凝抑制试验判定标准
血凝抑制试验判定标准《血凝抑制试验判定标准大揭秘》嘿，朋友们！你们知道吗？在医学这个神奇的领域里，就如同超级英雄要有自己的超能力准则一样，血凝抑制试验也有它至关重要的判定标准！这可不得了啊，如果不搞清楚这些标准，那简直就像是在医学的迷宫里乱转，找不到正确的方向！所以啊，赶紧跟着我一起来揭开这神秘的面纱吧！一、“清晰界限：阳性与阴性的楚汉河界”哇塞，在这个小标题下呀，我们可以说“阳性和阴性可不是能随便混淆的呀，它们就像是楚汉两边，界限分明得很呐！”血凝抑制试验中，阳性和阴性的判定可是关键中的关键。
阳性意味着存在相应的抗体或抗原，就像找到了宝藏的线索；而阴性则表示没有发现目标，可不能稀里糊涂地搞错啦！比如说，如果我们检测某种病毒的抗体，阳性结果可能就提示我们曾经感染过或者已经有了免疫力，阴性则可能需要进一步排查。
就好像在一场侦探游戏中，阳性是找到关键证据，阴性则是还需要继续努力寻找线索呢！二、“稀释倍数的魔法：恰到好处的平衡”嘿呀，这稀释倍数可真是个神奇的东西啊，简直就是魔法一般的存在！“稀释倍数就像是走钢丝，要找到那个刚刚好的平衡点，不然可就掉下去啦！”在血凝抑制试验中，稀释倍数的选择非常重要。
如果稀释倍数太低，可能会导致结果不准确，就像给魔法施加了过多的力量，一下子就失控了；而如果稀释倍数太高，又可能会错过重要的信息，如同魔法太微弱，根本发挥不出作用。
举个例子，当我们检测血清中的抗体时，需要根据具体情况选择合适的稀释倍数，这样才能准确地判断出抗体的水平。
就像是在调制一杯魔法药水，多一点或少一点都不行哦！三、“重复性的坚守：稳定的基石”哇哦，重复性这个家伙可太重要啦！“重复性就像是盖房子的基石，必须稳稳当当的，不然房子可就要塌啦！”血凝抑制试验的结果需要具有良好的重复性，这是保证结果可靠的关键。
不能这次是这样，下次又变了个样，那可不行！就好像我们每天走同一条路，如果今天路在这里，明天路又跑到别的地方去了，那岂不是要迷路啦！所以，在进行试验时，要严格按照标准操作，确保每次的结果都能保持一致。
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种类型的经典范文，如公文写作、报告体会、演讲致辞、党团资料、合同协议、条据文书、诗词歌赋、教学资料、作文大全、其他范文等等，想了解不同范文格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!In addition, this shop provides you with various types of classic sample essays, such as official document writing, report experience, speeches, party and group materials, contracts and agreements, articles and documents, poems and songs, teaching materials, essay collections, other sample essays, etc. Learn about the different formats and writing styles of sample essays, so stay tuned!血凝抑制实验报告三篇血凝抑制实验报告三篇血凝抑制实验报告一禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。
血凝和血凝抑制试验的注意事项及操作方法
泰安市山农大药业有限公司血凝和血凝抑制试验随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。
下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。
应用：用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：注意事项：一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。
对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。
方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。
每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。
二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。
因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。
另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。
四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。
血凝与血凝抑制试验的操作方法一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。
病毒的血凝及血凝抑制试验
病毒的血凝及血凝抑制试验IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】病毒的血凝及血凝抑制试验有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。
通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
[目的要求]掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。
[材料与试剂]孔“U”形或“V”形微量反应板，50L定量移液器，滴头，微型振荡器。
2.生理盐水，%鸡红细胞悬液。
3.新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）血球凝集(HA)试验1.在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L生理盐水。
2.于左侧第1孔加50L病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50L 至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L；第12孔为红细胞对照。
3.自右至左依次向各孔加入%鸡红细胞悬液50L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
表4-1病毒血凝试验的操作方法（单位：L）4.结果判定：从静置后10min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。
红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。
从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
(二)血球凝集抑制(HI)试验1.根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。
血凝抑制试验
血凝抑制（HI）试验简介（以禽流感病毒为例）一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA 蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml超纯水），101kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇血凝抑制实验报告一血凝试验操作程序1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μLPBS液。
2、吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。
第三排孔至第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温静置30min观察结果。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。
以完全凝集的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位二、血凝抑制试验操作程序1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。
2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25μLPBS。
3、在第1孔加入25μL被检血清，充分混匀后移出25μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清，作对照孔。
5、在第1~12孔各加入25μL4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。
6、每孔加入25μL1%的鸡红细胞悬液。
置于微量振荡器上轻轻混匀，室温静置40min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。
当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。
三、试验过程中的注意事项1样品的保存及试验前处理1.1采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。
病毒的血凝抑制试验
结果：以出现“-”的待检血清最高稀释倍数为血凝抑制效价。 第12孔为红细胞对照，红细胞沉于孔底成一小圆点。 第11孔为抗原对照，抗原与红细胞结合，在孔中可见均匀的凝集小颗粒。 然后观察1-10孔： - 红细胞完全沉于孔底成一个小圆点，倾斜45度，红细胞呈线状流下，则为阳性，即 抗体完全抑制了抗原与红细胞的结合。
4.在第1~11孔各加入25uL含4HAU抗原，轻叩反应板，使反应物混匀，室温下（20-25℃ ） 静置不少于30min，4℃ 不少于60min； 5.每孔加入25uL1%的红细胞悬液，轻晃混匀后，室温下（20-25℃ ）静置约40min，若环境 温度太高，放4℃静置60min。当第12孔中红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。
结果判定
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血凝抑制试验结果判定：鸡群HI滴度离散度较小时，而HI滴度较高，其保护水平也高【1】。
①HI滴度在4log2的鸡群，保护率约为50%。
②HI滴度在4log2以下的非免疫鸡群，保护率约为10%；免疫鸡群约为40%。
③HI滴度在6log2～10log2的鸡群，保护率达90%～100%。
④若鸡群有10%左右鸡出现11log2或以上的HI滴度，说明鸡群已经发生新城疫强毒的感染。
母源抗体对ND免疫应答的影响：【2】
①雏鸡在3日龄时抗体滴度最高，以后逐渐下降，每天大约下降13%。
因此，多数人主张在母源抗体消失之前的7日龄时做第一次免疫，在30～35日龄时做第二次接种。
但是，在ND流行的地区这样做是不安全的，因为母源抗体不足以抵抗强毒饲喂感染，所以有人主张对带有母源抗体的1日龄雏鸡采灭活苗免疫（据称灭活苗受循环抗体的影响较小），或者灭活苗和活苗同时接种（据称活苗能促进对灭活疫苗的免疫反应）。
不过，这是一种完全依赖疫苗的做法，在=大规模饲养的条件下不可取。
②有条件的鸡场根据对HI抗体免疫监测结果来确定初次免疫和再次免疫的时间，这是最科学的方法。
对鸡群抽样采血作HI试验，如果HI效价高于25时，进行首次免疫，几乎不产生免疫应答，可以选在23时接种。
【1】郑明球.家畜传染病学实验指导【M】.3版.北京：中国农业出版社，2009：111.
【2】陈溥言.兽医传染病学【M】.5版.北京：中国农业出版社，2007：351.。