第二章 中药分析中供试品的制备00

（4）洗脱
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例
新雪颗粒中栀子的鉴别
【处方】磁石 石膏 滑石 南寒水石 硝石 栀子等
取本品1.5g，研细，加正己烷10mL，充分 振摇，放置30分钟，滤过，滤渣加甲醇10mL， 超声处理 20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 5mL使溶解，离心 15 分钟（转速为每分钟 3000 转），上清液通过十八烷基硅烷键合硅胶固相 萃取小柱（500mg），以水10mL洗脱，弃去洗 液，再用甲醇 15mL 洗脱，收集洗脱液，蒸干， 残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。
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4、 固相萃取法
通过吸附剂与目标化合物之间的相互作用来保留/吸附
疏水作用：C18、C8、silica 离子交换作用：SAX, SCX,COOH，NH2等 物理吸收：Florsil、Alumina等
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Sep-Pak C18柱： 30-60um
一般操作程序：
（1）柱的活化
（2）上样 （3）清洗
第二章 中药分析中 供试品的制备
中药分析教研室
1
讲授提纲
第一节 取 样 第二节 样品的提取 第三节 样品的净化 第四节 样品提取液的浓缩 第五节 样品的衍生化 第六节 不同类型中药样品 的预处理特点
2
有效释放被 测成分，并 制成便于分 析测定状态
使试样的 形式及所 溶剂符合 分析测定 要求
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第六节
不同类型中药样品的 预处理特点
固体中药样品的预处理特点 半流体中药样品的预处理特点 液体中药样品的预处理特点
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6.1 固体中药样品的预处理特点 样品
9
第二节
连续回流提取法
样品提取
• 提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少， 操作简便 • 受热易分解的成分不宜使用
水蒸气蒸馏法
• 提取杂质少，操作简便 • 适用于挥发性成分，可利用盐析作用
消化法
• 降低有机物干扰，分干法和湿法 • 适用于以元素为测定对象
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供试品溶液的制备 取本品中粉约 4g ，精 密称定，置索氏提取器中， 加甲醇 40ml ，冷浸过夜， 再加甲醇适量，加热回流 4 小时，提取液回收溶剂并 浓缩至干，残渣加水 10ml…… （黄芪中黄芪甲苷）
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5、固相微萃取法
SPME 是在 SPE 基础上发展起来的，保留了 SPE的优点，克服了 SPE样品预处理技术的缺 陷，即无需柱填充物和使用溶剂解吸被测组分 的前处理，它能直接从样品中采集挥发和非挥 发性的化合物 ， 然后直接在 GC 、 GC/MS 、 HPLC 和 HPCE 上分析，集采样、提取、浓缩、 进样于一体。
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续例
气相色谱法测定鸦胆子中油酸的含量
放冷，精密加入正己烷2mL，振摇，加饱和氯化钠溶液 1mL，振摇，静置，取上层溶液作为对照品溶液。精密称 取苯甲酸苯酯适量，加正己烷制成每1mL含8mg的溶液， 作为内标溶液。精密量取对照品溶液和内标溶液各1mL， 摇匀，吸取1μL，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。
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（3）仪器和提取次数 鉴别——1次 分液漏斗 含量测定—— 3 ~ 4次
（4）乙醇提取液——先挥去乙醇 （5）防止和消除乳化
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离子对萃取：
有机酸 + 离子对试剂 生物碱
（离子对）水相
萃取
（离子对）有机相
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例，华山参片中生物碱含量测定 取本品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密量取 适量（约相当于12片的重量），置具塞锥形瓶内，精密加 入枸橼酸 - 磷酸氢二钠缓冲液（ pH4.0） 25mL，振摇 5分钟， 放置过夜，用干燥滤纸滤过，取续滤液，精密量取续滤液 2mL ，置分液漏斗中，精密加枸橼酸 - 磷酸氢二钠缓冲液 （ pH4.0 ） 10mL ，再精密加入 0.04%溴甲酚绿溶液 2mL ， 摇匀，用10mL三氯甲烷振摇提取 5分钟，待溶液完全分层 后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25mL量 瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5mL，依次滤入量瓶中， 并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
优点：费用低、操作简单、省时、环保 缺点：离子交换作用：SAX, SCX, COOH， NH2等
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第四节
方法 水浴蒸发 自然挥散 减压蒸发 气流吹蒸法
样品提取液的浓缩
适用成分 适用检测 薄层 薄层 残留分析 定量 温度低、速度快 氮气流可以防止氧化 干燥后的物料保持原 来的化学组成和物理 性质；热量消耗比其 他干燥方法少
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精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5mL，分别 置25mL量瓶中，各加0.1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC） 的乙腈溶液2.5mL，1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5mL， 摇匀，室温放置1小时后，加50%乙腈至刻度，摇匀。 取10mL，加正己烷10mL，振摇，放置10分钟，取下 层溶液，过滤，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取衍生化后的对照品溶液与供试 品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
回流提取法
• 提取效率高，时间短，但杂质较多 • 对热不稳定或具有挥发性成分不宜使用
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供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml， 超声处理(功率250W，频率50kHz)20分钟，滤过， 滤渣和滤纸再加甲醇10ml，同法超声处理一次， 滤过，加甲醇适量洗涤2次，合并滤液和洗液， 转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 （荆芥项下胡薄荷酮含量测定）
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3、 色谱法
（1）保留测定组分在柱上，洗去杂质， 再用适当溶剂洗下组分 （2）保留杂质于柱上---简便，精制效 果好，被普遍使用
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硅胶 200-100目,1-10g 氧化铝 机理：吸附 常用固定相 键合相硅胶 大孔吸附树脂-皂苷类 聚酰胺-黄酮类 硅藻土、纤维素
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例 烧伤灵酊中大黄素的含量测定
6
三、取样
气体
液体， 混合均 匀
取样
均匀合理
固体， 圆锥四 分法
半液体， 硅藻土拌
保留一半数量作 留样观察, 时间为 半年或一年
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第二节
浸渍法 超声提取法
样品提取
• 操作简单，适于热不稳定的样品 • 费时、费溶剂、提取不充分，含测少用 • 简便、快速、高效，通常30min • 应规定提取功率和提取频率
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备注
热稳定性好的成分 小体积提取液或挥发性 强溶剂，乙醚 对热不稳定的样品 少量液体，氮吹法特别 适用于结构不稳定、易 氧化的化学成分 热不稳定的生物样品
冷冻干燥
定量
例
当归流浸膏的鉴别
取本品3mL，加1%碳酸氢钠溶液50mL，充 分振荡，用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振 摇提取2次，每次20mL，合并乙醚液，挥干，残 渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。
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不同分析目的样品的提取
实验目的 供鉴别用 方法要求
针对待检成分的溶解 性能选择适宜的提取 溶剂，提取方法力求 简便、易操作 无机杂质检查用消化 法；有机杂质的检查 可按常规的鉴别或含 量测定的方法提取 特别强调待测成分要 提取完全
常用方法
超声，加热回流提取， 浸渍法
供杂质检查用
定量杂质：定量方法 定性杂质：鉴别方法
供含量测定用
超声处理法、加热回 流法和连续回流法
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第三节
样品的分离净化
沉淀法 蒸馏法 液-液萃取法 色谱法 消化法
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1、 沉淀法
利用某些试剂与被测成分 或杂质生成沉淀，分离沉淀或 保留溶液以得到精制的方法 例
水苏碱+雷氏盐
H+
生物碱雷氏盐沉淀
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2、 萃取法
利用被测成分与干扰成分溶解性能的不 同进行分离，使物质从一种溶剂转移到另一 种溶剂中，将测定组分提取出来的方法
【处方】虎杖 黄柏 冰片
精密量取本品2mL，加硅胶（色谱用，60～160 目） 1g ，置温水浴上蒸干，加在硅胶柱（色谱用， 60 ～ 160 目 ， 2g ， 内 径 为 1.7cm ） 上 ， 用 石 油 醚 （ 60 ～ 90℃） - 甲酸乙酯 - 甲酸（ 100:100:2 ）混合 液90mL分次减压洗脱，收集洗脱液，置100mL量 瓶中，并用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
• 一般药材和饮片：100～500g/包 • 粉末状药材和饮片：25～50g/包 • 贵重药材和饮片：5～10g/包
抽样单元的确定 抽样量
抽样方法
•中药材和饮片的抽样 •中药提取物的抽样 •中药制剂的抽样
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二、样品的粉碎
粉碎机 匀浆机
使所取样品均 匀、有代表性， 提高精密度和 准确度
研钵
能快而充分地 提取样品中被 测组分
例
含生物碱样品
H
水层
生物碱盐 氨水
H2O 弃去
氯仿
游离生物碱
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直接萃取：
（1）萃取溶剂的选择
正丁醇 —— 用于皂苷类 醋酸乙酯 —— 用于黄酮类 三氯甲烷 —— 用于生物碱类 乙醚、石油醚 —— 用于挥发油
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（2）水相pH的选择
酸性成分—— 比其pKa低1~2个pH单位 碱性成分—— 比其pKa高1~2个pH单位
样品预 处理
除杂、纯 化，提高 重现性和 准确度
富集、浓缩、 衍生化，提 高灵敏度和 选择性
最大限度地保留被测成分，除去干扰物质，将被测定成分浓 缩至高于分析方法最小检测限所需浓度
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第一节
样品粉碎
wk.baidu.com
取
提取
样
纯化
取样
科学性、 真实性、 代表性 均匀合理
鉴别
检查 含量测定
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一、抽样
常用术语
• 包装件、最小包装 • 批、抽样批 • 抽样单元、最终样品 • 随机抽样法：简单、分段 • 偶遇抽样法 • 针对性抽样
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第二节
超临界流体萃取法 （CO2）
样品提取
• 安全，价廉，易于操作，环保 • 较适用于中低极性成分的提取
加压溶剂萃取法
• 提取率高 • 价格昂贵
微波辅助萃取法
• 快速，省溶剂、多样品同时提取 • 萃取溶剂选择性高，可与HPLC相连
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加压溶剂萃取法设备
超临界流体萃取法 （CO2）设备
微波辅助萃取法设备
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第四节
种类 气 相
样品的衍生化
衍生化方法
硅烷化 酰化 烷基化 不对称衍生
衍生化目的
提高成分的挥发性
增加成分的稳定性
生成非对映异构体
例 气相色谱法测定鸦胆子中油酸的含量 －甲酯化 校正因子测定：取油酸对照品适量，精密称定，加正己烷 制成每1mL含3mg的溶液。精密量取5mL，置10mL具塞试 管中，用氮气吹干，加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2mL， 置60℃水浴中皂化25分钟，至油珠全部消失，放冷，加 15%三氯化硼乙醚溶液2mL，置60℃水浴中甲酯化2分钟，
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例 复脉定胶囊中黄芪含量测定 【处方】党参 黄芪 远志 桑椹 川芎 取本品20粒的内容物，精密称定，研细，混匀，取约 2g ，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇 40mL ，冷浸 过夜，再加甲醇适量，加热回流 4 小时，提取液回收溶 剂并浓缩至干，残渣加水 10mL ，微热使溶解，用水饱 和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇液， 用氨试剂充分洗涤2次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇 液蒸干，残渣加水 10mL使溶解，通过D101型大孔树脂 柱（内径为 1.5cm ，柱高为 12cm ），用水 50mL 洗脱， 再用 40%乙醇 30mL 洗脱，弃去洗脱液，继用 70%乙醇 100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转 移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
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种类 衍生化目的 反应要求
反应要求 不苛刻，且 迅速定量 单一衍生 化产物，副 产物不干扰 衍生化试 剂易得、通 用性好
衍生化方法
紫外衍 生化
荧光衍 生化
高 效 液 相
提高检测 的灵敏度 改善色谱 分离效果
在线 离线
※柱前 ※柱后
非对映 衍生化
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例16，HPLC法测定阿胶中氨基酸的含量 对照品溶液的制备：取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照 品、丙氨酸对照品、L-羟脯氨酸对照品适量，精密称定， 加0.1mol/L盐酸溶液制成每1mL分别含L-羟脯氨酸80μg、 甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的混合溶 液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.25g，精密称定，置 25mL量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液20mL，超声处理 （功率500W，频率40Hz）30分钟，放冷，加0.1mol/L盐 酸溶液至刻度，摇匀。精密量取2mL，置5mL安瓿中， 加盐酸2mL，150℃水解1小时，放冷，移至蒸发皿中， 用水10mL分次洗涤，洗液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加 0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25mL量瓶中，加 0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。