实验7 玻片凝集试验及抗酸染色

+ -
大肠杆菌
伤寒杆菌 副 甲
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⊕
+
+
-
-
+
-
±
副
乙
痢疾杆菌
操作方法
选择相应的血清进行玻片凝集实验：
1、玻片两端分别滴上一滴生理盐水和对应血清， 2、从琼脂斜面挑取少许培养物涂匀， 3、轻轻晃动玻片，血清混悬液中数分钟内出现肉眼 可见的颗粒状或絮状凝集现象为阳性。对照侧 （生理盐水）则均匀浑浊无凝集物出现，为阴性。 凝集反应原理 凝集反应结果判断

结核杆菌抗酸染色原理：
结核杆菌体内含有大量脂质（尤其分枝菌
酸），不易着色，经加热和延长染色时间着色
后，又能抵抗强脱色剂-盐酸酒精的脱色，使细
菌保持染上的红色。而非抗酸菌脱色后再被碱
性美兰液复染成为蓝色。
抗酸染色步骤：
结核病人痰涂片
干燥、固定
石碳酸复红加温染色3-5分钟
3%盐酸酒精脱色1分钟 碱性美兰复染1分钟
是否分解尿素产碱。
斜面培养基是为本次血清学鉴定实验提供菌种。
半固体培养 —— 动力试验
-
+
-
+
阳性：细菌能运动，有鞭毛。 阴性：细菌不能运动，无鞭毛。
蛋白胨水培养 —— 吲哚试验
操作：蛋白胨水细菌培养物 中加入靛基质指示剂，摇匀 后静置待液体分层，而后观 察指示剂颜色变化进行判断。
尿素酶试验
[重点难点]
重点：结核杆菌抗酸染色的操作方法 难点：玻片凝集试验的结果观察
上次结果观察
噬菌体实验结果观察
DH5a噬菌体
上次结果观察
半固体、蛋白胨水、尿素、斜面培养结果观察
半固体培养基观察细菌有无动力。
蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸
产生靛基质。
尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌
操作二

结核分枝杆菌抗酸染色
结核分枝杆菌
细长微弯杆菌，分枝状排列或聚集成团; G+，抗酸染色阳性; 专性需氧，营养要求高（L-J培养基）; 生长缓慢（18h/代）； 菌落呈乳白或淡黄色，菜花状; 液体培养时形成粗糙的皱纹菌膜。

结核分枝杆菌不产生内、外毒素，也不产生侵 袭性酶。致病性与细菌感染引起的炎症反应、菌体 成分、毒性代谢产物及机体免疫损伤等有关。 结核分枝杆菌引起结核病，为一种慢性传染病， 可累及全身各个系统，但以肺结核最为多见。临床表 现为低热盗汗，神疲乏力，食减消瘦，咳痰咯血。
抗酸染色结果：
结核分枝杆菌：红色
背景及非抗酸细菌：蓝色
抗酸染色结果观察
抗酸染色小结
石红酒兰三一一 复红需要加温染 结麻二菌显红色 其它病菌全着蓝
抗酸染色注意事项
加热出现蒸汽后，脱离火焰，若染液蒸发减 少，应再加染液，以免干涸。 流水自涂片部位上端清洗。 每个样本观察100-300视野。 注意污物消毒和处理。 石炭酸具有刺激性和腐蚀性，需注意安全。
分解尿素产氨 （酚红指示剂变红）
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+
操作一
肠道菌分离鉴定（四）
血清学鉴定——玻片凝集试验
根据前几次实验结果综合判定自己所接种的肠道菌可
能属于哪种肠道病原菌。
克氏双糖铁培养基
斜面（代表乳糖） 高层（代表葡萄糖） 半固体 蛋白胨水 靛基质
H2S ± ± ±Байду номын сангаас
尿素 -
动 力
初步判断
⊕ -
⊕ ⊕
+ + +
实验七 验证性实验
玻片凝集试验及抗酸染色
微生物学教研室 郭棵棵
实验内容
录像：艾滋病的预防 上次课实验结果观察 操作：1、肠道菌分离鉴定四——玻片凝集试验 2、抗酸染色 材料：1、诊断血清 2、结核杆菌痰液 1ml/6人
3、载玻片
[教学目标]
了解：艾滋病的预防方法 结核杆菌的生物学特点 掌握：1．肠道菌分离鉴定的血清学方法 ——玻片凝集试验的操作与结果观察 2. 抗酸染色的方法和意义