色谱法原理ppt课件
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化学键合固定相具有耐高温、耐溶剂的特点，在气 相色谱和液相色谱中广泛应用。 ⑵ 按分离机理分类 ① 吸附色谱法: 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸 附能力强弱不同而得以分离的方法。如气-固色谱法、 液-固色谱法属于此类。
② 分配色谱法：利用组分在固定液（固定相）中溶解
能力和在两相间的分配系数的不同而达到分离的方法。 在液-液分配色谱中，根据流动相和固定相相对极 性不同，又分为正相分配色谱和反向分配色谱。 正相分配色谱的固定相：强极性、亲水性物质或
③
超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱 超临界流体:指高于临界压力与临界温度时，物质
（SFC）。 的一种状态，具有气体的低黏度、液体的高密度以及 介于气、液之间的较高的扩散系数等特征。
④
化学键合相色谱(CBPC)通过化学反应将固定液键
合到载体表面，在载体表面形成均匀的固定相。这种固
定相色谱称为化学键合相色谱。
一种分析方法。
⑶ 色谱分离过程：
当流动相中携带混合物经过固定相时，就会与固 定相发生作用，由于各组分的结构性质（溶解度、极 性、蒸汽压和吸附能力等）不同，这种相互作用便有 强弱的差异，（也就是组分的分配系数不同）。因此
在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间
长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。
离原理不尽相同，但都是利用组分在两相间的分配系
数不同而分离的。
⑶ 按固定相的形态分类
① 柱色谱：固定相装在色谱柱（玻璃管或金属管）
内。柱色谱又分为填充柱色谱和开管柱色谱（毛细管 色谱）。前者把固定相均匀填充在管内；后者把固定 相附着在管壁，管中心形成一个细径孔道。 ② 平板色谱：固定相呈平板状，包括薄层色谱和纸色
2.色谱Baidu Nhomakorabea分类
⑴ 按两相状态分类
① 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC），根据
固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上 的一薄层有机化合物液体,又可分为气固色谱（GSC） 和气液色谱（GLC）。 ② 液体为流动相的色谱称液相色谱(LC)。同理,液相 色谱可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）。
的不断向前移动，在两相间反复进行溶解、挥发、吸
附和解析的过程。根据各组分在固定相中的分配系数不
同达到分离。分离后的各组分的浓度经检测器转变成电 信号而记录下来，得到一条随时间变化的曲线，称色谱 流出曲线或色谱图。 理想的色谱流出曲线应该是正态分布曲线。
⒈ 有关术语
⑴ 基线: 柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的 记录值，即图中O-t线。稳定的基线应该是一条水平直 线。 ⑵ 峰高: 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表 示，如图中B′A。 ⑶死时间tm: 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱 柱时,从进样到柱后出现浓度最大值所需的时间.如图 中O-A′。这种物质不被固定相吸附或溶解，其流速与 流动相的流速接近。测定流动相平均线速ū时可用往长
溶液；流动相：非极性、弱极性或亲脂性物质。相反则
是反向分配色谱。 ③ 离子交换色谱法：固定相是一种离子交换树脂，利 用组分在固定相上离子交换能力的差异而达到分离的方 法。如离子色谱法。
④ 凝胶色谱法（尺寸排阻色谱法）：固定相是一种
分子筛或凝胶，利用各组分的分子体积大小不同而进
行分离的方法。
⑤ 亲和色谱法：利用不同组分与固定相（固定化分 子）的高专属性亲合力进行分离的技术。常用于蛋白 质的分离。 此外还有离子对色谱、络合色谱，尽管它们的分
离。
在淋洗色谱分析中，色谱柱所发挥的分离性能较高
。它较适用多组分混合物的分离与分析，并容易从被分
离组分中除去淋洗剂而获得纯度较高的物质。因此，淋 洗色谱是最常使用的方法。
试样（A+B+C）混合物，E淋洗剂
C+E E B+E E A+E
E
② 迎头色谱法：以试样本身作流动相。混合物连续 流经色谱柱时，在固定相上的吸附能力或溶解能力弱 的组分，首先以纯的物质的状态流出柱，其次则是第 一组分和吸附能力或溶解能力较弱的第二组分的混合 物，以此类推。
谱。薄层色谱是将吸附剂涂布在玻璃板上或压成薄膜。
纸色谱是用滤纸作固定相或载体，把试样液体滴在滤纸 上，用溶剂将它展开，根据其在纸上有色斑点的位置与 大小，进行鉴定与定量测定。
⑷ 按色谱过程及动力学的分类
① 淋洗色谱法：淋洗剂在固定相上的吸附或溶解能力 比试样组分中任何一个组分的吸附或溶解能力要弱得 多。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力的不同， 被流动相冲洗出来的次序也不同，从而使各组分得到分
色谱法原理
本章基本要求
⒈ 理解混合物中各组分在色谱柱内分离的原因；
⒉ 了解色谱流出曲线和术语；
⒊ 理解柱效率的物理意义及计算方法； ⒋ 理解速率理论方程对实际分离的指导意义； ⒌ 掌握分离度的计算方法及影响分离度的重要色谱参 数。
6.1
概
述
P348
一 、色谱法及其分类
1. 色谱法:
俄国的植物学家茨维特 (M.Tsweet)于1903年首先 提出色谱法，它把植物绿叶的石油醚萃取液作试样，倒 入一根预先填充好的碳酸钙粉的玻璃管内，然后加入冲 洗剂石油醚，自上而下冲洗进行分离。由于在色谱柱中 ，萃取混合液的各组分性质差异，作用力小的先流出； 作用力大的后流出，最后分离成不同颜色的清晰色带。 因此这种方法称色谱法。许多气体、液体和固体样品都 能找到合适的色谱法进行分离。目前色谱法已广泛应用 于各个领域（生化），成为十分重要的分离分析手段。
ABCD ABC
AB
A
③ 顶替色谱法：加入一种对固定相的吸附或溶解能力
④ 较被分析组分强的顶替剂（流动相）通过色谱柱， 依 ⑤ 次将组分顶替出来，吸附或溶解能力弱的组分被置 换
⑥ 出来。
D B A+ B A
试样：A +B 顶替剂：D
6.2 色谱流出曲线及有关术语
一、色谱流出曲线
当试样注入色谱柱后，样品中各组分随着流动相
石 油 醚
经鉴定分离出 ① 胡罗卜素 ② 叶黄素 ③ 叶绿素A、B
⑴ 色谱法：这种借助在两相间分配系数的差异，而使
混合物中各组分获得分离的技术称为色谱分离技术。
⑵ 在色谱中，填充柱内的填料（固体或液体）称固定 相 ；携带样品流过固定相称流动相（气体、液体和超 临界流体）；装有固定相的柱称色谱柱。 随着色谱检 测技术的发展，色谱法已不仅是一种分离技术，也是
② 分配色谱法：利用组分在固定液（固定相）中溶解
能力和在两相间的分配系数的不同而达到分离的方法。 在液-液分配色谱中，根据流动相和固定相相对极 性不同，又分为正相分配色谱和反向分配色谱。 正相分配色谱的固定相：强极性、亲水性物质或
③
超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱 超临界流体:指高于临界压力与临界温度时，物质
（SFC）。 的一种状态，具有气体的低黏度、液体的高密度以及 介于气、液之间的较高的扩散系数等特征。
④
化学键合相色谱(CBPC)通过化学反应将固定液键
合到载体表面，在载体表面形成均匀的固定相。这种固
定相色谱称为化学键合相色谱。
一种分析方法。
⑶ 色谱分离过程：
当流动相中携带混合物经过固定相时，就会与固 定相发生作用，由于各组分的结构性质（溶解度、极 性、蒸汽压和吸附能力等）不同，这种相互作用便有 强弱的差异，（也就是组分的分配系数不同）。因此
在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间
长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。
离原理不尽相同，但都是利用组分在两相间的分配系
数不同而分离的。
⑶ 按固定相的形态分类
① 柱色谱：固定相装在色谱柱（玻璃管或金属管）
内。柱色谱又分为填充柱色谱和开管柱色谱（毛细管 色谱）。前者把固定相均匀填充在管内；后者把固定 相附着在管壁，管中心形成一个细径孔道。 ② 平板色谱：固定相呈平板状，包括薄层色谱和纸色
2.色谱Baidu Nhomakorabea分类
⑴ 按两相状态分类
① 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC），根据
固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上 的一薄层有机化合物液体,又可分为气固色谱（GSC） 和气液色谱（GLC）。 ② 液体为流动相的色谱称液相色谱(LC)。同理,液相 色谱可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）。
的不断向前移动，在两相间反复进行溶解、挥发、吸
附和解析的过程。根据各组分在固定相中的分配系数不
同达到分离。分离后的各组分的浓度经检测器转变成电 信号而记录下来，得到一条随时间变化的曲线，称色谱 流出曲线或色谱图。 理想的色谱流出曲线应该是正态分布曲线。
⒈ 有关术语
⑴ 基线: 柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的 记录值，即图中O-t线。稳定的基线应该是一条水平直 线。 ⑵ 峰高: 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表 示，如图中B′A。 ⑶死时间tm: 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱 柱时,从进样到柱后出现浓度最大值所需的时间.如图 中O-A′。这种物质不被固定相吸附或溶解，其流速与 流动相的流速接近。测定流动相平均线速ū时可用往长
溶液；流动相：非极性、弱极性或亲脂性物质。相反则
是反向分配色谱。 ③ 离子交换色谱法：固定相是一种离子交换树脂，利 用组分在固定相上离子交换能力的差异而达到分离的方 法。如离子色谱法。
④ 凝胶色谱法（尺寸排阻色谱法）：固定相是一种
分子筛或凝胶，利用各组分的分子体积大小不同而进
行分离的方法。
⑤ 亲和色谱法：利用不同组分与固定相（固定化分 子）的高专属性亲合力进行分离的技术。常用于蛋白 质的分离。 此外还有离子对色谱、络合色谱，尽管它们的分
离。
在淋洗色谱分析中，色谱柱所发挥的分离性能较高
。它较适用多组分混合物的分离与分析，并容易从被分
离组分中除去淋洗剂而获得纯度较高的物质。因此，淋 洗色谱是最常使用的方法。
试样（A+B+C）混合物，E淋洗剂
C+E E B+E E A+E
E
② 迎头色谱法：以试样本身作流动相。混合物连续 流经色谱柱时，在固定相上的吸附能力或溶解能力弱 的组分，首先以纯的物质的状态流出柱，其次则是第 一组分和吸附能力或溶解能力较弱的第二组分的混合 物，以此类推。
谱。薄层色谱是将吸附剂涂布在玻璃板上或压成薄膜。
纸色谱是用滤纸作固定相或载体，把试样液体滴在滤纸 上，用溶剂将它展开，根据其在纸上有色斑点的位置与 大小，进行鉴定与定量测定。
⑷ 按色谱过程及动力学的分类
① 淋洗色谱法：淋洗剂在固定相上的吸附或溶解能力 比试样组分中任何一个组分的吸附或溶解能力要弱得 多。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力的不同， 被流动相冲洗出来的次序也不同，从而使各组分得到分
色谱法原理
本章基本要求
⒈ 理解混合物中各组分在色谱柱内分离的原因；
⒉ 了解色谱流出曲线和术语；
⒊ 理解柱效率的物理意义及计算方法； ⒋ 理解速率理论方程对实际分离的指导意义； ⒌ 掌握分离度的计算方法及影响分离度的重要色谱参 数。
6.1
概
述
P348
一 、色谱法及其分类
1. 色谱法:
俄国的植物学家茨维特 (M.Tsweet)于1903年首先 提出色谱法，它把植物绿叶的石油醚萃取液作试样，倒 入一根预先填充好的碳酸钙粉的玻璃管内，然后加入冲 洗剂石油醚，自上而下冲洗进行分离。由于在色谱柱中 ，萃取混合液的各组分性质差异，作用力小的先流出； 作用力大的后流出，最后分离成不同颜色的清晰色带。 因此这种方法称色谱法。许多气体、液体和固体样品都 能找到合适的色谱法进行分离。目前色谱法已广泛应用 于各个领域（生化），成为十分重要的分离分析手段。
ABCD ABC
AB
A
③ 顶替色谱法：加入一种对固定相的吸附或溶解能力
④ 较被分析组分强的顶替剂（流动相）通过色谱柱， 依 ⑤ 次将组分顶替出来，吸附或溶解能力弱的组分被置 换
⑥ 出来。
D B A+ B A
试样：A +B 顶替剂：D
6.2 色谱流出曲线及有关术语
一、色谱流出曲线
当试样注入色谱柱后，样品中各组分随着流动相
石 油 醚
经鉴定分离出 ① 胡罗卜素 ② 叶黄素 ③ 叶绿素A、B
⑴ 色谱法：这种借助在两相间分配系数的差异，而使
混合物中各组分获得分离的技术称为色谱分离技术。
⑵ 在色谱中，填充柱内的填料（固体或液体）称固定 相 ；携带样品流过固定相称流动相（气体、液体和超 临界流体）；装有固定相的柱称色谱柱。 随着色谱检 测技术的发展，色谱法已不仅是一种分离技术，也是