实验1 大肠杆菌的培养和分离
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（1)简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接种方法是 稀释涂布平板法 ，获得 图B效果的接种方法是 平板划线法 。 （4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进 行 pH调整 ，接种前要进行高压蒸汽灭菌 ，在整个 微生物的分离和培养中，一定要注意在 无菌 条件下 进行。
3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是（ C ） A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 解析 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计 算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
4.检验培养基是否有杂菌污染的最有效方法是 （C ）
答案
（1)选取甘蔗外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后通过调整植物激素比 例，再分化形成芽和根，获得大量试管苗（或通过诱导大量形成胚状体，制成 人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗）。
（2)添加高浓度蔗糖（葡萄糖）；调低pH值；是否能在选择培养基上生长。
（3）提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长代表该菌落具有耐高糖和耐 酸的特性。
用革兰氏染色法将细菌分为: 革兰氏阳性菌：革兰氏染液染色后，再脱色处理， 细菌仍保留染色液的颜色；如金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性菌：如大肠杆菌（细胞壁薄，有荚膜、 兼性厌氧的肠道杆菌）
区别在细胞壁的成分不同
一、实验用具(材料 设备 用品)
• LB固体培养基 • 大肠杆菌菌液（LB液体
培养基） • 培养皿 • 接种环 • 酒精棉 • 酒精灯 • 镊子、火柴等
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要， 请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
种样品。
C.适宜温度下培养。
结果分析：
(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养其中，得到以下几种统计结果，正
确可信的是( )
A.一个平板，统计的菌落数是23
B.两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24
C.三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D.四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
固体平板。 步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。 步骤4：根据- 一一筛选出突变菌。
（3)上述步骤2、3和4的依据分别是＿。
(4）利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间 洁净 外，发酵过程中防止外来杂菌人侵还有哪些可行方法？（列举两种）
（5)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素， 但是酵母菌无法直接利用，原因是其＿。请提出解决该问题的方法。（列 举两种方法
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
包器材
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
灭菌
方法：
1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。玻璃 器 皿等耐热器具 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持 15min，培养基、无菌水等灭菌。具体见书P20
划线分离法，简单方便； 涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些
划线分离法
①
②
④
③ 为什么通过划线分离可得到单菌落？ 每划完一个区域要不要灼烧接种环？
涂布分离法
1、系列稀释操作
2、涂布平板操作
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
单菌落培养 倒置、恒温37℃培养
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
配制培养基 (计算,称量,熔化,调PH)
分类：1、固体培养基（分离、鉴定、计数、保存菌种） 液体培养基（扩大培养）
2、选择培养基与鉴定培养基
实例： “细菌喜荤，霉菌喜素”
细，以维持一定的渗透压； 霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
2.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，
然后过行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。
步骤如下：
A.制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
B.为了得到更加准确的结果，你选用
(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接
2.右图是微生物平板划线示意图。 划线的顺序为12345。下 列操作方法正确的是（ ） A.只有操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌 B.划线操作需在火焰上进行 C.在5区域中才可以得到所需菌落 D.在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌
解析 操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需在火焰旁进行，而不是火焰上； 所有的划线区都有可能得到所需菌落，只是5区相对较纯。本题考查微生物培养过 程中常用的方法之一即平板划线法。 答案 D
(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样
4.实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？
完成实验后，所有接触过细菌的器皿都必须先经过高压 灭菌后再洗涤，特别是培养基有可能被有害菌体污染， 在培养繁殖后，大量有害菌体会影响人畜健康，也会污 染环境，因此必须高压灭菌。使用后的废弃物也要经过 高压灭菌后再丢弃。对于取样器的取样头，通常是灭菌 后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤30min，再永清水洗 净，仍可再用。封口膜也可重复使用。
倒平板：冷却至60℃
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
接种前准备
• 紫外灯和过滤风杀菌30min • 用肥皂洗手并使用酒精消毒。 顺序：点燃酒精灯→酒精棉擦拭双手→酒精棉擦拭桌面
接种过程
菌种扩增
•37℃摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中）
(4)①利用突变菌的耐酸特性，降低培养基的pH值，达到抑菌的目的；②利用突 变菌的耐高糖特性，通过高渗环境达到抑菌目的；③保持厌氧环境，达到抑菌 目的；④在培养基中添加一些抑制物如特殊的抗生素，达到抑菌目的。
(5）缺乏相应分解酶系（或缺乏纤维素酶和半纤维素酶）。在酵母菌中转人分解酶 系相关基因；利用酶或微生物分解蔗渣；利用物理和化学方法分解蔗渣；将酵 母菌与其他能分解蔗渣的微生物混合发酵。
解析 在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复 组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不准确。 C项虽涂布了3个平板，但是其中1个平板的计数结果与另 两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此， 不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 答案 D
分析与讨论: 1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染？
选修一
生物技术实践
生物技术概述
生物技术也叫生物工程,是应用自然科学及工程学的 原理,以微生物、动物、植物作为反应器,将物料进 行加工,以提供产品为社会服务的技术。
例如：以酵母为反应器制酒、以醋杆菌为反应器制醋、以 转基因的大肠杆菌为反应器生产生长激素、以羊为反应器 生产人乳。
生物工程包括:基因工程、细胞工程、发酵工程、 酶工程和蛋白质工程。
（1）胆大心细，操作快捷 （2）注意灭菌操作原则，灭菌要彻底，尽量降低环境污染几
率，手和实验服要保持清洁，合理地减少操作时间，对 污染源的改善要考虑周到 （3）注意微生物的生长条件，如pH、渗透压、温度等。细菌 喜中性偏碱性环境，喜蛋白质丰富的物质营养，喜37℃ 的温度；而霉菌喜中性偏酸性环境，喜糖类丰富的物质营 养，喜25-30℃的温度。
分析与讨论:
2.在培养后如何判断是否有杂菌污染？
（1）从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色 等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标
（2）用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢 子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌 的关键指标
（3）上述方法较难区分同类的不同菌种，这时就需要借助化 学方法和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法，观察 孢子形态、孢子着生方式、菌丝生长方式、有无鞭毛、芽 孢、毒素及特异生理生化性质等
5.如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大 肠杆菌所污染？
转基因用的质粒，不是细菌中原有的质粒，而是通过改 造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，如抗氨苄青霉 素基因。转基因载体（质粒）转化进入大肠杆菌后，能 在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而未被转化的就不 能生长，其它没有抗氨苄青霉素基因的杂菌也不能生长， 这种设计保证了转基因工程菌的纯洁性。在获得转基因 工程菌后，如果为了选择高表达量菌株等进行分离，也 可使用含抗生素的培养基，这就保证了转基因工程菌不 被普通（无抗性基因）的大肠杆菌所污染。
A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在无菌的恒温箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒箱中培养 解析 若培养基中有杂菌污染，那么将未接种的培 养基放入无菌的恒温箱中培养，培养基表面会有菌 落出现。
5.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释 倍数为10-6的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 （ ）D A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B.涂布了两个平板，统计的菌落数分别是215和260，取平 均 值238 C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、 212、256， 取平均值163 D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250， 取平均值233
3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?
恒温培养时,培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿 则会使水蒸气凝结成水滴留在盖上;如果正放培养皿,则水分形成 的水滴会落入培养基表面并且扩散开来.如果培养皿也形成菌落, 则菌落中的菌会随水扩散,菌落间相互影响,很难再分成单落菌,达 不到分离的目的.
1. 为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴 油、沼气等已经列入我国未来10年的发展计划。广东省是我国甘蔗主产区之一。甘 蔗是一种高光效的植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方
地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁 （蔗糖）、酵母发酵﹑蒸馏﹑成品（燃料酒精）。 请根据上述材料，回答下列问题：
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接种方法是 稀释涂布平板法 ，获得 图B效果的接种方法是 平板划线法 。 （4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进 行 pH调整 ，接种前要进行高压蒸汽灭菌 ，在整个 微生物的分离和培养中，一定要注意在 无菌 条件下 进行。
3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是（ C ） A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 解析 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计 算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
4.检验培养基是否有杂菌污染的最有效方法是 （C ）
答案
（1)选取甘蔗外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后通过调整植物激素比 例，再分化形成芽和根，获得大量试管苗（或通过诱导大量形成胚状体，制成 人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗）。
（2)添加高浓度蔗糖（葡萄糖）；调低pH值；是否能在选择培养基上生长。
（3）提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长代表该菌落具有耐高糖和耐 酸的特性。
用革兰氏染色法将细菌分为: 革兰氏阳性菌：革兰氏染液染色后，再脱色处理， 细菌仍保留染色液的颜色；如金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性菌：如大肠杆菌（细胞壁薄，有荚膜、 兼性厌氧的肠道杆菌）
区别在细胞壁的成分不同
一、实验用具(材料 设备 用品)
• LB固体培养基 • 大肠杆菌菌液（LB液体
培养基） • 培养皿 • 接种环 • 酒精棉 • 酒精灯 • 镊子、火柴等
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要， 请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
种样品。
C.适宜温度下培养。
结果分析：
(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养其中，得到以下几种统计结果，正
确可信的是( )
A.一个平板，统计的菌落数是23
B.两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24
C.三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D.四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
固体平板。 步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。 步骤4：根据- 一一筛选出突变菌。
（3)上述步骤2、3和4的依据分别是＿。
(4）利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间 洁净 外，发酵过程中防止外来杂菌人侵还有哪些可行方法？（列举两种）
（5)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素， 但是酵母菌无法直接利用，原因是其＿。请提出解决该问题的方法。（列 举两种方法
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
包器材
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
灭菌
方法：
1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。玻璃 器 皿等耐热器具 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持 15min，培养基、无菌水等灭菌。具体见书P20
划线分离法，简单方便； 涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些
划线分离法
①
②
④
③ 为什么通过划线分离可得到单菌落？ 每划完一个区域要不要灼烧接种环？
涂布分离法
1、系列稀释操作
2、涂布平板操作
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
单菌落培养 倒置、恒温37℃培养
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
配制培养基 (计算,称量,熔化,调PH)
分类：1、固体培养基（分离、鉴定、计数、保存菌种） 液体培养基（扩大培养）
2、选择培养基与鉴定培养基
实例： “细菌喜荤，霉菌喜素”
细，以维持一定的渗透压； 霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
2.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，
然后过行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。
步骤如下：
A.制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
B.为了得到更加准确的结果，你选用
(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接
2.右图是微生物平板划线示意图。 划线的顺序为12345。下 列操作方法正确的是（ ） A.只有操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌 B.划线操作需在火焰上进行 C.在5区域中才可以得到所需菌落 D.在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌
解析 操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需在火焰旁进行，而不是火焰上； 所有的划线区都有可能得到所需菌落，只是5区相对较纯。本题考查微生物培养过 程中常用的方法之一即平板划线法。 答案 D
(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样
4.实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？
完成实验后，所有接触过细菌的器皿都必须先经过高压 灭菌后再洗涤，特别是培养基有可能被有害菌体污染， 在培养繁殖后，大量有害菌体会影响人畜健康，也会污 染环境，因此必须高压灭菌。使用后的废弃物也要经过 高压灭菌后再丢弃。对于取样器的取样头，通常是灭菌 后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤30min，再永清水洗 净，仍可再用。封口膜也可重复使用。
倒平板：冷却至60℃
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
接种前准备
• 紫外灯和过滤风杀菌30min • 用肥皂洗手并使用酒精消毒。 顺序：点燃酒精灯→酒精棉擦拭双手→酒精棉擦拭桌面
接种过程
菌种扩增
•37℃摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中）
(4)①利用突变菌的耐酸特性，降低培养基的pH值，达到抑菌的目的；②利用突 变菌的耐高糖特性，通过高渗环境达到抑菌目的；③保持厌氧环境，达到抑菌 目的；④在培养基中添加一些抑制物如特殊的抗生素，达到抑菌目的。
(5）缺乏相应分解酶系（或缺乏纤维素酶和半纤维素酶）。在酵母菌中转人分解酶 系相关基因；利用酶或微生物分解蔗渣；利用物理和化学方法分解蔗渣；将酵 母菌与其他能分解蔗渣的微生物混合发酵。
解析 在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复 组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不准确。 C项虽涂布了3个平板，但是其中1个平板的计数结果与另 两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此， 不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 答案 D
分析与讨论: 1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染？
选修一
生物技术实践
生物技术概述
生物技术也叫生物工程,是应用自然科学及工程学的 原理,以微生物、动物、植物作为反应器,将物料进 行加工,以提供产品为社会服务的技术。
例如：以酵母为反应器制酒、以醋杆菌为反应器制醋、以 转基因的大肠杆菌为反应器生产生长激素、以羊为反应器 生产人乳。
生物工程包括:基因工程、细胞工程、发酵工程、 酶工程和蛋白质工程。
（1）胆大心细，操作快捷 （2）注意灭菌操作原则，灭菌要彻底，尽量降低环境污染几
率，手和实验服要保持清洁，合理地减少操作时间，对 污染源的改善要考虑周到 （3）注意微生物的生长条件，如pH、渗透压、温度等。细菌 喜中性偏碱性环境，喜蛋白质丰富的物质营养，喜37℃ 的温度；而霉菌喜中性偏酸性环境，喜糖类丰富的物质营 养，喜25-30℃的温度。
分析与讨论:
2.在培养后如何判断是否有杂菌污染？
（1）从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色 等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标
（2）用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢 子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌 的关键指标
（3）上述方法较难区分同类的不同菌种，这时就需要借助化 学方法和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法，观察 孢子形态、孢子着生方式、菌丝生长方式、有无鞭毛、芽 孢、毒素及特异生理生化性质等
5.如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大 肠杆菌所污染？
转基因用的质粒，不是细菌中原有的质粒，而是通过改 造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，如抗氨苄青霉 素基因。转基因载体（质粒）转化进入大肠杆菌后，能 在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而未被转化的就不 能生长，其它没有抗氨苄青霉素基因的杂菌也不能生长， 这种设计保证了转基因工程菌的纯洁性。在获得转基因 工程菌后，如果为了选择高表达量菌株等进行分离，也 可使用含抗生素的培养基，这就保证了转基因工程菌不 被普通（无抗性基因）的大肠杆菌所污染。
A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在无菌的恒温箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒箱中培养 解析 若培养基中有杂菌污染，那么将未接种的培 养基放入无菌的恒温箱中培养，培养基表面会有菌 落出现。
5.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释 倍数为10-6的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 （ ）D A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B.涂布了两个平板，统计的菌落数分别是215和260，取平 均 值238 C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、 212、256， 取平均值163 D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250， 取平均值233
3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?
恒温培养时,培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿 则会使水蒸气凝结成水滴留在盖上;如果正放培养皿,则水分形成 的水滴会落入培养基表面并且扩散开来.如果培养皿也形成菌落, 则菌落中的菌会随水扩散,菌落间相互影响,很难再分成单落菌,达 不到分离的目的.
1. 为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴 油、沼气等已经列入我国未来10年的发展计划。广东省是我国甘蔗主产区之一。甘 蔗是一种高光效的植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方
地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁 （蔗糖）、酵母发酵﹑蒸馏﹑成品（燃料酒精）。 请根据上述材料，回答下列问题：